烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用的制作方法

本发明涉及体表愈合创面，尤其是涉及烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用。

背景技术：

1、体表创面愈合一个高度协调的过程，由止血、炎症、增殖和重塑四个重叠而连续的阶段构成。

2、正常机体发生组织损伤时，作为早期反应者的皮肤驻留肥大细胞会通过脱颗粒释放趋化因子以招募中性粒细胞，从而启动急性炎症反应，这对于加速创面愈合具有积极作用。然而，在糖尿病足、老年褥疮等体表慢性难愈性创面的愈合过程中，由于机体的生理、病理变化削弱了组织发生急性炎症反应以对抗损伤的能力，导致急性免疫反应不足，从而阻碍了伤口的正常愈合，长期慢性炎症、持续细菌感染、缺氧、胶原代谢异常、细胞迁移能力弱等特征，慢性难愈合创面的临床治疗伴随着高复发率、高截肢率和高死亡率，至今仍属于世界性难题，如何缩短受损创面愈合时间，加快受损创面愈合是伤口治疗的难题。

3、针对上述问题，一些科学家们大胆尝试利用诱导急性炎症的方法来解决慢性炎症问题，例如：用外源性神经肽处理糖尿病创面，可使创面促炎细胞因子(如mcp-1和il-6)表达增加，促进白细胞招募，从而加速了糖尿病db/db小鼠和兔子的伤口愈合动力学；用负载趋化因子il-8的明胶水凝胶处理糖尿病db/db小鼠伤口，趋化因子的释放可吸引中性粒细胞富集，从而加速创面愈合。此外，一项临床前概念性验证表明，将肥大细胞稳定剂负载于敷料时，可使创面处肥大细胞的脱颗粒能力恢复，将这种创面敷料预防性应用于糖尿病创面，能够增强损伤导致的急性免疫反应，最终减少慢性炎症，加速创面愈合。这种诱导急性免疫反应的方法虽然与传统的抑炎思路相悖，但以上这些研究证明了诱导急性炎症可以加速慢性创面的愈合。

4、然而，创面愈合各阶段具有显著不同的病理性微环境，人为诱导急性免疫反应可能会导致炎症风暴的出现，其用量控制不慎还有可能引起更为严重的持续性炎症甚至感染及脓毒症等不良反应。例如，趋化因子在损伤早期的促炎特性对创面愈合具有积极作用，而在炎症后期则严重阻碍了创面进入增殖期。

5、因此，需要提供一种安全有效的能够诱导适度炎症以启动机体经典的创面愈合程序，加快慢性难愈合创面愈合的材料应用及方法。

6、现有技术中，发明人的专利202210201086.9披露了烟草花叶病毒可以进一步激活适应性免疫系统对肿瘤细胞进行杀伤，发明人在经过多年的研究偶然发现，烟草花叶病毒可以应用在促进体表创面愈合中。

技术实现思路

1、本发明为了解决如何安全、有效诱导适度炎症、加快慢性难愈合创面愈合的技术问题，本发明提供烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用。

2、烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用。

3、发明人经过多年研究发现：烟草花叶病毒内部的rna链，或者衣壳蛋白的组装体(不含rna的部分，又称为“病毒样纳米颗粒”)，即天然提取的烟草花叶病毒、自然突变的烟草花叶病毒、经基因工程改性、化学修饰的烟草花叶病毒、仅包含衣壳蛋白不包含rna链的烟草花叶病毒样纳米组装体均可通过与巨噬细胞表面的模式识别受体(prrs)作用去刺激巨噬细胞极化为m1型巨噬细胞，即将其用于刺激免疫细胞，尤其是巨噬细胞，可以产生促炎极化行为；并且，烟草花叶病毒只能感染烟草及其他茄科植物，生物安全性高，将其用于体表难愈性创面修复，可以产生促炎极化行为，有望在慢性创面愈合前期诱导适度炎症产生，从而启动经典创伤修复程序，加快伤口愈合。

