环状RNAcircPROSC在颅缝早闭症治疗中的应用

本发明属于分子生物学和临床医学领域，具体涉及环状rna circprosc作为治疗靶点用于颅缝早闭症微创治疗的应用。

背景技术：

1、颅缝早闭症(craniosynostosis)是指出生时或出生后由于颅缝的过早融合，导致颅面部畸形，继而影响颅脑发育的一类疾病。据估计，颅缝早闭症发病率约为1/2500。如果不及时治疗，会导致相应颅骨生长明显受限，造成颅骨畸形，并限制脑组织的发育。目前颅缝早闭症的治疗方式主要为手术治疗，改善患儿颅骨外观畸形并预防其后遗症。然而手术创伤大、风险高，给患儿和家长来了严重的身心不良影响。因此，寻找更安全、更有效的治疗方法，减轻患儿的痛苦是至关重要的。

2、在疾病的诊断和治疗过程中，确定可靠的诊断标志物对于准确判断疾病的存在和程度至关重要。然而，并非所有用于诊断的标志物都可以作为疾病的治疗靶点。许多肿瘤的诊断过程中常使用肿瘤标志物，如癌胚抗原(cea)和前列腺特异性抗原(psa)。这些诊断标志物在早期肿瘤筛查和诊断中具有一定的应用价值，但它们并不适用于作为疾病治疗靶点。这是因为这些标志物的表达水平不能直接指示疾病的治疗反应或预后。此外，在神经退行性疾病中常用的生物标志物，如β-淀粉样蛋白(aβ)和tau蛋白。这些标志物在诊断阶段有助于确定疾病的存在，但并不能直接作为疾病的治疗靶点。深入了解诊断标志物形成的机制以及他们对疾病的作用，可能有助于开发更精准的治疗靶点和干预策略。

3、环状rna(circular rnas,circrnas)是一类新的非编码rna，其特征是共价封闭的环状结构，不具有聚腺苷化的尾部，比线性结构更稳定，半衰期更长。越来越多的研究提示circrna在多个层面上参与调控细胞分化和个体发育等重要生命过程，揭示其在人类的多种疾病的发生发展过程中起到极其重要的作用。在多种病理条件下，circrna可以在组织和体液中特异性和差异性表达。尽管循环circrna可以作为诊断疾病进展的潜在生物标志物，但并不一定可以成为治疗靶点。因此，明确干预或调控产生治疗效果的circrna对于确定新的药物治疗或治疗策略具有重要价值。

4、在基因组水平上，最近开发的crispr/cas9基因编辑技术在疾病基因治疗方面显示出巨大的潜力。然而，crispr/cas9的脱靶效应可能导致其他基因的永久性变化，从而限制其临床应用。外源性rna干扰(rnai)的局部或全身因公更为实用。rnai已经成为改变癌症治疗的一种有前途的方法，目前正处于临床试验的早期阶段。研究表明基于rnai的转甲状腺素淀粉样变性(attr)治疗(patisiran)已被fda批准进行3期临床试验。此外，通过酶联方法构建含有mirna或蛋白质结合位点的人工circrna可用于特异性靶向被认为在疾病进展的病理生理中起作用的mirna或蛋白质的功能丧失。因此，探寻参与颅缝早闭症发生发展的circrna，寻找有效的治疗靶点有望为颅缝早闭症的治疗和管理提供新的突破。

技术实现思路

1、本发明的目的是为解决现有颅缝早闭症手术治疗的局限性，寻找颅缝早闭症的治疗靶点并开创微创的治疗策略，提高治疗效果和患者的生活质量。

2、本发明的具体实施技术方案如下：

3、通过环状rna测序技术寻找候选circrna分子，检测其在颅骨组织及血浆中的表达，确定目的circrna分子circprosc，并探讨circprosc对成骨分化的影响，旨在为颅缝早闭症的治疗提供新靶点

4、抑制环状rna circprosc的物质在制备颅缝早闭症治疗药物中的应用，所述的环状rna circprosc的核苷酸序列如seq id no.1所示。所述环状rna circprosc来自8号染色体prosc的第2、3、4外显子反向剪切，prosc pre-mrna第4外显子3’端cg碱基与第2外显子5’端tc碱基相连，形成的共价闭合环状rna。

5、本发明所述的circprosc的核苷酸:

6、gatctcccagccatccagccccggctagtggcggtcagcaaaaccaaacc

7、tgcagacatggtgatcgaggcctatggacatgggcagcgcacttttggcga

8、gaactacgttcaggaactgctagaaaaagcatcaaatcccaaaattctgtc

9、tttgtgtcctgagatcaaatggcacttcattggccacctacagaaacaaaa tgtcaacaaattgatgg(seq id no.1)所示。

10、作为本发明的一种优选，抑制环状rna circprosc的物质为沉默circprosc表达的shrna或sirna。

11、作为本发明的一种优选，所述的沉默circprosc表达的sirna的核苷酸序列如seqid no.2所示。

12、一种治疗颅缝早闭症的药物组合物，包含本发明所述的抑制环状rna circprosc的物质和药用辅料。

13、作为本发明的一种优选，所述的抑制环状rna circprosc的物质为沉默circprosc表达的shrna或sirna。

14、作为本发明的一种优选，所述的沉默circprosc表达的sirna的核苷酸序列如seqid no.2所示。

15、相比现有技术，本发明具有如下有益效果：

16、本发明通过对颅缝早闭症患儿和正常对照的血浆进行circrna芯片分析，得到差异表达的circrna表达谱，发现circprosc在颅缝早闭症的颅骨组织和血浆与正常对照相比显著上调；通过进一步的实验验证，我们发现circprosc的高表达可在体内外显著促进间充质干细胞的成骨分化，敲减circprosc显示相反的结果。此外，通过aav-circprosc shrna靶向干预circprosc的表达可显著缓解颅缝早闭小鼠模型冠状缝的过早融合的症状。本发明为以circprosc为靶点，为颅缝早闭的微创治疗提供全新的方案，对临床实践具有潜在的有益意义。

技术特征：

1.抑制环状rnacircprosc的物质在制备颅缝早闭症治疗药物中的应用，所述的环状rnacircprosc的核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于抑制环状rnacircprosc的物质为沉默circprosc表达的shrna或sirna。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的沉默circprosc表达的sirna的核苷酸序列如seq id no.2所示。

4.一种治疗颅缝早闭症的药物组合物，其特征在于包含权利要求1中所述的抑制环状rnacircprosc的物质和药用辅料。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于所述的抑制环状rna circprosc的物质为沉默circprosc表达的shrna或sirna。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于所述的沉默circprosc表达的sirna的核苷酸序列如seq id no.2所示。

技术总结
本发明公开了环状RNAcircPROSC在颅缝早闭症治疗中的应用。抑制环状RNAcircPROSC的物质在制备颅缝早闭症治疗药物中的应用，所述的环状RNA circPROSC的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明发现circPROSC的高表达可在体内外显著促进间充质干细胞的成骨分化，敲减circPROSC显示相反的结果。此外，通过AAV‑circPROSCshRNA靶向干预circPROSC的表达可显著缓解颅缝早闭小鼠模型冠状缝的过早融合的症状。本发明为以circPROSC为靶点，为颅缝早闭的微创治疗提供全新的方案，对临床实践具有潜在的有益意义。

技术研发人员：顾爱华,徐诚,翁振坤,王刚,徐进,颜青,刘倩,陈秀,梁静佳
受保护的技术使用者：南京医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15