本发明涉及医疗药物制备的，尤其涉及一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂。
背景技术：
1、过敏性鼻炎(allergicrhinitis,ar)是世界范围内日益严重的公共卫生，医疗和经济问题。
2、传统中药辛夷具有散风寒、通鼻窍作用，其有效成分辛夷脂素则具有抗炎、抗过敏等功效。
3、过敏性鼻炎是指机体在接触过敏原后，由ige介导产生的鼻腔、鼻窦黏膜非感染性炎性病变为主的疾病。近年来我市过敏性鼻炎患病率呈逐年增加，我国发病率为17.6％，而内蒙古草原地区发病率为32.4％，7-9月高发，黄花蒿类为主要致敏原。目前过敏性鼻炎的发病机制尚不明确，治疗手段较为单一。
技术实现思路
1、本发明公开一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，旨在解决背景技术中提出来的过敏性鼻炎的发病机制尚不明确，治疗手段较为单一的技术问题。
2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
3、一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，包括细胞学实验、动物体内模型实验、体外细胞模型实验和动物治疗实验，细胞学实验的实验内容主要包括鼻腔黏膜细胞吞噬实验、检测鼻腔黏膜细胞活性实验和鼻腔黏膜细胞功能极化实验，动物体内模型实验的内容为：将sd大鼠，随机分为正常对照组、过敏性鼻炎造模组和过敏性鼻炎造模治疗组，在造模前，对治疗组动物模型鼻腔黏膜取材，取大鼠静脉血，通过对鼻腔黏膜形态学及血清炎性指标、自噬指标进行评估，给与造模大鼠辛夷脂素制剂(50mg/kg)滴鼻7天后，对治疗组动物模型断头处死后取材，留取静脉血，观察鼻腔黏膜的炎症调控，并取鼻腔黏膜组织行病理学检查，观察造模组和治疗组鼻腔黏膜形态学改变。
4、在一个优选的方案中，鼻腔黏膜细胞吞噬实验：观察鼻腔黏膜细胞对辛夷脂素制剂的吞噬情况及其在细胞内的稳定情况，检测鼻腔黏膜细胞活性实验：鼻腔黏膜细胞与不同浓度的辛夷脂素制剂溶液孵育，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线，鼻腔黏膜细胞功能极化实验：鼻腔黏膜细胞的表型和功能，对比正常鼻腔黏膜细胞和炎症模型，观察辛夷脂素制剂作用后的鼻腔黏膜细胞的形态和炎症因子及自噬蛋白表达。
5、在一个优选的方案中，体外细胞模型实验的具体内容包括有体外过敏性鼻炎细胞模型构建、小胶质细胞的凋亡检测和动物治疗实验，体外过敏性鼻炎细胞模型构建具体包括以下内容：在37℃、5％co2条件下，用10％胎牛血清的rpmi-1640培养基对大鼠鼻腔黏膜细胞进行培养，将5mg/l的卵清蛋白(ova)作用于鼻腔黏膜上皮细胞6h，诱导产生炎症细胞因子tnf-α，从而构建ar细胞模型。
6、在一个优选的方案中，小胶质细胞的凋亡检测包括以下内容：取对数生长期的鼻腔黏膜上皮细胞制成细胞悬液，接种于96孔培养板，待24h后，加入含不同药物的无fbs培养基，实验细胞设为：1)正常对照组，2)ova模型组，3)ova+辛夷脂素治疗组，通过检测细胞活性和凋亡情况，观察药物的抗炎作用，检测细胞活性和凋亡情况的方法包括有tunel检测方法、westernblot检测方法和elisa法，tunel检测方法：处理24h后，吸去培养基，pbs洗3次，4％多聚甲醛固定10min，pbs洗3次；滴加0.1％tritonx-100，冰浴2min；每个样品滴加50μltunel检测液，37℃避光孵育60min，pbs洗3次；甘油封片后荧光显微镜下观察、拍照，westernblot检测方法：鼻腔黏膜细胞分组进行不同药物处理后，提取细胞总蛋白，用bca试剂盒对蛋白样品定量，取等量蛋白20μg上样于12％的聚丙烯酰胺凝胶，以120mv恒压电泳1h，200ma恒流转膜50min，膜于含5％20ml脱脂奶粉的tbst封闭液室温封闭1.5h，加一抗(1：10000)4℃过夜，tbst洗膜10min×3次，加hrp标记的二抗(1：10000)室温1h，tbst洗膜10min×3次，加电化学发光试剂(ecl)，x胶片曝光，洗片，用分析软件进行定量分析，以和β-actin的比值代表目的蛋白tnf-α、il-4和lc3的相对含量，elisa法：取对数生长期的鼻腔黏膜上皮细胞制成细胞悬液,接种于6孔培养板(105/孔)，48h后，加入不同药物处理后，继续培养24h，收集细胞上清液,一氧化氮(no)一步法试剂盒检测细胞上清液中no的含量，elisa试剂盒检测细胞上清液中tnf-α和il-4和lc3的相对含量。