4、进一步地，所述烟草花叶病毒包括天然提取的烟草花叶病毒、自然突变的烟草花叶病毒、经基因工程改性的烟草花叶病毒、化学修饰的烟草花叶病毒、仅包含衣壳蛋白不包含rna链的烟草花叶病毒样纳米组装体中的任意一种。

5、进一步地，所述创面为巨噬细胞功能被破坏的创面或炎症期m1型巨噬细胞缺乏的创面。

6、具体地，所述创面为大面积烧烫伤创面、压疮创面、褥疮创面、糖尿病创面、下肢静脉溃疡创面、严重感染开放创面中的一种或多种。

7、具体地，所述烟草花叶病毒的使用方法，包括以下步骤：

8、s1、将烟草花叶病毒分散在水、生理盐水或pbs中，制备蛋白浓度为5-500μg/ml的烟草花叶病毒溶液；

9、s2、将步骤s1中的烟草花叶病毒溶液滴加至填充创面；具体地，所述创面具体为：炎症期至肉芽组织填充阶段的创面。

10、s2.1、在s2中被烟草花叶病毒溶液完全填充的创面上用无菌纱布、凡士林油砂或其他基础创面敷料填充并固定，将限制所述烟草花叶病毒溶液在创面内，避免所述烟草花叶病毒溶液的浪费，且提升体表创面愈合的速度。

11、s3、间隔1h～48h，往所述创面中滴加所述s1中的烟草花叶病毒溶液至填充创面；直至创面发展至肉芽组织填充阶段结束滴加。

12、本发明相对于现有技术，有以下优点：

13、本发明提供烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用，烟草花叶病毒与lps等经典m1巨噬细胞诱导物相比，烟草花叶病毒只能感染烟草及其他茄科植物，生物安全性高；能有效极化巨噬细胞为m1表型，在慢性创面愈合前期诱导适度炎症产生，从而启动经典创伤修复程序，促进体表创面愈合。

技术特征：

1.烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用。

2.根据权利要求1所述的烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用，其特征在于：所述烟草花叶病毒包括天然提取的烟草花叶病毒、自然突变的烟草花叶病毒、经基因工程改性、化学修饰的烟草花叶病毒、仅包含衣壳蛋白不包含rna链的烟草花叶病毒样纳米组装体中的任意一种。

3.根据权利要求1所述烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用，其特征在于：所述创面为巨噬细胞功能被破坏的创面或炎症期m1型巨噬细胞缺乏的创面。

4.根据权利要求1所述的烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用，其特征在于：所述创面为大面积烧烫伤创面、压疮创面、褥疮创面、糖尿病创面、下肢静脉溃疡创面、严重感染开放创面中的任意一种。

5.根据权利要求1所述的烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用，其特征在于，所述烟草花叶病毒的使用方法，包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用，其特征在于：所述步骤s2中，所述创面具体为：炎症期至肉芽组织填充阶段的创面。

7.根据权利要求5所述的烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用，其特征在于：所述步骤s1中，所述溶剂为水、生理盐水或pbs中的任意一种。

8.根据权利要求5所述的烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用，其特征在于：所述步骤s1中，所述烟草花叶病毒溶液的蛋白浓度为5-500μg/ml。

9.根据权利要求5所述的烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用，其特征在于，还包括：步骤s2.1、在s2中被烟草花叶病毒溶液完全填充的创面上用基础创面敷料覆盖并固定。

10.根据权利要求5所述的烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用，其特征在于，还包括步骤s3、间隔1h～48h，往所述创面中滴加所述s1中的烟草花叶病毒溶液至填充创面；直至创面发展至肉芽组织填充阶段，结束滴加。

技术总结
本发明提供烟草花叶病毒在促进体表创面愈合中的应用，烟草花叶病毒只能感染烟草及其他茄科植物，生物安全性高，且能有效极化巨噬细胞为M1表型，为巨噬细胞功能受损、巨噬细胞表型失衡、早期炎症反应不足的慢性创面提供适度的炎症微环境，从而启动经典创伤修复程序，促进体表创面愈合。

技术研发人员：朱萌,田野,廖碧雁
受保护的技术使用者：国科瑞诺（中山）生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15