一种具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂的制作方法

本发明涉及微生物制剂，尤其涉及一种具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂。

背景技术：

1、随着社会经济的发展和人们饮食结构的改变，便秘作为一种严重影响生活质量的疾病，受到越来越多的关注。便秘主要表现为肠道内容物的传输较慢，对粪便中水分的吸收增加，进而导致排便次数以及排便频率降低，同时伴有腹胀、粪便干结的症状，对于长期便秘的患者，严重者常伴失眠、焦虑、抑郁、易怒；其次，肠道中大量代谢产物会影响肠道发育甚至大脑功能，对整个心脑系统都会产生不利作用。

2、目前，便秘的常用临床治疗方法是服泻药和促动力药，但这类泻药常会引起依赖性，停药后加重便秘，甚至带有恶心、腹痛、腹泻等副作用。益生菌如两歧双歧杆菌作为一种副作用较小、缓解效果较为明显的治疗手段，目前已逐渐得到大家的广泛认可。但现有技术中，常利用混菌或者菌与中药或益生元结合使用用于预防和缓解便秘，二利用单菌缓解便秘的研究较为少见，基于此，我们提出了一种无副作用且具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

3、一种具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂，包括以下重量组成分：载体8～20份、两歧双歧杆菌0.5～1.5份、低聚异麦芽糖2～5份、乳糖醇1～2份、菊粉0.8～2份、水苏糖0.1～0.3份，所述载体为可食用植物淀粉、医用填充剂、医用润湿剂、矫味剂中的一种或两种以上；

4、所述制剂的制备方法为：按重量组份将载体、低聚异麦芽糖、乳糖醇、菊粉、水苏糖混合后除湿得到混合料，将混合料与两歧双歧杆菌混合均匀、封装。

5、优选地：所述两歧双歧杆菌的培养方法，包括以下步骤：

6、a1：准备材料；

7、a2：菌种活化：选用活化培养基活化保藏菌种，于37℃厌氧培养60-72h得到单菌落，按5％体积比接种量接种，菌种使用前活化2-4代，活化培养控制在48h以内；

