本发明属于生物医用材料领域，特别涉及一种用于神经修复的自组装温敏水凝胶及其制备方法。
背景技术：
1、使用自体或异体神经组织进行修复，尽管这些材料的修复效果佳，但存在供体有限和免疫排斥等问题；利用生物降解材料(如胶原蛋白、聚乳酸等)制成的神经管状，但上述材料降解速度难以精准控制，过快降解可能导致炎症反应，而过慢降解则可能影响神经纤维的重塑，影响神经纤维生长。此外，尽管研究众多，但现有技术和材料仍面临以下挑战：1.神经再生微环境调控不足。神经损伤修复依赖于细胞外基质、生长因子和神经元之间的复杂相互作用。然而，现有材料在提供适宜的微环境方面仍存在不足，尤其是在促进神经元轴突延伸、减少瘢痕组织形成方面，仍需进一步优化。2.功能恢复的不确定性。虽然神经导管和生物材料能够促进神经纤维生长，但许多神经修复方案仅着眼于结构性修复，而忽视了功能性恢复。如何确保新生神经纤维能够精准连接目标组织、恢复原有生理功能，仍是亟待突破的关键问题。
2、周围神经损伤可能由机械损伤、缺血、炎症、毒性作用等多种因素引起，常见原因包括：车祸、运动损伤等，导致神经断裂或压迫：糖尿病等疾病可导致神经病变，或化疗药物、重金属中毒等，可能导致神经退行性变。目前，周围神经损伤的修复方法主要包括：1.自体神经移植，但受限于供体不足、结构匹配问题难以得到普及。2.利用生物材料(如胶原蛋白、聚乳酸)制成人工神经导管，引导神经纤维生长，但现有导管材料难以提供适宜的微环境，影响神经再生。3.干细胞治疗：利用间充质干细胞或神经干细胞促进神经再生，移植细胞的存活率和分化方向难以精准控制。
技术实现思路
1、本发明所要解决的技术问题在于，提供一种用于神经修复的自组装温敏水凝胶及其制备方法，所述水凝胶具有温敏自组装特性，在低温下保持液态，易于注射，在体温环境下迅速形成稳定的三维凝胶结构，适合作为神经修复支架，促进神经细胞黏附、生长及轴突再生。
2、本发明是这样实现的，提供一种用于神经修复的自组装温敏水凝胶，原料包括泊洛沙姆(pluronic)、脱细胞基质及神经因子，所述脱细胞基质、泊洛沙姆、神经因子的质量浓度比为5～10：10～20：1～4。
3、进一步地，所述脱细胞基质、泊洛沙姆、神经因子的质量浓度比为5：15：1。
4、一种所述用于神经修复的自组装温敏水凝胶制备方法，包括如下步骤：
5、(1)制备泊洛沙姆溶液：将泊洛沙姆加入去离子水中进行溶解，形成均匀溶液；
6、(2)制备脱细胞基质溶液：将脱细胞基质粉末溶解于含有0.9mg/ml～1.1mg/ml胃蛋白酶的0.01m hcl中，通过250rpm～350rpm搅拌22h～26h，形成均匀溶液；随后用0.1mnaoh调整ph到6.5～7.5，储存在2℃～5℃冰箱备用；
7、(3)形成自组装温敏水凝胶：将泊洛沙姆溶液与脱细胞基质溶液混合并加热，形成双网络三维凝胶结构；
8、(4)添加神经因子：在泊洛沙姆溶液与脱细胞基质溶液混合后的体系中加入神经因子，通过机械搅拌或超声震荡均匀分散，在36℃～38℃加热条件下形成具有生物活性的水凝胶。
9、进一步地，步骤(1)中泊洛沙姆溶解的温度为4℃～10℃。
10、进一步地，步骤(2)中脱细胞基质粉末溶解时，其浓度为2mg/ml～20mg/ml。
11、进一步地，步骤(3)中，水浴加热的温度在30℃～37℃，加热时间为30～40分钟。
12、进一步地，步骤(2)中所述脱细胞基质采用小肠脱细胞基质，其制备流程如下：
13、(a)选取原料：选择无病原体污染且来源健康的猪小肠；
14、(b)初步处理：移除猪小肠的肌肉层和粘膜层，将处理后的小肠样品置于胰酶溶液中进行处理，在室温下处理22小时～26小时，且每隔11小时～13小时更换一次上述溶液；
15、(c)冲洗残留：用超纯水清洗样品2 -5遍；
16、(d)二次处理：将小肠浸入含1％聚乙二醇辛基苯基醚的溶液中，在37℃条件下搅拌处理24小时；
17、(e)酶处理：使用浓度为50u/ml的脱氧核糖核酸酶在36℃～38℃对样品孵育12小时，其中脱氧核糖核酸酶的配比为1000u加入200ml水，并将配比后的溶液倒入湿克重为10g的小肠样品中，孵育过程在水浴锅或保温箱中进行；
18、(f)再次清洗：用超纯水清洗样品2～5次，每次清洗时间为12分钟-20分钟，之后滤去多余水分；
