一种适用于热辅助治疗的硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体的制作方法

本发明属于医药学，尤其涉及一种适用于热辅助治疗的含硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体。

背景技术：

0、技术背景

1、阿尔茨海默病(alzheimer's disease，ad)是以中枢认知、记忆和运动障碍为特征的一种不可逆的神经退行性疾病。引发患者进行性、持续性认知功能损害，最终丧失工作和生活能力，是继心脑血管疾病和恶性肿瘤之后老年人致残致死的第三大疾病，好发于60岁以上人群。

2、ad的两大病理特征是：胞内的神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,nfts)，其主要成分为过度磷酸化的tau蛋白；胞外的老年斑(senile plaques,sps)，其主要成分为aβ。ad的发病机制有多种假说：发病机制尚未十分清楚，针对以上两种特征，形成了β淀粉样蛋白级联假说和tau蛋白假说。过去30余年的研究主要针对aβ，取得了大量成果，针对tau的研究目前也是ad领域国际热点。

3、中国医学科学院药物研究所公开了一系列关于硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐酸盐的口服固体制剂，主要包括：一种治疗阿尔兹海默病的缓释制剂及其制备方法(中国专利文献cn106166142a)、一种治疗阿尔兹海默病的缓释制剂及其制备方法(中国专利文献cn108721239 b)、一种治疗神经退行性疾病的片剂及其制备方法(中国专利文献cn110433161 a)、和一种治疗阿尔茨海默病的缓释制剂及其制备方法(中国专利文献cn108721239a)。研究表明硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐酸盐通过减轻个体神经退化、实现神经保护和/或实现认知增强，用于预防和/或治疗心脑血管疾病和神经退行性疾病，具有治疗ad的潜力。通过口服给药可能受到肝脏首过效应的影响及组织结合的影响，其口服绝对生物利用度可能较低，作为一种治疗阿尔茨海默病的潜力药物，脑部靶向给药会更好的发挥其治疗作用。

4、血脑屏障(bbb)指脑毛细血管壁与神经胶质细胞形成的血浆与脑细胞之间的屏障和由脉络丛形成的血浆和脑脊液之间的屏障，这些屏障能够阻止某些物质(多半是有害的)由血液进入脑组织。存在bbb的情况下硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐酸盐，由于水溶性高很难到达受损的脑组织，从而影响药效。

技术实现思路

1、本发明在研究中意外发现，当对脑部进行热量供给后，药品透过血脑屏障到达脑组织的量明显增加，但是脂质体载药系统受热后稳定性变差，包封率降低药物降解物增加。本发明针对上述问题进行了研究，提供了一种适用于热辅助治疗的硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体，在热辅助治疗温度下，能够维持良好的包封率，粒度分布均匀。

2、本发明具体技术方案如下：

3、一种适用于热辅助治疗的硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体，包括硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐、磷脂、胆固醇和稳定剂，所述稳定剂为可溶性钙盐。

4、优选的，所述可溶性钙盐选自氯化钙、葡萄糖酸钙、磷酸氢钙中的一种或几种。更优选氯化钙。

5、为了达到较优的技术效果，硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐酸盐500～1000份，磷脂1250～5000份，胆固醇500～1250份，可溶性钙盐05～30份。

6、本发明所述磷脂选自大豆卵磷脂s100、蛋磷脂e80、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、二油酰基卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰甘油-聚乙二醇2000、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000中的一种或几种。所述磷脂选自大豆卵磷脂s100、蛋磷脂e80、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、二油酰基卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰甘油-聚乙二醇2000、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000中的一种或几种。优选二肉豆蔻酰甘油-聚乙二醇2000和/或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000。

7、本发明所述硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐选自盐酸盐，氢溴酸盐、马来酸盐中的一种或几种。

8、本发明所述脂质体粒径范围优选为50～500nm。

9、本发明所述热辅助可以使用有温度控制的热敷带等，温度为35℃～45℃。

10、本发明一个优选硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐酸盐75份，二硬脂酰磷脂酰胆碱375份，二肉豆蔻酰甘油-聚乙二醇2000 125份、胆固醇125份、氯化钙20份。

