专利名称：一种全天然解香烟毒保健品及其生产方法
技术领域：
本发明涉及一种具有消除香烟毒素的保健品，具体地说是以药膳同源的天然食用植物为原料制备的天然保健品，本发明还涉及该保健饮品的制备方法。
通过流行病学调查发现吸烟不仅可以引起肺癌、口腔癌和食道癌，甚至还可以导致胃癌、膀胱癌、子宫癌和肾癌。吸烟是怎样引起这些癌症的呢？过去人们一直认为吸烟的毒性来自尼古丁，尼古丁确实是一种有毒的物质。食入少量即可引起腹泻、呕心和痉挛，甚至导致神志不清。但是，到目前为止，还没有人报道过尼古丁和几种癌有什么直接关系。而最近研究表明，分布在吸烟的焦油和气相烟雾中的大量自由基是非常活泼的，它们可以直接或间接地攻击细胞成分、杀伤细胞，导致疾病和癌症的发生。所谓直接(毒性)作用就是吸烟中的某些自由基可以直接损伤细胞成分，导致疾病的产生和癌的形成，焦油相中的多环芳香烃自由基就是一类直接致癌物，它可以引起多种癌的发生。焦油相中的Q./QH.自由基与氧气可以引起细胞损伤，导致一系列严重疾病和癌的发生。同时Q./QH.还可以直接与细胞的DNA结合，导致细胞转化。吸烟气相中的烷基和烷氧基自由基反应性极强，它可以引起细胞膜脂质过氧化，损伤细胞膜，导致多种疾病和癌的发生。所谓间接(毒性)作用是指吸烟焦油相和气相中的自由基可以引起嗜中性细胞在肺和气囊中聚积，并能激活它们产生大量活性氧自由基，这些高反应活性的氧自由基再损伤细胞，导致癌和疾病的发生。另外，吸烟中的自由基可以使肺细胞中的蛋白酶抑制剂去活性，这样就等于活化了肺细胞中的蛋白酶(主要是胶原蛋白酶)，蛋白酶的活化进而水解肺细胞的胶原蛋白和其它蛋白，使细胞损伤，导致疾病的产生。因此，应当加强对吸烟中自由基的研究，并我出有效的方法来清除吸烟中的自由基对人类健康的危害性。
我国学者忻文娟长期从事香烟对人体健康危害的探索。她认为，既然至今世界上还未找到戒烟的有效办法，何不从解烟毒的思路找新的途径。这一课题目前世界上也只有少数先进国家在进行研究。但应用药物防治吸烟所致机体损伤，目前尚未见报道。
本发明的目的在于提供一种保健品，该保健品为吸烟人服用后能增加机体对香烟烟雾及其有害物质损伤的防御机能，保护和修复机体细胞，防治吸烟过多导致的呼吸道粘膜损伤，肺心脑血管病理改变，脂质过氧化物升高，SOD活性及免疫功能下降。同时，该保健品对自由基有相当良好的清除作用，提高机体对缺氧的耐受性，使致癌物苯并(α)芘灭活。总之，该保健品应能有效清除因吸烟产生的自由基对人类健康带来的危害性。
本发明的另一个目的是提供该保健品的制备方法。
本发明的解决方案是基于本发明人通过长期观察，发现在自然界中存在的动物自救现象，从中得到启迪；吸烟对人体所带来的危害不是局部的，而是广泛性、多组织多器官的损害；我国传统医学的中医整体观念等方面原则，我国有着丰富的药膳同源的天然食用植物资源，从中筛选出具有清热解毒、活血化瘀、扶正固本、培补元气等作用的天然食用植物，根据中医理论组方，提取精华，使其达到调节机体全身生理活动的机能。能增加机体对香烟烟雾及其有害物质损伤的防御机能，保护和修复机体细胞，防治吸烟过多导致的呼吸道粘膜损伤，肺心脑血管病理改变，脂质过氧化物升高，SOD活性及免疫功能下降。同时，该保健品对自由基有相当良好的清除作用，提高机体对缺氧的耐受性，使制癌物苯并(α)芘灭活。
本发明保健品是由下列组分制成的(用量为重量份)①苦苣8-25份①薏苡仁10-30份 ①枸杞子10-25份①山楂13-26份①何首乌5-18份 ①黄精4.5-15份①松子2-8份①白芍5-13份①灵芝2-6份 ①猪毛菜6-25份①菟丝子3-10份 ①老鹳草4-8份①桔梗菜10-25份 ①丹参8-24份 ①麦冬7-24份 ②淫羊藿8-24份①党参7-21份①金银花10-25份 ①百合8-28份 ①生姜10-20份①瓜萎8-26份②当归3-10份 ②抱茎苦荬菜8-28份 ②五味子5-16份②陈皮8-26份制备本发明保健品的配方优选重量配比范围是①苦苣12.5-18份 ①薏苡仁13-20份 ①枸杞子10-18份①山楂8-21份①何首乌8-12份 ①黄精7.5-11份①松子2.5-3.5份①白芍7.5-10份①灵芝3-4份 ①猪毛菜10-20份 ①菟丝子4-8份 ①老鹳草5-7.5份①桔梗菜13-19份 ①丹参10-20份 ①麦冬12-17份 ②淫羊藿12-18份①党参12.5-18份 ①金银花12,5-20份 ①百合10-20份 ①生姜10-20份①瓜蒌12-20份 ②当归5-8份 ②抱茎苦荬菜12-18份 ②五味子8-11份②陈皮12-18份本发明保健品的最佳重量配比是①苦苣5份 ①薏苡仁5份①枸杞子5份 ①山楂5份①何首乌3份①黄精3份 ①松子1份 ①白芍3份①灵芝1份 ①猪毛菜5份①菟丝子2份 ①老鹳草2份①桔梗菜5份①丹参5份 ①麦冬5份 ②淫羊藿5份①党参5份 ①金银花5份①百合5份 ①生姜5份①瓜蒌5份 ②当归2份 ②抱茎苦荬菜5份 ②五味子3份②陈皮5份将上述各组份制成本发明保健品的生产方法是按以下生产工艺进行生产考虑到成品的口感，所以将配方中的成分分为两部份，其一部份(配方中标①，即原料1)加工成液体剂型，另一部份(配方中标②，即原料2)制成固体剂型。
1， 原料1↓清洗净料↓加水，100℃蒸煮两次，第一次加水8倍，第二次加水6倍。
↓每次蒸煮1.5-2小时，后4层纱布过滤↓将以上两次所得滤液混合滤液↓将滤液浓缩至原量的二分之一。
↓(加等量乙醇混合后静置24小时，去沉淀)上清液↓(蒸发，回收乙醇)母液↓按0.02％的量加入高蛋白糖后溶解后过滤营养液↓灌装，经105蒸汽灭菌30分钟、冷却、↓清洗外瓶、凉干、贴签、包装成品
2，原料2↓清洗净料↓加水，100℃蒸煮两次，第一次加水8倍，第二次加水6倍。
↓每次蒸煮1.5-2小时，后4层纱布过滤↓将以上两次所得滤液混合滤液↓将滤液浓缩至原量的二分之一。
↓(加等量乙醇混合后静置24小时，去沉淀)上清液↓(蒸发，回收乙醇)浓缩液 浓缩液相对密度为1.30-1.33↓加淀粉拌匀，烘干并粉碎至通过120目筛粉料↓装胶囊或制成糖衣片剂、压板成品3，将以上液体成品及胶囊或片剂成品装C式拖盘盒内而成本发明之产品。
4，每次服用一支营养液(10ml)和两粒胶囊或片剂，一日两至三次。
本发明的保健品经测定(全配方测定)，蛋白质、维生素及微量元素含量如下表1 JYD营养液蛋白质及维生素含量的测定结果mg/100g mg/100g g/100g维生素A -维生素B1 0.02水份 75.5维生素B2 0.09维生素B6 0.07蛋白质1.7维生素C 811.0维生素E 0.32尼克酸1.36葫萝卜素 6.66表2 JYD营养液微量元素含量的测定结果μg/ml μg/mlμg/mlFe 43.10 Zn3.80Ca1501.0Cu 0.46 Mn9.97Mg 549.0K 428.7 Na 1636.5 P 492.5Se 0.020μg/g本发明各项检验、检测结果表明，有下述优点1，JYD毒理学试验JYD对小鼠的急性毒性试验结果表明，JYD对两种小鼠的急性毒性试验的LD50均大于10g/kg体重，根据急性毒性分级，JYD属于实际无毒物。
致畸变试验结果表明，JYD对动物骨髓细胞不产生畸变作用。
小鼠精子畸变试验结果表明JYD对动物精子不产生畸变作用。
Ames氏试验结果表明JYD对TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株，无论是直接作用还是代谢活化作用，均未呈现致突变性。
2，JYD解除香烟毒的作用通过自由基、微核、Amest和SCE实验，将其检测数据列表并作相应分析组别 阴性对照组 试验组 阳性对照组 治疗组(正常) (JYD) (香烟凝集物) (JYD＋香烟疑集物体外肝组织中MDA含量32.8±3.24.2±0.855.7±3.53.6±1.8(nmol/克组织)体内肝组织中MDA含量3.05±0.51.35±0.4 3.78±0.81.68±0.4(nmol/gw)体内脑组织中MDA含量3.86±0.72.02±0.4 4.51±0.92.47±0.3(nmol/gw)体内肝组织中SOD相对活性 19.8±1.731.7±1.8 15.4±1.225.1±2.2体内脑组织SOD相对活性 5.35±0.711.46±1.1 4.19±0.7 7.23±0.6骨髓嗜多染红细胞微核数(1000个细胞) 4.21.69.5 3.5Ames回变 TA98 22 17 数目太多无法计数 14菌落数 TA100 90 64 数目太多无法计数 64人外周血淋巴细胞组妹染色 4.96±2.175.12±1.76 16.44±5.26 9.28±6.26单体交换(SCE)频率1)香烟凝集物(烟毒)中的自由基等有害成份，能使小鼠体外和体内肝，脑组织中脂质过氧化物(LPO)的代谢产物丙二醛(MDA)含量显著增加。加入一定剂量的JYD后，相对阴性对照组来说，除能全部清除烟毒产生的MDA外，尚可大幅度降低动物肝、脑组织本身的MDA含量(最大清除率为80.8％)。JYD对正常动物组织本身的MDA含量清除力也极强，最大清除力可达87.4％。