19、(g)消毒处理：将样品浸入含4％乙醇的1％过氧乙酸溶液中，在室温下搅拌3.5小时～4.5小时；然后用pbs冲洗2～5次，每次10～20分钟，然后滤干水分；
20、(h)干燥保存：将样品在-25℃～-15℃冷冻2h～2.5h，再使用冻干机干燥40h～50h，最后采用伽马射线或环氧乙烷进行灭菌处理，并在2℃～5℃条件下保存。
21、进一步地，流程(b)中所述胰酶溶液的配比为每10g小肠样品加入150ml胰酶和3g十二烷基硫酸钠。
22、进一步地，流程(d)中含1％聚乙二醇辛基苯基醚的溶液配比为每10g小肠样品加入10ml triton x-100和1000ml水。
23、进一步地，流程(g)中含4％乙醇的1％过氧乙酸溶液的配比为20ml乙醇、5ml过氧乙酸和480ml去离子水。
24、本发明与背景技术相比，本发明所述用于神经修复的自组装温敏水凝胶，其原料中的脱细胞基质采用小肠脱细胞基质，其双网络结构中的脱细胞基质能提供天然细胞外基质，可支持细胞黏附与增殖，为神经元轴突的生长与延伸创造有利条件，从而优化神经微环境；通过在水凝胶中添加神经因子，通过神经因子提高神经元存活率、减少凋亡，在神经损伤修复过程中，有助于维持神经元的活性，为神经再生提供更有利的环境，同时增强神经功能恢复，加速损伤组织的修复，进一步改善神经再生微环境；
25、该水凝胶在体温环境下能迅速形成稳定的三维凝胶结构，适合作为神经修复支架，这种结构不仅为神经纤维生长提供引导，而且其稳定性有助于新生神经纤维精准连接目标组织；所述水凝胶的三维凝胶结构提供适宜的细胞黏附与生长环境，可作为神经干细胞或间充质干细胞的培养基质；通过将干细胞培养在该水凝胶中并进行移植治疗，有助于提高移植细胞的存活率和控制分化方向，促进神经功能的恢复，提高功能恢复的确定性；
26、所述水凝胶在低温如4℃下保持液态，易于通过微创手术注射进入目标区域；在体温如37℃下迅速转变为凝胶结构，确保局部固定，避免扩散流失，从而使其可以精准定位，适用于局部神经损伤的治疗，提高了神经修复材料的生物利用率，克服了自体神经移植供体不足、结构匹配问题以及人工神经导管难以精准放置等不便；泊洛沙姆的流变学特性使水凝胶的降解速率可调，能够避免降解过快导致炎症反应，或降解过慢影响组织替换。此外，水凝胶降解后产物无毒、可被机体代谢吸收，保证了长期应用的安全性。
1.一种用于神经修复的自组装温敏水凝胶，其特征在于，原料包括泊洛沙姆、脱细胞基质及神经因子，所述脱细胞基质、泊洛沙姆、神经因子的质量浓度比为5～10：10～20：1～4。
2.如权利要求1所述用于神经修复的自组装温敏水凝胶，其特征在于，所述脱细胞基质、泊洛沙姆、神经因子的质量浓度比为5：15：1。
3.一种如权利要求1～2任意一项所述用于神经修复的自组装温敏水凝胶制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.如权利要求3所述水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(1)中泊洛沙姆溶解的温度为4℃～10℃。
5.如权利要求3所述水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中脱细胞基质粉末溶解时，其浓度为2mg/ml～20mg/ml。
6.如权利要求3所述水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，水浴加热的温度在30℃～37℃，加热时间为30～40分钟。
7.如权利要求3所述水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述脱细胞基质采用小肠脱细胞基质，其制备流程如下：
8.如权利要求7所述用于神经修复的自组装温敏水凝胶，其特征在于，流程(b)中所述胰酶溶液的配比为每10g小肠样品加入150ml胰酶和3g十二烷基硫酸钠。
9.如权利要求7所述用于神经修复的自组装温敏水凝胶，其特征在于，流程(d)中含1％聚乙二醇辛基苯基醚的溶液配比为每10g小肠样品加入10ml triton x-100和1000ml水。
10.如权利要求7所述用于神经修复的自组装温敏水凝胶，其特征在于，流程(g)中含4％乙醇的1％过氧乙酸溶液的配比为20ml乙醇、5ml过氧乙酸和480ml去离子水。