一种黄连素化合物在制备血浆型激肽释放酶抑制剂的药物中的应用的制作方法

本申请涉及生物医药，具体涉及一种黄连素化合物在制备血浆型激肽释放酶抑制剂的药物中的应用。

背景技术：

1、血浆型激肽释放酶(plasma kallikrein；pk)属于丝氨酸蛋白酶超家族，其由肝细胞特异性表达，主要分布于血液循环中。研究发现，pk可作用于高分子量激肽原生成缓激肽(bk)，后者进而通过bk受体激活一氧化氮-环磷鸟苷和前列环素-环磷酸腺苷在内的信号转导系统，诱发血管扩张、参与血液凝固和纤维蛋白溶解等生物学效应。除了促进bk生成外，pk亦可通过接触途径促进以凝血因子fxii为中心的内源性凝血级联通路的活化，促进血栓形成。pk的上述作用构成了“血栓性炎症假说”的核心，与缺血性脑卒中的病因病理密切关联。

2、在脑缺血再灌注过程中，血管内皮受损，暴露内皮下胶原，血小板通过胶原-血管性血友病因子-血小板糖蛋白ib轴被活化；同时，血小板活化后所暴露出的带负电荷的无机磷酸盐表面可促使fxii转为有活性的fxii(fxiia)，进而启动内源性凝血级联通路，促进血栓形成。fxiia的形成可促进pk的生成，后者一方面通过正反馈的方式进一步促进fxii的活化，一方面通过促进bk的生成，启动bk受体后的一系列信号级联，上调促炎因子，活化胶质细胞，最终导致脑神经元损伤。

3、黄连素(berberine)是从毛茛科黄连植物根状茎中提取的生物碱，又名小檗碱，具有多种药理活性和医疗应用。第一，黄连素对多种细菌、真菌和寄生虫具有抑制作用。它可以抑制细菌的生长和繁殖，对一些常见的致病菌如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等具有较强的抗菌活性。第二，黄连素具有抗炎效果，可以抑制炎症反应和炎症介质的释放，减轻炎症症状。这使得黄连素在治疗一些炎症性疾病如炎症性肠病、关节炎等方面具有潜在应用。第三，黄连素具有抗氧化活性，可以中和自由基，减少氧化应激对细胞和组织的损伤。这种抗氧化活性有助于保护细胞免受氧化损伤，对心血管疾病、神经退行性疾病等有一定的保护作用。第四，黄连素被广泛应用于调节血糖和血脂的领域。它可以提高胰岛素的敏感性，促进葡萄糖的吸收和利用，并抑制肝糖原的合成。此外，黄连素还可以降低血脂和胆固醇水平，对于预防和治疗高血脂、高胆固醇等疾病有一定效果。

4、黄连素还被研究用于抗肿瘤、抗心律失常、改善消化功能等方面，但仍需更多研究来验证其安全性和有效性。黄连素对缺血性脑卒中具有显著治疗作用，其作用机制涉及激活腺苷酸活化蛋白激酶(ampk)、调控其下游靶点如nrf-2、nfκb、pi3k/akt以及mtor等。然而，黄连素是否能直接作用于pk，并不清楚。

5、基于此，需要一种新技术方案，应用天然化合物制备血浆型激肽释放酶抑制剂的药物，以满足缺血性脑卒中的临床应用。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明应用商品化血浆型激肽释放酶特异性的荧光底物，观察黄连素对pk活性的影响。

2、本发明提供了一种黄连素在制备血浆型激肽释放酶抑制剂的药物中的应用。

3、优选的，所述黄连素在tris-hcl缓冲体系下孵育，所述tris-hcl缓冲体系包括tris-hcl、nacl、cacl2或bsa。

4、本发明中，所述药学上可接受的盐通过药学上可接受的碱加成制备，所述药学上可接受的碱加成盐包括：锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、铝盐、镁盐、锌盐、铋盐、铵盐或二乙醇胺盐。

