一种用于治疗卵子成熟障碍的复方制剂

本发明属于生物医疗领域，涉及一种用于治疗因tubb8、trip13、tacc3、patl2基因突变导致的卵子成熟障碍和女性不孕的制剂。

背景技术：

1、虽然辅助生殖技术(assisted reproductive technology,art)已广泛应用于多种不孕不育症的治疗，但仍存在一些无法明确和解决的不孕不育病因，如卵母细胞成熟阻滞，目前也被称作一种新的孟德尔遗传病，是一类较为罕见的原发性不孕症。

2、自1990年报道第一例人类卵母细胞成熟停滞以来，卵子成熟障碍的病因一直处于探索中。自2016年起，tubb8、trip13、tacc3、patl2等可遗传的人类卵子成熟障碍的致病基因相继被发现，并且可以解释30-40％患者卵子发育停滞的病因，但对于由这些基因突变引起的卵子成熟障碍的治疗目前仍是一片空白。探寻和开发由tubb8、trip13、tacc3、patl2基因突变引起的卵母细胞停滞相关的治疗方法，对于临床上解决女性生殖障碍相关疾病具有重要的现实意义和指导价值。虽然由tubb8、trip13、tacc3、patl2基因突变导致的卵母细胞成熟障碍的病因能够通过全外显子测序来确定，但目前尚未发现有对于这类疾病的干预措施能治疗由基因突变导致的卵母细胞成熟障碍，因此迫切需要开发安全且有效治疗卵母细胞成熟障碍的方法。

技术实现思路

1、针对现有问题的不足，本发明的目的是提供一种用于治疗卵子成熟障碍的复方制剂，用于治疗因tubb8、trip13、tacc3、patl2基因突变导致的卵子成熟障碍和女性不孕。

2、本发明解决其技术问题采用的技术方案是：

3、第一方面，本发明保护一种治疗人卵母细胞成熟停滞的组合物，所述组合物包括如下组分：二氢香豆素(dihydrocoumarin)、泽布拉林(zebularine)、图巴辛(tubacin)以及腺苷三磷酸(atp)。

4、在具体的实施方案中，所述组合物摩尔比为dihydrocoumarin：zebularine：tubacin：atp＝0.1～100nmol：0.5～200μmol：0.5～50μmol：1～20mmol。

5、在更具体的实施方案中，所述组合物摩尔比为dihydrocoumarin：zebularine：tubacin：atp＝10nmol：10μmol：20μmol：5mmol。

6、在具体的实施方案中，所述组合物还包括以下组分：姜黄素(curcumin)、烟酰胺(nicotinamide)、佛司可林(forskolin)以及二甲双胍(metformin)。

7、在具体的实施方案中，所述组合物摩尔比为curcumin：dihydrocoumarin：nicotinamide：zebularine：forskolin：tubacin：atp：metformin＝0.5～200nmol：0.1～100nmol：0.1～100nmol：0.5～200μmol：0.5～100μmol：0.5～50μmol：1～20mmol：0.5～20mmol。

8、优选的，所述组合物摩尔比为curcumin：dihydrocoumarin：nicotinamide：zebularine：forskolin：tubacin：atp：metformin＝5nmol：10nmol：2nmol：10μmol：10μmol：20μmol：5mmol：2mmol。

9、第二方面，本发明保护一种治疗人卵母细胞成熟停滞的复方制剂，包括前文所述的组合物及药学上可接受的辅料。

10、在具体的实施方案中，所述药学上可接受的辅料选自填充剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂中的一种或多种。

11、在具体的实施方案中，所述制剂为口服制剂、注射制剂、经皮给药制剂或黏膜给药制剂。

12、本发明的组合物或制剂可用任何公知的给药方法给药。

13、本发明的组合物或制剂的给药剂量依照所述治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型可以有大范围的变化。

14、本发明组合物或制剂可单独使用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用，当本发明的组合物或制剂与其他治疗药物存在协同作用时，应该根据试剂情况调整它的剂量。

15、第三方面，本发明还保护前文所述的组合物、前文所述的复方制剂在制备治疗人卵母细胞成熟停滞的药物中的应用。

16、第四方面，本发明还保护一种治疗治疗人卵母细胞成熟停滞的方法，所述方法包括向患者施加前文所述的组合物或者前文所述的复方制剂。

17、有益效果

18、本发明提供的一种用于治疗卵子成熟障碍的复方制剂，与现有技术相比，具有以下有益效果：

19、(a)小鼠gv期卵母细胞注射含有致病基因(tubb8、trip13、tacc3、patl2)的野生型(wild-type,wt)及相应点突变的crna后，ibmx抑制20小时，在对照培养基及添加复方制剂的培养基中恢复减数分裂后，通过统计卵母细胞成熟率，发现在添加复方制剂培养后卵母细胞成熟率显著恢复。

