含脐带间充质干细胞的凝胶制剂及其制备方法和应用与流程

本发明属于生物工程，特别是涉及含脐带间充质干细胞的凝胶制剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、复杂性肛瘘是指有2条以上瘘管或支管、盲管的肛瘘，包括瘘管穿过肛门外括约肌的30％～50％(高位括约肌间、括约肌上方和外方)、女性前侧瘘管、复发性瘘管、伴有肛门失禁的局部放疗后肛瘘、克罗恩病肛瘘、多个瘘管的肛瘘等。有文献报道，复杂性肛瘘中肛腺感染性肛瘘占90％～95％，与克罗恩病相关肛瘘约占1.5％，创伤性肛瘘约占3.5％。肛瘘无法自愈，手术是治疗复杂性肛瘘的主要方式，其手术原则在于消除肛瘘内口以及与内口相通的上皮化瘘管，尽可能减少对括约肌的损伤。

2、由于复杂性肛瘘的内口位置和瘘管走行与括约肌关系复杂，传统的手术方式虽能相对彻底清除病灶，但存在影响肛门功能、术后易造成肛门失禁等风险。因此，如何提高肛瘘的治愈率、减少复发以及最大限度地保护肛门功能成为肛肠科医师面临的棘手问题。目前治疗复杂性肛瘘的手术方式包括挂线疗法、瘘管切开或切除术、括约肌间瘘管结扎术、直肠黏膜推移皮瓣术、纤维蛋白胶注射术、肛瘘栓填塞术等。虽然传统手术方式治愈率较高，但存在术后创面大、并发症较多等问题，严重影响患者生活质量。

3、干细胞具有增强受损组织的再生和修复能力，特别是对不利于伤口愈合环境中的组织，因而近年来将其用于治疗复杂性肛瘘受到广泛关注，其是利用干细胞增殖分化、免疫调节等作用，通过增加伤口局部细胞数量和控制局部炎症反应从而促进瘘管愈合，其具有创伤小、疼痛轻、修复快、无括约肌损伤、住院时间短等优点，逐渐成为国内外研究的热点。虽然目前干细胞移植治疗复杂性肛瘘处于发展早期阶段且相关临床研究较少、治愈率也存在差，但对于复杂性肛瘘来说却是一个重大的进步。目前的液体干细胞制剂作用于肛瘘处容易流出，大大的影响了治疗效果，因此怎么针对肛瘘位置进行局部治疗，提高干细胞的治疗效果成为研究的重要方向。

技术实现思路

1、基于此，本发明提供了一种含脐带间充质干细胞的凝胶制剂，可用于治疗复杂性肛瘘，使用时不易在肛瘘处容易流出，治疗效果佳。

2、本发明的第一方面，是提供了一种含脐带间充质干细胞的凝胶制剂，包括富血小板血浆、间充质干细胞和凝胶组合物。

3、进一步地，所述凝胶组合物包括氯化钙和凝血酶。

4、进一步地，所述氯化钙的浓度为2-8g/ml，优选为2.86-5.86g/ml。

5、进一步地，所述凝血酶的浓度为20-70iu/ml，优选为28.56-58.56iu/ml。

6、进一步地，所述富血小板血浆的含量为75-150ul/ml；和/或，所述间充质干细胞的含量为1×105～3×106个/ml。

7、本发明的第二方面，是提供了一种含脐带间充质干细胞的凝胶制剂的方法，包括以下步骤：

8、s1，从人体外周血中获取富血小板血浆；

9、s2，从脐带组织中获取脐带间充质干细胞；

10、s3，将步骤s2中所述脐带间充质干细胞用步骤s1中所述富血小板血浆进行重悬，筛网过滤，加入凝胶组合物，得到凝胶制剂。

11、进一步地，步骤s1中，包括：将人体外周血第一次离心8-12min后，移除红细胞下层后，第二次离心，移除血浆上层，并将留下的白膜层振荡离心3-8min，得到富血小板血浆。

