本发明涉及多糖脂质体，更具体的说是涉及一种促吸收金针菇多糖纳米脂质体及其制备方法与应用。

背景技术：

1、金针菇多糖（fvp）是金针菇中的重要活性成分，具有免疫调节、抗氧化、抗炎等功能，在功能食品与生物医药领域具有良好应用潜力。然而，fvp属于亲水性生物大分子，口服后不仅易受到胃肠道复杂环境影响，而且难以有效通过覆盖于肠上皮表面的黏液层，导致其在肠道黏膜表面的滞留、穿透效率不足，限制了其功能活性的充分发挥。

2、肠道黏液层是口服活性成分到达肠上皮前的重要屏障。纳米递送体系进入肠道后，需要经历黏液层接触、黏附、滞留及向黏膜组织方向迁移等过程。若与黏液层作用过弱，则难以在肠道局部停留；若与黏液层作用过强，则易被黏液层捕获，反而不利于进一步向肠组织内部穿透。因此，单纯提高黏液黏附能力并不能完全解决口服递送问题，如何兼顾黏液层有效接触、黏膜滞留和组织穿透，是提高fvp肠道黏膜穿透能力的关键。

3、纳米脂质体是由磷脂双分子层构成的纳米囊泡，具有水相内核和脂质膜结构，可包载亲水性或疏水性活性成分，并具有良好的生物相容性和载体保护作用，是改善fvp口服递送效果的有效载体。现有口服脂质体多通过表面修饰改善胃肠道递送效果，但该类策略通常存在组成复杂、工艺繁琐和规模化制备受限等问题。传统脂质体通常以胆固醇（ch）作为膜稳定剂，用于调节磷脂双分子层的流动性、机械强度和稳定性。然而，ch对膜刚性和膜通透性的调控可能影响脂质体与肠道黏液层及上皮界面的相互作用，且并非食品递送体系中最理想的功能膜材。植物甾醇酯（se）与ch具有相似甾核结构，可嵌入脂质体膜并调节膜结构，同时更符合食品递送体系对天然性和应用安全性的需求。目前，se用于金针菇多糖纳米脂质体时，如何通过膜材组成和粒径协同调控肠道黏膜穿透行为，仍缺乏成熟技术方案。

4、综上，现有技术在金针菇多糖口服递送方面仍存在明显局限：游离fvp难以有效通过肠道黏液屏障，普通脂质体对黏膜穿透行为调控不足，传统胆固醇脂质体难以同时兼顾膜稳定性、食品适用性和黏膜穿透能力。

5、因此，如何制备一种粒径可控、膜结构稳定、黏液层通过能力强且黏膜穿透效率高的促吸收金针菇多糖纳米脂质体，是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种促吸收金针菇多糖纳米脂质体及其制备方法与应用，以解决现有技术中金针菇多糖口服后难以有效通过肠道黏液屏障、在肠道黏膜表面滞留不足及向肠组织内部穿透能力低等问题。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种促吸收金针菇多糖纳米脂质体，包括以下重量份的原料：金针菇多糖10-400份、磷脂100份、阳离子脂质5-25份和膜结构调控组分10-50份。

4、进一步，上述金针菇多糖为通过水提、酶提、超声辅助提取、微波辅助提取、酸提、碱提中的一种或多种方法获得的金针菇多糖，或为商品化金针菇多糖。

5、进一步，上述磷脂为二棕榈酸磷脂酰胆碱（dppc）。

6、进一步，上述阳离子脂质为2,3-二油酰基-丙基-三甲基氯化铵（dotap）。

7、进一步，上述膜结构调控组分为植物甾醇酯（se）。

8、本发明的创新点在于：

9、（1）以植物甾醇酯作为膜结构调控组分，与磷脂和阳离子脂质共同构建脂质体膜结构，调控脂质体的膜组成、粒径和表面电位，从而为其与肠道黏液层及黏膜表面的有效相互作用提供结构基础；

10、（2）通过植物甾醇酯与dppc、dotap的协同组装，使金针菇多糖包封于脂质体内水相中，形成粒径适宜、表面带正电且分散性良好的金针菇多糖纳米脂质体，提高其在口服递送过程中与肠道黏液层接触和黏膜表面有效滞留的能力；

