一种负载A-PRF可注射温敏水凝胶的制备方法和应用与流程

本发明涉及生物医药，尤其涉及一种负载a-prf可注射温敏水凝胶的制备方法和应用。

背景技术：

1、糖尿病足是指糖尿病患者因糖尿病所致的下肢远端神经病变和/或血管病变导致的皮肤及其深层组织破坏，常合并感染，严重者累及肌肉和骨组织，糖尿病足是糖尿病最严重的慢性并发症之一，具有高发病率、高致死率的特点，糖尿病足慢性创面治疗难度大、周期长、费用高，为患者、家庭和社会带来沉重负担。

2、目前糖尿病足局部创面处理多是清创后采用纱布或一些功能性敷料覆盖，治疗中存在治愈率低、治疗时间长、花费大的问题，对于糖尿病足慢性创面来说，愈合是一个缓慢的过程，因此需要一种作用持久的生物材料缓慢地发挥作用而促进创面的愈合，富白细胞-血小板纤维蛋白（leucocyte and platelet rich fibrin，l-prf）是第二代血小板凝胶制品，在一定程度上可以促进糖尿病足溃疡愈合，但治疗效果有待提高，因此，急需一种治疗效果好，且安全性高的药物。

3、现有专利（公告号：cn114209806b）改良型富血小板纤维蛋白在制备治疗糖尿病足溃疡的药物中的应用，采用改良型富血小板纤维蛋白具有疏松的网状纤维蛋白结构，可以富含更多血小板及白细胞，能够更加持续地释放多种生长因子及细胞因子，更有利于组织再生和创伤修复，利用本发明所述的改良型富血小板纤维蛋白制备的药物能够缩短糖尿病足溃疡的愈合时间、提高愈合率，具有良好的治疗效果，也具有较高的安全性。

4、针对于上述问题，现有专利给出了解决方案，但是在实际使用的过程中，a-prf膜中a-prf的可制备量并不巨大，有不规则难愈性创面需要治疗的病人难以将制备的a-prf膜充分填充、贴合不规则创面，存在一定的局限性，影响患者的组织再生和创伤修复，需要对此进行改进。

5、为此，提出一种负载a-prf可注射温敏水凝胶的制备方法和应用。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题在于，提供一种将冻干a-prf与温敏型水凝胶（壳聚糖-β-甘油磷酸钠）相结合，在促进创面血管化的同时填充、贴合不规则创面的可注射温敏型水凝胶的制备方法和应用。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：一种负载a-prf可注射温敏水凝胶的制备方法，包括如下步骤：

3、s1：抽取健康sd大鼠腹主动脉血液并对其进行离心分离，分离后得到中间凝胶层为a-prf，而后将制得的a-prf冻干、研磨得到a-prf粉末备用；

4、s2：壳聚糖粉末溶解在0.1m冰乙酸中24h制备2%的壳聚糖溶液，将β-甘油磷酸钠溶解在去离子水（56%w / v）中得到β-甘油磷酸钠溶液，然后将β-甘油磷酸钠溶液与壳聚糖溶液进行冷却；

5、s3：将β-甘油磷酸钠溶液在冰浴中轻轻搅拌并逐滴滴加到壳聚糖溶液中，之后将其放于冰上相融30min得到可注射的温敏型水凝胶，并于冰上向壳聚糖温敏水凝胶中加入a-prf，搅拌10min得到负载a-prf可注射温敏水凝胶。

6、优选的，在所述s1中，大鼠腹主动脉血液抽取后并在1min内放入离心机中以1500r/min的转速离心14min。

7、优选的，在所述s1中，a-prf于-80℃冰箱冷冻24h后，冻干机冻干12h，使用研磨棒和研磨皿研磨成粉末。

8、优选的在所述s2中，β-甘油磷酸钠溶液与壳聚糖溶液分别储存在4℃冰箱冷却。

9、优选的在所述s3中，β-甘油磷酸钠溶液与壳聚糖溶液的相融时间为30min。

10、优选的在所述s2～s3中，可注射的温敏型水凝胶质量浓度为1～5％的中分子量壳聚糖溶液与质量浓度为50～60％的β-甘油磷酸钠水溶液的混合溶液，其中中分子量壳聚糖溶液和β-甘油磷酸钠水溶液的体积比为0.5～4：6～9.5，其中中分子量壳聚糖的分子量为300000～500000da。

11、优选的，在所述s3中，a-prf冻干粉末与可注射的温敏型水凝胶的搅拌混合时间为10min。

12、优选的，在所述s1～s3中，a-prf的使用浓度为1%—20%，壳聚糖的使用浓度1%—3%，β-甘油磷酸钠的使用浓度为56%，壳聚糖：β-甘油磷酸钠的比例为3:1-9:1。