20、(b)通过活性氧检测试剂盒检测携带致病基因点突变的卵母细胞在治疗前后的活性氧ros水平，结果表明经复方制剂治疗后可明显降低突变卵母细胞ros水平。

21、(c)收集相应卵子固定后利用免疫荧光方法于共聚焦显微镜测定细胞内磷酸化、乙酰化水平，发现与对照组相比，注射携带致病点突变crna的卵母细胞在含有以上复方制剂的培养基中培养15h后磷酸化水平降低，整体乙酰化水平升高。

22、(d)收集相应卵子进行体外授精及早期胚胎培养，发现复方制剂的添加提高了注射点突变crna卵母细胞的受精能力及早期胚胎发育能力。以上结果都表明该复方制剂能有效治疗卵母细胞突变引起的卵子发育停滞表型，且体外受精实验验证该复方制剂能有效提高基因突变卵母细胞受精率和囊胚发育率，表型挽救显著，治疗效果良好。

技术特征：

1.一种治疗人卵母细胞成熟停滞的组合物，其特征在于，所述组合物包括如下组分：

2. 根据权利要求1所述的治疗人卵母细胞成熟停滞的组合物，其特征在于，所述组合物摩尔比为二氢香豆素：泽布拉林：图巴辛：腺苷三磷酸 =0.1~100nmol：0.5~200μmol：0.5~50 μmol：1~20mmol。

3. 根据权利要求2所述的治疗人卵母细胞成熟停滞的组合物，其特征在于，所述组合物摩尔比为二氢香豆素：泽布拉林：图巴辛：腺苷三磷酸 =10nmol：10μmol：20μmol：5mmol。

4.根据权利要求1所述的治疗人卵母细胞成熟停滞的组合物，其特征在于，所述组合物还包括以下组分：姜黄素，烟酰胺，佛司可林，二甲双胍。

5. 根据权利要求4所述治疗人卵母细胞成熟停滞的组合物，其特征在于，所述组合物摩尔比为姜黄素：二氢香豆素：烟酰胺：泽布拉林：佛司可林：图巴辛：腺苷三磷酸：二甲双胍=0.5~200nmol：0.1~100nmol：0.1~100nmol：0.5~200 μmol：0.5~100μmol：0.5~50μmol：1~20mmol：0.5~20mmol。

6.根据权利要求5所述的治疗人卵母细胞成熟停滞的组合物，其特征在于，所述组合物摩尔比为姜黄素：二氢香豆素：烟酰胺：泽布拉林：佛司可林：图巴辛：腺苷三磷酸：二甲双胍=5nmol：10nmol：2nmol：10μmol：10μmol：20μmol：5mmol：2mmol。

7.一种治疗人卵母细胞成熟停滞的复方制剂，其特征在于，包括权利要求1-6任一所述的组合物及药学上可接受的辅料。

8.根据权利要求7所述的复方制剂，其特征在于，所述药学上可接受的辅料选自填充剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂中的一种或多种。

9.根据权利要求7所述的复方制剂，其特征在于，所述制剂为口服制剂、注射制剂、经皮给药制剂或黏膜给药制剂。

10.权利要求1-6任一所述的组合物、权利要求7-9任一所述的复方制剂在制备治疗人卵母细胞成熟停滞的药物中的应用。

技术总结
本发明属于生物医疗领域，具体公开了一种用于治疗卵子成熟障碍的复方制剂，所述复方制剂包含如下浓度的组分：姜黄素(Curcumin,0.5‑200nmol),二氢香豆素（Dihydrocoumarin,0.1‑100nml）、烟酰胺(Nicotinamide,0.1‑100 mmol）、泽布拉林(Zebularine,0.5‑200μmol),佛司可林(Forskolin,0.5‑100μmol）、图巴辛（Tubacin,0.5‑50μmol）、腺苷三磷酸（ATP,1‑20 mmol）、以及二甲双胍（Metformin,0.5‑20mmol）。本发明针对基因突变引起的卵子成熟障碍这一疑难杂症，通过合理配比构成复方治疗型制剂，促进卵母细胞正常减数分裂进程的推进，加快能量代谢，清除代谢活性氧，有利于卵母细胞核成熟，提高受精率和囊胚发育率，表型挽救显著，治疗效果良好。

技术研发人员：冯睿芝,罗辉,吴甜,尹思越,陈剑华,李操
受保护的技术使用者：南京医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15