11、（3）通过植物甾醇酯膜材调控和粒径控制，改善金针菇多糖纳米脂质体与肠道黏液层的相互作用行为，避免其在黏液层中过度滞留，同时增强其在肠道黏膜表面的有效滞留，并促进其进一步向肠组织内部穿透，从而提升金针菇多糖的肠道黏膜穿透能力；

12、（4）植物甾醇酯可作为膜结构调控组分参与脂质体膜构建，并与dppc、dotap共同形成适于包封金针菇多糖的脂质双分子层结构，该体系能够调控脂质体的粒径、表面电位和分散状态，使金针菇多糖纳米脂质体在保持良好包封和稳定性的基础上，具备与肠道黏液层适度相互作用的理化基础，从而有利于其在肠道黏膜表面的有效滞留及向肠组织内部穿透；

13、（5）本发明并非单纯以提高金针菇多糖包封率为目的，而是通过引入植物甾醇酯膜材并结合粒径控制，改善金针菇多糖纳米脂质体与肠道黏液层的相互作用行为，使其在保持有效黏液接触的同时，降低被黏液层过度捕获的倾向，从而促进其向肠道黏膜表面滞留及向肠组织内部迁移；

14、（6）本发明以dppc为结构磷脂、dotap为阳离子脂质、植物甾醇酯为膜结构调控组分构建复合脂质膜材，将上述膜材溶解于有机溶剂后，经减压旋蒸形成脂质薄膜，随后采用金针菇多糖溶液对脂质薄膜进行水合，使金针菇多糖包封于脂质体内水相中，再通过超声分散和膜挤出处理调控脂质体粒径及分散状态，最终获得具有肠道黏膜滞留和肠组织穿透能力的促吸收金针菇多糖纳米脂质体；

15、（7）本发明促吸收金针菇多糖纳米脂质体为植物甾醇酯调控的正电性纳米脂质体，粒径为80-140 nm，pdi≤0.3，具有良好的纳米分散性和储藏稳定性；与传统胆固醇脂质体相比，本发明促吸收金针菇多糖纳米脂质体降低了过度黏液滞留倾向，其60 min体外肠道黏液黏附率相对降低约8.68%-17.35%，可降低过度黏液滞留倾向；其空肠黏膜相关荧光强度和肠组织穿透荧光强度分别提高至传统胆固醇脂质体平均值的6.27倍和3.93倍，表明其同时提高了肠道黏膜有效滞留和肠组织穿透能力；

16、（8）本发明主要通过植物甾醇酯膜材调控和粒径控制提高金针菇多糖纳米脂质体的肠道黏膜穿透能力；体内外实验表明，本发明促吸收金针菇多糖纳米脂质体能够调控肠道黏液层相互作用行为，增强肠道黏膜有效滞留，并促进其向肠组织内部穿透；

17、（9）本发明以植物甾醇酯作为膜结构调控组分，与dppc、dotap共同构建金针菇多糖正电性纳米脂质体。与传统胆固醇脂质体相比，该体系能够更有效调节与肠道黏液层的相互作用行为，在保持有效黏液接触的同时降低过度黏液滞留倾向，并增强肠道黏膜有效滞留及肠组织穿透能力，从而提高金针菇多糖的肠道黏膜穿透能力。

18、一种促吸收金针菇多糖纳米脂质体的制备方法，具体包括以下步骤：

19、（1）按上述金针菇多糖纳米脂质体的重量份数称取各原料；

20、（2）将金针菇多糖溶解于磷酸缓冲溶液中，得到金针菇多糖溶液；

21、（3）将磷脂、阳离子脂质和膜结构调控组分混合溶解在有机溶剂中，减压旋蒸除去有机溶剂，得到脂质薄膜；

22、（4）采用金针菇多糖溶液对脂质薄膜进行水合，再经超声分散和膜挤出，即得促吸收金针菇多糖纳米脂质体。

23、进一步，上述步骤（2）中，金针菇多糖溶液的浓度为2-20 mg/ml，体积为5-20 ml。

24、进一步，上述步骤（3）中，有机溶剂为氯仿；减压旋蒸的真空度为0.03-0.08 mpa，水浴温度为40-60℃，转速为30-60 rpm。

25、进一步，上述步骤（4）中，水合的温度为40-60℃，转速为100-200 rpm，时间为10-60 min；超声分散的条件为冰水浴，功率为200-500 w，时间为5-30 min，工作模式为2.0 s开、2.0 s关；膜挤出采用孔径为100-200 nm的聚碳酸酯（polycarbonate，简称pc）膜，温度为40-60℃。