13、一种负载a-prf可注射温敏水凝胶的应用，所述负载a-prf可注射温敏水凝胶应用于糖尿病伤口修复领域。

14、综上所述，与现有技术相比，本发明的有益效果是：

15、1、首次将冻干a-prf与温敏型水凝胶（壳聚糖-β-甘油磷酸钠）相结合，更加简单的制备了一种既能够充分填充不规则创面，又能缓释生长因子的复合温敏型水凝胶，其中冻干a-prf的制备和选用能够减少第一代血小板浓缩物prp需要使用抗凝剂的不良影响、比第二代血小板浓缩物prf更加符合生理的过程、减少a-prf的用量、较长期保存、使用方便；

16、2、该材料已经在动物实验中证明其可以促进糖尿病大鼠创面的愈合、填充不规则的糖尿病伤口，可以在最节约a-prf的情况下，达到比临床常用促愈合药物（外用人粒细胞巨噬细胞刺激因子凝胶）更佳的效果。

技术特征：

1.一种负载a-prf可注射温敏水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种负载a-prf可注射温敏水凝胶的制备方法，其特征在于，在所述s1中，大鼠腹主动脉血液抽取后并在1min内放入离心机中以1500r/min的转速离心14min。

3.根据权利要求1所述的一种负载a-prf可注射温敏水凝胶的制备方法，其特征在于，在所述s1中，a-prf于 -80℃冰箱冷冻24h后，冻干机冻干12h，使用研磨棒和研磨皿研磨成粉末。

4.根据权利要求1所述的一种负载a-prf可注射温敏水凝胶的制备方法，其特征在于，在所述s2中，β-甘油磷酸钠溶液与壳聚糖溶液分别储存在4℃冰箱冷却。

5.根据权利要求1所述的一种负载a-prf可注射温敏水凝胶的制备方法，其特征在于，在所述s3中，β-甘油磷酸钠溶液与壳聚糖溶液的相融时间为30min。

6.根据权利要求1所述的一种负载a-prf可注射温敏水凝胶的制备方法，其特征在于，在所述s2～s3中，可注射的温敏型水凝胶质量浓度为1～5％的中分子量壳聚糖溶液与质量浓度为50～60％的β-甘油磷酸钠水溶液的混合溶液，其中中分子量壳聚糖溶液和β-甘油磷酸钠水溶液的体积比为0.5～4：6～9.5，其中中分子量壳聚糖的分子量为300000～500000da。

7.根据权利要求1所述的一种负载a-prf可注射温敏水凝胶的制备方法，其特征在于，在所述s3中，a-prf冻干粉末与可注射的温敏型水凝胶的搅拌混合时间为10min。

8.根据权利要求1所述的一种负载a-prf可注射温敏水凝胶的制备方法，其特征在于，在所述s1～s3中，a-prf的使用浓度为1%—20%，壳聚糖的使用浓度1%—3%，β-甘油磷酸钠的使用浓度为56%，壳聚糖：β-甘油磷酸钠的比例为3:1-9:1。

9.一种负载a-prf可注射温敏水凝胶的应用，其特征在于，所述负载a-prf可注射温敏水凝胶应用于糖尿病伤口修复。

技术总结
本发明涉及生物医药技术领域，公开了一种负载A‑PRF可注射温敏水凝胶的制备方法和应用，包括如下步骤，S1：抽取健康SD大鼠腹主动脉血液并对其进行离心分离，得到中间凝胶层为A‑PRF，而后将制得的A‑PRF冻干、研磨得到A‑PRF粉末备用，S2：壳聚糖粉末溶解在0.1M冰乙酸中24h制备2%的壳聚糖溶液，将β‑甘油磷酸钠溶解在去离子水中得到β‑甘油磷酸钠溶液，然后将β‑甘油磷酸钠溶液与壳聚糖溶液进行冷却，S3：将β‑甘油磷酸钠溶液在冰浴中搅拌并逐滴滴加到壳聚糖溶液中，并于冰上向壳聚糖温敏水凝胶中加入A‑PRF并搅拌得到负载A‑PRF可注射温敏水凝胶，本发明可以促进糖尿病创面的愈合、填充不规则的糖尿病伤口，以更经济使用A‑PRF的情况下，达到比临床常用促愈合药物更佳的效果。

技术研发人员：柴家科,荀浩怡,苏小薇,迟云飞,胡方超,吴育寿,刘翔宇,刘甜,韩绍芳,段红杰,曲毅睿,郑金光,魏斌,程跃
受保护的技术使用者：中国人民解放军总医院第四医学中心
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15