5、本发明中，所述的药学上可接受的盐通过药学上可接受的酸加成制备，所述药学上可接受的酸包括无机酸或有机酸，所述无机酸包括：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、碳酸、磷酸、亚磷酸或硫酸；所述有机酸包括：乙酸、丙酸、草酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、水杨酸、酒石酸、甲磺酸、异烟酸、酸式柠檬酸、油酸、单宁酸、泛酸、酒石酸氢、抗坏血酸、龙胆酸、富马酸、葡糖酸、糖酸、甲酸、乙磺酸、双羟萘酸或氨基酸。

6、本发明中，所述药物还进一步包含药学上可接受的赋形剂。

7、本发明中，所述化合物或其药学上可接受的盐可以任何合适的途径给予受试者，例如口服。

8、本发明中，所述化合物可通过抑制颈总动脉血栓形成治疗相关疾病。

9、所述化合物或其药学上可接受的盐可以制成各种合适的剂型，例如，片剂、胶囊剂、静脉注射剂、腹腔注射剂、吸入剂、雾化剂、冻干剂、贴剂、凝胶剂、喷雾剂或栓剂。

10、除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。

11、这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

12、术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物与相对无毒的、药学上可接受的酸或碱制备得到的盐。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的药学上可接受的碱与这类化合物的原型接触的方式获得碱加成盐。当本发明的化合物中含有相对酸性和相对碱性的官能团时，可以被转换成碱加成盐或酸加成盐。具体可参见berge et al.,"pharmaceutical salts",journal ofpharmaceutical science 66:1-19(1977)、或、handbook of pharmaceutical salts：properties、selection，and use(p.heinrich stahl and camille g.wermuth，ed.，wiley-vch,2022)。

13、术语“治疗”指治疗性疗法。涉及具体病症时，治疗指：(1)缓解疾病或者病症的一种或多种生物学表现，(2)干扰(a)导致或引起病症的生物级联中的一个或多个点或(b)病症的一种或多种生物学表现，(3)改善与病症相关的一种或多种症状、影响或副作用，或者与病症或其治疗相关的一种或多种症状、影响或副作用，或(4)减缓病症或者病症的一种或多种生物学表现发展。

14、在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

15、本发明所用试剂和原料均市售可得。

16、本发明的积极进步效果在于：本方面发现黄连素对pk具有明显抑制作用，这对其在疾病(如缺血性脑卒中)中的治疗作用具有重要的研究价值和应用前景。

技术特征：

1.一种黄连素在制备血浆型激肽释放酶抑制剂的药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述黄连素在tris-hcl缓冲体系下孵育，所述tris-hcl缓冲体系包括tris-hcl、nacl、cacl2或bsa。

3.如权利要求1～2任一项所述的应用，其特征在于，所述药物还进一步包含药学上可接受的赋形剂。

技术总结
本申请提供一种黄连素在制备血浆型激肽释放酶抑制剂的药物中的应用，应用于生物医药技术领域，其中，通过将不同浓度的黄连素与大鼠血清混合，25℃条件下在Tris‑HCl缓冲体系内孵育15min(50mM Tris‑HCl,250mM NaCl,1.5μM BSA；pH 7.5)，然后加入特异性荧光底物(Z‑Phe‑Arg 7‑酰胺基‑4‑甲基香豆素盐酸盐；终浓度200μM)，应用酶标仪在480nm处检测荧光强度(激发光波长为360nm)。黄连素的终浓度(μg/mL)为：0.1,0.3,1.0,3.0,10.0,30.0,100.0,300.0,1000.0和3000.0。黄连素抑制PK酶活性的IC50(μg/mL)为56.04±1.05，Hill Slope为1.08±0.05，证明黄连素对PK具有明显抑制作用。

技术研发人员：王志勇,马淑梅,祁良倩,郑远朋,潘焕焕,史航,孙曼,马彤
受保护的技术使用者：上海泰楚生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15