一种用于口服的预防血栓形成的蛋白质-葎草灵酮复合物制备方法

本发明涉及一种用于口服的预防血栓形成的蛋白质-葎草灵酮复合物制备方法，制备所得的蛋白质复合物溶液能够有效地预防小鼠尾静脉血栓的形成，并且其抑制血栓形成的主要原理是抑制凝血酶活性。

背景技术：

1、血栓是病理条件下在血管内形成的一种血液凝块，可导致心肌梗死、缺血性脑梗死等心脑血管疾病。有效抑制血栓形成和血栓栓塞可以减少心脑血管疾病的发生率，当务之急是开发廉价、安全、有效的抗血栓药物。

2、蛋白质z是麦芽中高稳定的蛋白质，可以耐受高温和酶解因而大量存在于啤酒液当中。此外，蛋白质z属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族，具有抑制丝氨酸蛋白酶活性的能力，如胰蛋白酶，这就意味着蛋白质z在一定程度上能够抵御胃肠消化，更多地到达小肠中被吸收。血栓的形成是一个复杂的过程，涉及血管、血小板和凝血因子，凝血酶作为重要的凝血因子之一，发挥了关键的直接作用。而凝血酶也属于丝氨酸蛋白酶，利用蛋白质z抑制凝血酶活性从而达到抑制血栓形成的效果，在理论上是可行的。目前，尚未有利用麦芽来源的蛋白质z抑制血栓形成的研究报道。

3、葎草灵酮是α-酸氧化的产物，大量存在与老化酒花中，目前对葎草灵酮的生物功能活性鲜有报道，而与其结构相似的异-α-酸已被证实具有预防阿尔兹海默症和缓解酒精诱导的急性肝损伤的功能。葎草灵酮作为植物来源的天然化合物，其功能活性有待进一步探究。

4、蛋白质z与葎草灵酮发生相互作用，通过氢键结合，能够增强葎草灵酮的稳定性以及抵抗胰蛋白酶的能力。果胶作为常用的递送载体，能够保护活性物质在胃肠的完整性，在胃液较低ph条件下，果胶与蛋白质z带相反电荷时可以通过静电作用相结合，从而起到保护效果，提高生物利用度。

技术实现思路

1、针对上述内容，本发明的目的是提供有效抑制血栓形成的蛋白质复合物的制备方法，由蛋白质z、葎草灵酮以及果胶三者组成，成分天然、安全，具有显著抑制血栓形成的效果。

2、为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

3、一种用于口服的预防血栓形成的蛋白质-葎草灵酮复合物制备方法，包括如下步骤：

4、a)从麦芽/大麦中分离纯化得到蛋白质z，30～60mg/ml的蛋白质z溶于ph 7.0～8.0的tris缓冲液中，从酒花浸膏中分离纯化α-酸，并通过氧化制备得到纯度为84.6±0.9％的葎草灵酮粉末，将其溶于dmso中，可得到50～150mm的葎草灵酮溶液；

5、b)将蛋白质z和葎草灵酮以摩尔比1:4～1:50的比例复合于20～50mm ph2.0～3.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，在4℃条件下静置10～24小时，得到蛋白质z-葎草灵酮溶液；

6、c)将果胶溶于20～50mm ph 2.0～3.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中，再与蛋白质z-葎草灵酮复合溶液以质量比1:0.5～2的比例混合，搅拌4～12小时，得到蛋白质z-葎草灵酮复合物。

7、根据上述方法制备的蛋白质z-葎草灵酮复合物，其特征在于：蛋白质z浓度为30～50mg/ml，葎草灵酮浓度为1～5mm，果胶浓度为30～50mg/ml，体系为ph 2.0～3.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。

8、所述的蛋白质z-葎草灵酮复合物在体外能够有效抑制凝血酶活性。

9、所述的蛋白质z-葎草灵酮复合物在果胶存在条件下蛋白质z-葎草灵酮复合物能够在胃液(ph2.0)条件下保持稳定。

10、所述的蛋白质z-葎草灵酮复合物以100～500mg/kg蛋白质z、6～12mg/kg葎草灵酮，通过连续口服7～9天后，可使小鼠尾静脉血栓形成率下降28.73～38.19％。

11、本发明的有益效果在于：

12、本发明方法所使用的材料均来源于天然生物，所制得的蛋白质复合物能够有效抑制血栓形成，主要有效成分为蛋白质z和葎草灵酮，经过果胶包埋可以提高蛋白质z生物利用度。

技术特征：

1.一种用于口服的预防血栓形成的蛋白质-葎草灵酮复合物制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

2.一种根据权利要求1所述的蛋白质z-葎草灵酮复合物的制备方法，其特征在于：蛋白质z浓度为30～50mg/ml，葎草灵酮浓度为1～5mm，果胶浓度为30～50mg/ml，体系为ph 2.0～3.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。

3.根据权利要求1所述的蛋白质z-葎草灵酮复合物的制备方法，其特征在于：其中的蛋白质z和葎草灵酮在体外能够抑制凝血酶活性，二者的半抑制剂浓度分别为0.16±0.07mm和2.10±0.18mm。

4.根据权利要求1所述的蛋白质z-葎草灵酮复合物的制备方法，其特征在于：果胶存在条件下蛋白质z-葎草灵酮复合物能够在胃液(ph 2.0)条件下保持稳定。

5.根据权利要求1所述的蛋白质z-葎草灵酮复合物的制备方法，其特征在于：以100～500mg/kg蛋白质z、6～12mg/kg葎草灵酮，通过连续口服7～9天后，可使小鼠尾静脉血栓形成率下降28.73～38.19％。

6.权利要求1～5任一项所述方法制得的蛋白质z-葎草灵酮复合物。

技术总结
本发明涉及一种用于口服的预防血栓形成的蛋白质‑葎草灵酮复合物制备方法。本发明以植物蛋白质(蛋白质Z)和植物化学物(葎草灵酮)为原料，二者均有预防血栓形成的作用，且蛋白质Z作为丝氨酸蛋白酶抑制剂，能够抵抗胰蛋白酶，因此在小肠中能够对葎草灵酮起到包埋保护效果。再利用果胶对二者进行包埋，在pH2.0～3.0的条件下，蛋白质Z‑葎草灵酮带正电荷，果胶带负电荷，三者通过静电作用结合，并且在胃部环境中仍保持稳定，从而达到抵御胃消化的效果。所述蛋白质Z‑葎草灵酮复合物能够显著抑制由角叉菜胶引起的小鼠尾静脉血栓的形成，其原理主要是抑制凝血酶的活性。

技术研发人员：吕晨艳,徐晨,孙明炀,赵广华
受保护的技术使用者：中国农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15