11、本发明所述的脂质体可采用薄膜分散法、硫酸铵梯度法、高压匀质法或微射流法制备，优选高压匀质法，具体的一个示例，包括如下步骤：

12、(1)将磷脂、胆固醇加入至乙醇中，超声以完全溶解作为醇相溶液；将硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐酸盐加入至纯化水中，完全溶解作为水相溶液；

13、(2)将醇相溶液和水相溶液混合后加入到微射流高压匀质机中进行均质，形成的脂质体前体溶液分散于pbs缓冲液中，同时不停搅拌；随后旋蒸除去乙醇，得到目标脂质体。

14、本发明所述的一种药物组合物，其特征在于为包含权利1-9任一项所述的硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体及辅料的口服制剂。

15、本发明的优点及积极效果：

16、ad的典型的病理特征表现为β淀粉样蛋白的沉积、tau蛋白过度磷酸化导致的神经纤维缠结等。本发明通过研究意外的发现，硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐酸盐兼备抗tau蛋白磷酸化和β淀粉样蛋白的沉积，有望成为治疗ad的潜在药物。为了对硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐酸盐抗ad进行增效减毒，本发明以纳米脂质体为药物载体，用聚乙二醇(polyethylene glycol，peg)进行隐形化修饰，延长体内循环时间，通过热量供给辅助双重提高硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐酸盐纳米脂质体的脑靶向性。鉴于普通的脂质体在较高温度下，稳定性变差，包封率降低，本发明对稳定剂进行了筛选，通过可溶性钙盐提高了脂质体药物在较高温度下的稳定性。

17、本发明通过对制备工艺的优化，成功制备了粒径分布均匀、包封率较高，并且具有较好的热稳定性可通过加热辅助提高脑靶向能力的纳米脂质体，相关结果未见文献报道。

18、本发明采用高效液相色谱法证明了本发明具有明显的脑靶向性；通过水迷宫试验对ad大鼠行为学能力观察证明本发明影响改善ad模型小鼠行为学能力；通过使用酶联免疫吸附试验试剂盒检测aβ、tau含量表明其可能通过抑制aβ、tau蛋白发挥作用。硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐酸盐纳米脂质体有望成为抗ad的理想药物。为ad治疗提供新药物新方法、开辟新思路，具有重要的研究价值和广阔的应用前景。

技术特征：

1.一种适用于热辅助治疗的硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体，其特征在于包括硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐、磷脂、胆固醇和稳定剂，所述稳定剂为可溶性钙盐。

2.根据权利要求1所述的硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体，其特征在于所述可溶性钙盐选自氯化钙、葡萄糖酸钙、磷酸氢钙中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体，其特征在于所述各组分重量份如下：硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐500～1000份，磷脂1250～5000份，胆固醇500～1250份，可溶性钙盐5～30份。

4.根据权利要求1所述的硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体，其特征在于所述磷脂选自大豆卵磷脂s100、蛋磷脂e80、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、二油酰基卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰甘油-聚乙二醇2000、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000中的一种或几种。

5.根据权利要求4所述的硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体，其特征在于所述磷脂选自大豆卵磷脂s100、蛋磷脂e80、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、二油酰基卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种或几种以及二肉豆蔻酰甘油-聚乙二醇2000和/或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000。

6.根据权利要求1所述的硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体，其特征在于所述硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐选自盐酸盐，氢溴酸盐、马来酸盐中的一种或几种。

7.根据权利要求1所述的硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体，其特征在于所述脂质体粒径范围为50～500nm。

8.根据权利要求1所述的硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体，其特征在于所述热辅助温度为40℃～45℃。

9.根据权利要求1所述的硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体，其特征在于采用高压匀质法制备而成。

10.一种药物组合物，其特征在于为包含权利1-9任一项所述的硝酸2-(4-甲基噻唑-5-基)乙酯盐脑靶向脂质体及辅料的口服制剂。

技术总结
本发明涉及一种适用于热辅助治疗的硝酸2‑(4‑甲基噻唑‑5‑基)乙酯盐脑靶向脂质体，包括磷脂、胆固醇和稳定剂。本发明以可溶性钙盐，特别是氯化钙作为稳定剂，制得的脂质体在热辅助治疗温度下，能够维持良好的包封率，粒度分布均匀，为脑部神经退行性疾病的治疗提供了新的药物选择。

技术研发人员：孙迎基,王玉广,张岩,张元元,刘格,李铁军
受保护的技术使用者：山东京卫制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15