2)烟毒对超氧化物歧化酶(SOD)有明显降低作用，加入JYD后活力大幅度上升，明显高于阴性对照组，脑组织中SOD活性增强率达135.1％。上述结果提示JYD有解烟毒，增强智力和抗衰老等作用。
3)烟毒可使小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率上升，使人外周血淋巴细胞的姐妹染色单体互换(SCE)频率升高，使鼠伤寒沙门氏杆菌TA98、TA100回复突变菌落数增加，说明烟毒有明显的遗传学毒性。同时加入JYD后，上述各项指标均降至正常范围内，提示JYD有很强的抗香烟诱变作用。
3，JYD对血流动力学、血管反应性和心、肺功能的作用，由实验发现1)JYD可明显降低由吸烟和缺氧引起的肺动脉高压，持续两小时以上。吸烟引起肺动脉高压是肺心病的主要原因，此结果说明可用于肺心病的防治。
2)JYD可抑制由缺氧引起的脑血管扩张。脑血管扩张导致颅内压增高是肺性脑病的重要原因。此结果说明JYD可用于肺性脑病的防治。
3)JYD可增强心肌的收缩功能和舒张功能，可能对心脏病患者有益。
4)JYD可降低动脉血二氧化碳分压，说明有增强脑通气的作用，对治疗某些呼吸衰竭病人有利。
JYD对其他指称如肺分流量、心输出量、体动脉压、体血管阻力等无明显影响。
4，JYD对脑功能的影响，由小鼠实验发现JYD对小鼠条件反射的建立、学习能力和记忆功能无明显影响，实验发现JYD对中枢神经有抑制作用，故增加实验，研究其止惊和镇痛作用，结果发现JYD具明显抑制由士的宁引起的惊厥和由冰醋酸引起的疼痛作用。
5，JYD对缺氧耐受性的影响，由小鼠实验发现对三种类型的急性缺氧(低张性缺氧、血液性缺氧、组织性缺氧，部份明显提高机体的耐受性的作用。由于缺氧是许多疾病引起组织损伤和死亡的重要原因，故JDY增强对缺氧的耐受性的作用对许多病人有好处。
6，JYD对免疫功能的影响，实验发现
由香烟及环磷酰胺引起的四项免疫指标(NK活性、IL-2活性、Ig、TNF)下降，用JYD可使这四项指标升高，即可增强机体的免疫功能，说明JYD可能增强机体对传染病和肿瘤的抵抗力。
7，JYD对呼吸道炎症的影响，由大鼠实验发现JYD可明显减轻由吸烟引起的呼吸道损伤(纤毛紊乱和脱落)，说明JYD有防治由吸烟引起的慢性支气管炎的作用。
8，JYD对肺癌的作用，由大鼠实验发现JYD能抑制肺腺癌细胞的增殖及移植性实体瘤生长，但对肺癌生长转移无明显影响。说明JYD具有一定的抗癌作用。
以上可见JYD在不同程度上减轻吸烟对肺、心血管、免疫功能的损伤，抑制肿瘤的生长，增强对缺氧的耐受性，并有止惊和镇痛作用。实施例按下述配比称取原料①苦苣4.5千克①薏苡仁5.0千克 ①枸杞子4.2千克①山楂4.2千克①何首乌2.5千克 ①黄精2.5千克①松子0.8千克 ①白芍2.4千克①灵芝1.0千克①猪毛菜4.2千克 ①菟丝子1.5千克①老鹳草1.8千克①桔梗菜4.0千克 ①丹参4.3千克①麦冬4.0千克 ①淫羊藿4.5千克①党参4.0千克①金银花3.8千克 ①百合4.3千克 ①生姜4.0千克①瓜萎4.2千克②当归1.5千克②抱茎苦荬菜4.0千克①五味子2.5千克②陈皮4.3千克将上述各组份制成本发明保健品的生产方法是按以下生产工艺进行生产考虑到成品的口感，所以将配方中的成分分为两部份，其一部份(配方中标1，即原料1)加工成液体剂型，另一部份(配方中标2，即原料2)制成固体剂型。
1，原料1中的成分经清洗成净料，加水后100℃蒸煮两次，第一次加水10倍，第二次加水8倍，每次1.5-2小时后4层纱布过滤，两次所得滤液混合。滤液中加等量乙醇混合后静置24小时去沉淀，对上清液蒸发，回收乙醇后得到母液。滤液被浓缩至原量的1/2。按0.02％的量加入高蛋白糖后溶解后过滤而成营养液，经灌装，105℃蒸汽灭菌30分钟、冷却、清洗外瓶、凉干、贴签、包装。