12、进一步地，步骤s2中，包括：将脐带组织在酒精中浸泡1-3min，生理盐水清洗，剔除脐静脉和脐动脉,剥取华通氏胶，清洗并剪成组织块，将组织块接种到培养液中，吸取悬液并接种到t75细胞培养瓶中培养，得到脐带间充质干细胞。

13、进一步地，所述培养的环境包括：温度为36-38℃，co2浓度为3-8％。

14、进一步地，步骤s3中，所述筛网的孔径为80-120目。

15、本发明的第三方面，是提供了含脐带间充质干细胞的凝胶制剂在制备治疗复杂性肛瘘药物中的应用。

16、相比现有技术，本发明具有以下有益效果：

17、本发明的一种含脐带间充质干细胞的凝胶制剂，采用富血小板血浆和间充质干细胞的组合，可显著加快瘘管组织的愈合及再生，修复速度快、治愈率高；制成凝胶制剂能保护细胞的活性，且使用时不易在肛瘘处容易流出，适用于治疗复杂性肛瘘，治疗效果佳。

18、本发明的一种含脐带间充质干细胞的凝胶制剂的制备方法，制备工艺简单，易于操作，适用于工业化生产。

技术特征：

1.一种含脐带间充质干细胞的凝胶制剂，其特征在于，包括富血小板血浆、间充质干细胞和凝胶组合物。

2.根据权利要求1的含脐带间充质干细胞的凝胶制剂，其特征在于，所述凝胶组合物包括氯化钙和凝血酶。

3.根据权利要求2的含脐带间充质干细胞的凝胶制剂，其特征在于，所述氯化钙的浓度为2-8g/ml，优选为2.86-5.86g/ml；和/或，

4.根据权利要求1的含脐带间充质干细胞的凝胶制剂，其特征在于，所述富血小板血浆的含量为75-150ul/ml；和/或，所述间充质干细胞的含量为1×105～3×106个/ml。

5.一种权利要求1-4任一项所述的含脐带间充质干细胞的凝胶制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

6.根据权利要求5的含脐带间充质干细胞的凝胶制剂的方法，其特征在于，步骤s1中，包括：将人体外周血第一次离心8-12min后，移除红细胞下层后，第二次离心，移除血浆上层，并将留下的白膜层振荡离心3-8min，得到富血小板血浆。

7.根据权利要求5的含脐带间充质干细胞的凝胶制剂的方法，其特征在于，步骤s2中，包括：将脐带组织在酒精中浸泡1-3min，生理盐水清洗，剔除脐静脉和脐动脉,剥取华通氏胶，清洗并剪成组织块，将组织块接种到培养液中，吸取悬液并接种到t75细胞培养瓶中培养，得到脐带间充质干细胞。

8.根据权利要求7的含脐带间充质干细胞的凝胶制剂的方法，其特征在于，所述培养的环境包括：温度为36-38℃，co2浓度为3-8％。

9.根据权利要求5的含脐带间充质干细胞的凝胶制剂的方法，其特征在于，步骤s3中，所述筛网的孔径为80-120目。

10.权利要求1-4任一项所述的含脐带间充质干细胞的凝胶制剂在制备治疗复杂性肛瘘药物中的应用。

技术总结
本发明公开了含脐带间充质干细胞的凝胶制剂及其制备方法和应用，包括富血小板血浆、间充质干细胞和凝胶组合物。本发明的一种含脐带间充质干细胞的凝胶制剂，采用富血小板血浆和间充质干细胞的组合，可显著加快瘘管组织的愈合及再生，修复速度快、治愈率高；且制成凝胶制剂使用时不易在肛瘘处容易流出，适用于治疗复杂性肛瘘，治疗效果佳。

技术研发人员：徐驰,张辉
受保护的技术使用者：武汉知因细胞生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15