26、采用上述进一步的有益效果在于，本发明将结构磷脂二棕榈酸磷脂酰胆碱（dppc）、阳离子脂质2,3-二油酰基-丙基-三甲基氯化铵（dotap）与膜结构调控组分植物甾醇酯（se）共同溶解于有机相中形成脂质体有机相，经减压旋蒸形成脂质薄膜，再以金针菇多糖水溶液进行水合，使金针菇多糖包封于脂质体内水相中；随后通过超声分散和膜挤出处理，获得植物甾醇酯调控的正电性金针菇多糖纳米脂质体。

27、本发明还请求保护一种上述促吸收金针菇多糖纳米脂质体或上述制备方法制得的促吸收金针菇多糖纳米脂质体在制备口服食品（尤其是保健食品）或药品中的应用。

28、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

29、（1）具备支撑肠道黏膜穿透的理化基础

30、与胆固醇脂质体相比，本发明促吸收金针菇多糖纳米脂质体具有更高的表面正电位和多糖包封率，包封率均高于60%，平均包封率提高约27.2%，为其后续与肠道黏液层发生有效相互作用并进一步实现黏膜穿透提供理化基础。

31、（2）储藏稳定性有利于维持肠道黏膜穿透相关特征

32、在4℃避光储藏14天后，本发明促吸收金针菇多糖纳米脂质体的粒径增幅整体较低，zeta电位衰减幅度仅为2.5%-3.7%，明显低于胆固醇脂质体的14.0%-21.1%，说明其更有利于维持纳米分散状态和表面电荷特征，为保持肠道黏膜穿透性能提供稳定性支撑。

33、（3）肠道黏液层相互作用更有利于黏膜穿透

34、本发明促吸收金针菇多糖纳米脂质体能够快速与猪小肠黏液发生作用，并在达到黏附峰值后适度下降；其60 min黏液黏附率为70.47%-77.66%，低于胆固醇脂质体约85%的持续高黏附水平，说明其在保持有效黏液接触的同时，降低了被黏液层过度捕获的倾向，有利于后续向肠道黏膜及肠组织内部穿透。

35、（4）肠道黏膜有效滞留和肠组织穿透能力显著提升

36、本发明促吸收金针菇多糖纳米脂质体在空肠部位表现出明显优势，其黏膜相关荧光强度约为胆固醇脂质体平均值的6.27倍，肠组织穿透荧光强度约为3.93倍，说明本发明能够增强金针菇多糖纳米脂质体在肠道黏膜表面的有效滞留，并促进其向肠组织内部穿透。

37、综上，本发明以二棕榈酸磷脂酰胆碱（dppc）为结构磷脂，以2,3-二油酰基-丙基-三甲基氯化铵（dotap）为阳离子脂质，以植物甾醇酯（se）为膜结构调控组分共同构建脂质体膜结构，并采用薄膜水合法使金针菇多糖包封于脂质体内水相中，所制得的金针菇多糖纳米脂质体为植物甾醇酯调控的正电性纳米脂质体，粒径为80-140 nm，pdi≤0.3，具有良好储藏稳定性；同时，该脂质体能够调节其与肠道黏液层的相互作用行为，在保持有效黏液接触的同时降低过度黏液滞留倾向，并增强其在肠道黏膜表面的有效滞留及向肠组织内部的穿透能力。体内外实验结果表明，与传统胆固醇脂质体相比，本发明促吸收金针菇多糖纳米脂质体能够更有效提升肠道黏膜穿透能力，促进吸收。