7、在一个优选的方案中，动物治疗实验具体包括以下内容：建立大鼠ar模型，取质量250g左右的健康雄性sd大鼠，用30mgova作抗原，氢氧化铝[al(oh)3]粉末3g作佐剂，加生理盐水100ml制成混悬液，每只豚鼠ip1ml，隔日1次，共7次进行基础致敏，配制2％ova生理盐水滴入双侧鼻腔，每侧0.05ml，每日1次，共7次，进行滴鼻激发，造模成功后，隔天给予ova1g/l滴鼻以维持对鼻黏膜的刺激。给与造模大鼠辛夷脂素制剂(50mg/kg)滴鼻7天后，对治疗组动物模型断头处死后取材，留取静脉血，治疗7天后，对各组大鼠进行心脏灌注固定，并取鼻腔黏膜组织进行冷冻切片，厚度为5μm，室温放置5min后，用4％多聚甲醛固定15min，pbs洗3次，切片加入0.25％triton孵育10min，pbs洗3次，然后加入5％20ml脱脂奶粉的tbst；封闭液室温封闭1.5h，按照1：100加入pe-cy5标记的cd32抗体和fitc标记的cd206抗体，4℃过夜，pbs洗3次洗去抗体，加入dapi染色10min，再用pbs洗3次，封片固定，共聚焦显微镜下观察小胶质细胞的表型变化和形态学改变。
8、由上可知，本发明提供的辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂应用卵白蛋白刺激大鼠鼻腔黏膜制备过敏性鼻炎动物模型，黄花蒿过敏原刺激大鼠鼻腔黏膜，应用辛夷脂素制剂滴鼻治疗观察其鼻腔黏膜形态学变化及血清特异性炎性因子变化。本研究通过动物实验进一步验证辛夷脂素对过敏性鼻炎大鼠模型具有治疗作用，为过敏性鼻炎的针对性治疗提供参考的技术效果。
1.一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，包括细胞学实验、动物体内模型实验、体外细胞模型实验和动物治疗实验，其特征在于，所述细胞学实验的实验内容主要包括鼻腔黏膜细胞吞噬实验、检测鼻腔黏膜细胞活性实验和鼻腔黏膜细胞功能极化实验，所述动物体内模型实验的内容为：将sd大鼠，随机分为正常对照组、过敏性鼻炎造模组和过敏性鼻炎造模治疗组，在造模前，对治疗组动物模型鼻腔黏膜取材，取大鼠静脉血，通过对鼻腔黏膜形态学及血清炎性指标、自噬指标进行评估，给与造模大鼠辛夷脂素制剂(50mg/kg)滴鼻7天后，对治疗组动物模型断头处死后取材，留取静脉血，观察鼻腔黏膜的炎症调控，并取鼻腔黏膜组织行病理学检查，观察造模组和治疗组鼻腔黏膜形态学改变。
2.根据权利要求1所述的一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，其特征在于，所述鼻腔黏膜细胞吞噬实验：观察鼻腔黏膜细胞对辛夷脂素制剂的吞噬情况及其在细胞内的稳定情况。
3.根据权利要求2所述的一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，其特征在于，所述检测鼻腔黏膜细胞活性实验：鼻腔黏膜细胞与不同浓度的辛夷脂素制剂溶液孵育，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
4.根据权利要求3所述的一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，其特征在于，所述鼻腔黏膜细胞功能极化实验：鼻腔黏膜细胞的表型和功能，对比正常鼻腔黏膜细胞和炎症模型，观察辛夷脂素制剂作用后的鼻腔黏膜细胞的形态和炎症因子及自噬蛋白表达。
