一种装载木犀草素的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备方法及应用

本发明涉及医疗保健领域，涉及一种装载木犀草素的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备方法及应用

背景技术：

1、研究表明，癌症、衰老或其它疾病大都与过量自由基的产生有关联。研究清除自由基、抗氧化可以有效克服其所带来的危害。通过口服的抗氧化活性物质其生物活性容易被破坏，为了实现抗氧化生物活性化合物的有效传递和吸收，通常可以使用脂质体、蛋白、无机纳米载体递送。其中蛋白质纳米颗粒因具有生物相容性好等特点，使它们成为十分有潜力的生物活性化合物递送系统。

2、人体重链铁蛋白(hftn)是一种外径为12nm，内径为8nm的球型笼状蛋白，具有良好的生物相容性、降解性，其粒径均一且理想，这是纳米载体在生物活性物质递送过程中非常需要的特性。然而铁蛋白作为一种球形蛋白质不够稳定，在ph 7.5左右时可被消化酶降解且胃内的酶促条件也能降解铁蛋白笼，因此如何解决上述问题值得探究。

3、美拉德反应，又称“非酶棕色化反应”，主要是指还原糖与氨基酸、蛋白质之间的复杂反应，且新生成的共价键对ph、离子强度和温度的变化非常稳定，可以有效保护铁蛋白不被破坏。此外美拉德反应产物还具有抗氧化活性，与铁蛋白包封的抗氧化活性化合物一同发挥作用。本设计利用葡萄糖(glu)和铁蛋白发生美拉德反应制备葡萄糖-铁蛋白(glu-hftn)复合物，制备的复合物包封抗氧化活性物质木犀草素(lut)再次加强了抗氧化性能。

4、通过受控条件下的美拉德反应来制备具有明显功能特性的蛋白质多糖复合物，可以用作食品级输送系统的新型载体，以封装、保护和控制许多生物活性物质的释放。

技术实现思路

1、癌症、衰老或其它疾病大都与过量自由基的产生有关联，为了清除体内过量的自由基而研发了各种各样的抗氧化保健品。本发明提供了一种装载木犀草素的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备方法，复合物可以有效保护木犀草素的生物活性，让其不在胃肠中被破坏。此外，葡萄糖-铁蛋白复合物载体本身具有抗氧化能力，相比仅对生物活性物质进行保护，本方法可进一步增强抗氧化能力，具有很好的应用前景。

2、为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

3、本发明提供一种装载木犀草素的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备方法，在一定的温度和相对湿度条件下，通过美拉德反应制备葡萄糖-铁蛋白复合物。

4、本发明在葡萄糖-铁蛋白复合物的基础上负载木犀草素，对其进行保护。

5、上述装载木犀草素的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备方法包括如下步骤：

6、a、葡萄糖用超纯水溶解；

7、b、将步骤a中的葡萄糖加入到浓度为1mg/ml的10ml铁蛋白超纯水溶液中其质量比为1∶1，常温缓慢搅拌混匀后在-24℃冷冻24h；

8、c、将样品进行冷冻干燥，直至水分去除；

9、d、将冷冻干燥的样品放置在培养皿中，接着将培养皿放入干燥器中，饱和溴化钾提供79％的相对湿度，干燥器用凡士林封口，最后放入60℃的烘箱中，分别在12h、24h、36h和48h取样。

10、e、木犀草素用乙醇溶液溶解，将木犀草素加入到经过透析的4ml葡萄糖-铁蛋白溶液中，其中葡萄糖-铁蛋白溶液存在于tris-hcl(20mm，ph＝8.0)中，将木犀草素和葡萄糖-铁蛋白复合物按摩尔比600∶1的比例投入，在60℃孵育4h；孵育结束后，12000rpm离心12min，分离上清液，在pbs中透析24h。

11、f、本发明未提及的技术均参照现有技术。

12、本发明提供了一种装载木犀草素的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备方法，复合物可以有效保护木犀草素的生物活性，让其不在胃肠中被破坏。此外，葡萄糖-铁蛋白复合物载体本身具有抗氧化能力，相比仅对生物活性物质进行保护，本方法可进一步增强抗氧化能力，具有很好的应用前景。

技术特征：

1.一种装载木犀草素(lut)的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备方法及应用，其特征在于，包括一定条件下的美拉德反应制备葡萄糖-铁蛋白复合物和温度法装载木犀草素。

2.根据权利要求1所述的装载木犀草素的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备方法及应用，其特征在于，美拉德反应制备葡萄糖-铁蛋白复合物。

3.根据权利要求1所述的装载木犀草素的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备方法及应用，其特征在于，温度法可以将木犀草素装载入制备的葡萄糖-铁蛋白复合物中。

4.根据权利要求2所述的装载木犀草素的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备方法及应用，其特征在于，所述美拉德反应制备葡萄糖-铁蛋白复合物的方法是葡萄糖和铁蛋白存在于超纯水溶液中，将其冷冻干燥后饱和溴化钾提供79％的相对湿度，反应温度为60℃。

5.根据权利要求3所述的装载木犀草素的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备方法及应用，其特征在于，所述葡萄糖-铁蛋白复合物负载木犀草素的方法是复合物存在于20mm的tris-hcl溶液中，处理温度为60℃。

6.根据权利要求4-5所述的装载木犀草素的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备方法及应用，其特征在于，铁蛋白为人体重链铁蛋白。

7.根据权利要求1-6所述装载木犀草素的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备方法及应用，其特征在于，所述复合物用于食品级输送系统的新型载体。

8.根据权利4所述装载木犀草素的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备包括以下步骤：

9.根据权利5所述装载木犀草素的葡萄糖-铁蛋白复合物的制备包括以下步骤：

技术总结
本发明公开了一种装载木犀草素(Lut)的葡萄糖‑铁蛋白复合物的制备方法及应用，通过美拉德反应制备葡萄糖‑铁蛋白复合物和温度法装载木犀草素。本发明涉及的葡萄糖‑铁蛋白‑木犀草素纳米粒子(Glu‑HFtn‑Lut)清除DPPH自由基的能力最强，Glu‑HFtn形成的共价键对pH、离子强度、温度和各种酶的变化非常稳定可以有效保护Lut通过胃肠道而不被破坏。此外Glu‑HFtn复合物本身具有较强的抗氧化能力，进一步增强了抗氧化效果。通过受控条件下的美拉德反应制备具有明显功能特性的蛋白质多糖复合物，可以用作食品级输送系统的新型载体，以封装、保护和控制许多生物活性物质的释放。

技术研发人员：张瑜,冯栋阳,杨昆,李讯,王飞
受保护的技术使用者：南京林业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19