8、a3：菌种培养：将活化后的菌种按体积比5％的接种量接种至装有2000ml种子培养基中，再将之置于培养箱中，(37±1)℃厌氧培养12-36h；

9、a4：获取发酵液；

10、a5：将发酵液降至2-15℃后，于6500r/min、4℃环境下离心8-15min，去上清后对菌泥进行乳化及干燥。

11、优选地：所述材料包括菌种、活化培养基、发酵培养基和保护剂；

12、所述菌种为两歧双歧杆菌bb-g90；

13、所述活化培养基的制备原料，包括以下重量组份：胰蛋白胨1份、小牛膏粉0.4份、酵母膏0.3份、乳糖0.3份、nacl0.4份、半胱氨酸盐酸盐0.1份；

14、所述发酵培养基的制备，包括以下重量组原料：葡萄糖12g·l-1、乳糖24g·l-1、蛋白胨12g·l-1、酵母膏24g·l-1、吐温80g·l-1；

15、所述保护剂的制备，包括以下重量组原料：脱脂乳粉0.12g·l-1、海藻糖0.16g·l-1、醇类或盐类0.001g·l-1。

16、优选地：所述发酵液的获取方法，包括以下内容：

17、b1：配制发酵培养基，调节ph值至6.8±0.1，121℃灭菌15min；

18、b2：灭菌后按体积比2-5％接种量将培养好的种子液接种至小型发酵罐，在小型发酵罐内于ph5.0+0.5条件下进行初步发酵；

19、b3：再转移至大型发酵罐中进行中试，发酵16-22h得到。

20、优选地：所述发酵液的发酵条件为：培养温度(37±1)℃，罐压0.02～0.05mpa；

21、所述发酵液的od600nm值为5.62-15。

22、优选地：所述乳化的操作方法为质量比1∶2的菌泥和保护剂。

23、优选地：所述干燥为真空冷冻干燥工艺，于-50℃预冻3h后，在温度-50℃，真空度0.1pa下进行冻干。

24、优选地：所述两歧双歧杆菌的活菌数采用平板混菌厌氧培养计数法，活菌数为≥5.0×109cfu/g；

25、所述平板混菌厌氧培养计数法，具体包括以下内容：

26、c1：量取0.5ml样品溶解于4.5ml已灭菌的生理盐水中；

27、c2：样液采用10倍梯度稀释，选取适当稀释度倾注平板，使其均匀分布于活化培养基中；

28、c3：(37±1)℃厌氧培养48h，计数菌落数目。

29、优选地：所述制剂的类型包括粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂或丸剂中的一种。

30、本发明的有益效果为：

31、1.本发明通过将两歧双歧杆菌与载体混合干燥，进而得到两歧双歧杆菌生物制剂，不具有毒副作用，而且可以增加排便频率，改善肠粘膜能够增加粪便含水量，对肠道蠕动有更好的作用效果，从而起到缓解便秘的作用。

32、2.本发明的制剂可以降低肠道内异常升高的短链脂肪酸水平，减轻结直肠炎症，进而从侧面可以辅助减少结肠病理损伤，制备简单，效果稳定，易于产业化生产。

33、3.本发明的制剂可代替药物治疗便秘，也可以作为临床治疗结直肠癌的辅助手段，或者将制剂应用于药品或者是一些发酵食品及功能性食品中，从而广泛发挥其作用，应用广泛。

34、4.本发明中的两歧双歧杆菌能在肠道定植后，代谢产生有机酸，能够降低肠腔内ph值，通过影响肠道菌群，调节肠道通透性和免疫学参数以及产生调节性或生物活性代谢产物，直接或间接作用于大肠和其他器官，从而达到缓解便秘的效果。

技术特征：

1.一种具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂，包括以下重量组成分：载体8～20份、两歧双歧杆菌0.5～1.5份、低聚异麦芽糖2～5份、乳糖醇1～2份、菊粉0.8～2份、水苏糖0.1～0.3份，其特征在于，所述载体为可食用植物淀粉、医用填充剂、医用润湿剂、矫味剂中的一种或两种以上；

2.根据权利要求1所述的一种具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂，其特征在于，所述两歧双歧杆菌的培养方法，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的一种具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂，其特征在于，所述材料包括菌种、活化培养基、发酵培养基和保护剂；

4.根据权利要求2所述的一种具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂，其特征在于，所述发酵液的获取方法，包括以下内容：

5.根据权利要求4所述的一种具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂，其特征在于，所述发酵液的发酵条件为：培养温度37±1℃，罐压0.02～0.05mpa；

6.根据权利要求3所述的一种具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂，其特征在于，所述乳化的操作方法为质量比1∶2的菌泥和保护剂。

7.根据权利要求6所述的一种具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂，其特征在于，所述干燥为真空冷冻干燥工艺，于-50℃预冻3h后，在温度-50℃，真空度0.1pa下进行冻干。

8.根据权利要求1所述的一种具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂，其特征在于，所述两歧双歧杆菌的活菌数采用平板混菌厌氧培养计数法，活菌数为≥5.0×109cfu/g；

9.根据权利要求8所述的一种具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂，其特征在于，所述制剂的类型包括粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂或丸剂中的一种。

技术总结
本发明公开了一种具有缓解便秘作用的两歧双歧杆菌生物制剂，涉及微生物制剂技术领域；为了提供无副作用且具有缓解便秘作用的单菌生物制剂；具体包括以下重量组成分：载体8～20份、两歧双歧杆菌0.5～1.5份、低聚异麦芽糖2～5份、乳糖醇1～2份、菊粉0.8～2份、水苏糖0.1～0.3份，所述载体为可食用植物淀粉、医用填充剂、医用润湿剂、矫味剂中的一种或两种以上；所述制剂的制备方法为：按重量组份将载体、低聚异麦芽糖、乳糖醇、菊粉、水苏糖混合后除湿得到混合料。本发明不具有毒副作用，而且可以增加排便频率，改善肠粘膜能够增加粪便含水量，对肠道蠕动有更好的作用效果，从而起到缓解便秘的作用。

技术研发人员：孙江伟,韩迪,郑建丰,宋锦安,郝占西
受保护的技术使用者：均瑶润盈生物科技(上海)有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14