5.根据权利要求1所述的一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，其特征在于，所述体外细胞模型实验的具体内容包括有体外过敏性鼻炎细胞模型构建、小胶质细胞的凋亡检测和动物治疗实验，所述体外过敏性鼻炎细胞模型构建具体包括以下内容：在37℃、5％co2条件下，用10％胎牛血清的rpmi-1640培养基对大鼠鼻腔黏膜细胞进行培养，将5mg/l的卵清蛋白(ova)作用于鼻腔黏膜上皮细胞6h，诱导产生炎症细胞因子tnf-α，从而构建ar细胞模型。
6.根据权利要求5所述的一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，其特征在于，所述小胶质细胞的凋亡检测包括以下内容：取对数生长期的鼻腔黏膜上皮细胞制成细胞悬液，接种于96孔培养板，待24h后，加入含不同药物的无fbs培养基，实验细胞设为：正常对照组、ova模型组和ova+辛夷脂素治疗组，通过检测细胞活性和凋亡情况，观察药物的抗炎作用。
7.根据权利要求6所述的一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，其特征在于，所述检测细胞活性和凋亡情况的方法包括有tunel检测方法、western blot检测方法和elisa法，所述tunel检测方法：处理24h后，吸去培养基，pbs洗3次，4％多聚甲醛固定10min，pbs洗3次；滴加0.1％tritonx-100，冰浴2min；每个样品滴加50μltunel检测液，37℃避光孵育60min，pbs洗3次；甘油封片后荧光显微镜下观察、拍照。
8.根据权利要求7所述的一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，其特征在于，所述western blot检测方法：鼻腔黏膜细胞分组进行不同药物处理后，提取细胞总蛋白，用bca试剂盒对蛋白样品定量，取等量蛋白20μg上样于12％的聚丙烯酰胺凝胶，以120mv恒压电泳1h，200ma恒流转膜50min，膜于含5％20ml脱脂奶粉的tbst封闭液室温封闭1.5h，加一抗(1：10000)4℃过夜，tbst洗膜10min×3次，加hrp标记的二抗(1：10000)室温1h，tbst洗膜10min×3次，加电化学发光试剂，x胶片曝光，洗片，用分析软件进行定量分析，以和β-actin的比值代表目的蛋白tnf-α、il-4和lc3的相对含量。
9.根据权利要求8所述的一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，其特征在于，所述elisa法：取对数生长期的鼻腔黏膜上皮细胞制成细胞悬液,接种于6孔培养板，48h后，加入不同药物处理后，继续培养24h，收集细胞上清液,一氧化氮一步法试剂盒检测细胞上清液中no的含量，elisa试剂盒检测细胞上清液中tnf-α和il-4和lc3的相对含量。
10.根据权利要求8所述的一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，其特征在于，所述动物治疗实验具体包括以下内容：建立大鼠ar模型，取质量250g左右的健康雄性sd大鼠，用30mgova作抗原，氢氧化铝粉末3g作佐剂，加生理盐水100ml制成混悬液，每只豚鼠ip1ml，隔日1次，共7次进行基础致敏，配制2％ova生理盐水滴入双侧鼻腔，每侧0.05ml，每日1次，共7次，进行滴鼻激发，造模成功后，隔天给予ova1g/l滴鼻以维持对鼻黏膜的刺激。给与造模大鼠辛夷脂素制剂滴鼻7天后，对治疗组动物模型断头处死后取材，留取静脉血，治疗7天后，对各组大鼠进行心脏灌注固定，并取鼻腔黏膜组织进行冷冻切片，厚度为5μm，室温放置5min后，用4％多聚甲醛固定15min，pbs洗3次，切片加入0.25％triton孵育10min，pbs洗3次，然后加入5％20ml脱脂奶粉的tbst；封闭液室温封闭1.5h，按照1：100加入pe-cy5标记的cd32抗体和fitc标记的cd206抗体，4℃过夜，pbs洗3次洗去抗体，加入dapi染色10min，再用pbs洗3次，封片固定，共聚焦显微镜下观察小胶质细胞的表型变化和形态学改变。