2，原料2中的成分经清洗成净料，加水后100℃蒸煮两次，第一次加水10倍，第二次加水8倍，每次1.5-2小时后4层纱布过滤，两次所得滤液混合。滤液中加等量乙醇混合后静置24小时去沉淀，对上清液蒸发，回收乙醇后得到浓缩液。滤液被浓缩至原量的1/2，相对密度为1.30-1.33。加淀粉拌匀，烘干并粉碎至通过120目筛，粉料可装装胶囊或加辅料制片、压板。
3，将以上液体成品及胶囊或片剂成品装C式拖盘盒内而成本发明之产品。试验1JYD对小鼠的急性毒性试验选用健康昆明种小鼠20只，雌雄各半，进性试验。小鼠体重为18-22g克。以10g/kg体重的剂量进行灌胃，用蒸馏水稀释样品至所需浓度，小鼠灌胃量按20g体重0.4ml计算，连续观察两周，未见小鼠出现明显的中毒症状，也无死亡。该受试物对两种小鼠的急性毒性试验的LD50均大于10g/kg体重，根据急性毒性分级，JYD属于实际无毒物。试验2JYD致突变试验小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验采用间隔24小时两次经口灌胃法进性试验。用体重25-30克小白鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，雌雄各半。以40mg/kg体重剂量的环磷酰胺为阳性对照，蒸馏水为阴性对照，受试物剂量为2.5、5.0、10.0g/kg体重，用蒸馏水配至所需浓度，每天灌胃一次，连续5天，末次给受试物后6小时脱颈处死动物，取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片，经甲醇固定，Giemsa染色。在光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PRC)，微核发生率以含微核的PRC千分率计，按Poisson分布求95％可信限，最后进行u检验。
表 JYD对小鼠骨髓微核发生率的影响性别剂量(g/kg体重) 动物数 检查细胞数 微核数 微核千分率0(JYD) 55000 10 2.02.5(JYD) 55000 6 1.2雄 5.0(JYD) 55000 7 1.4
10.0(JYD) 5500071.440mg/kg体重(CP)55000 13527.0*0 (JYD) 5500071.42.5(JYD) 5500071.4雌 5.0(JYD) 5500091.810.0(JYD) 5500061.240mg/kg体重(CP) 55000119 23.8**与阴性对照组比较有显著性差异(P＜0.001)由表可见，JYD试验组与阴性对照组比较无显著性差异，而环磷酰胺为阳性对照组与阴性对照组比较有显著差异(P＜0.001)。结果表明JYD对动物骨髓细胞不产生畸变作用。
试验3小鼠精子畸变试验用体重25-30克小白鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，雌雄各半。以40mg/kg体重剂量的环磷酰胺为阳性对照，蒸馏水为阴性对照，受试物剂量为2.5、5.0、10.0g/kg体重，用蒸馏水配至所需浓度，每日灌胃一次，连续5天，末次给受试物后30天处死动物，取附睾制片，伊红染色。每只动物计数1000个结构完整的精子，计算畸变精子发生率，用Wilcoson法对试验数据进行统计处理。
表 JYD对小鼠精子畸形发生率的影响剂量(g/kg体重) 动物数 检查精子数 精子畸形数 畸变率0(JYD)5 5000 821.642.5(JYD) 5 5000 871.745.0(JYD) 5 5000 841.6810.0(JYD) 5 5000 851.7040mg/kg体重(CP) 5 5000 257 5.14**与阴性对照组比较有显著性差异(P＜0.001)结果表明，JYD对小鼠精子畸形发生率未产生明显改变，受试物各剂量组小鼠精子畸形率与阴性对照组比较无显著差异，而阳性对照组与阴性对照组比较有显著性差异(P＜0.001)。JYD对动物精子不产生畸变作用。试验4
JYD抗动物脂质过氧化作用和增强超氧化物歧化酶活性的研究1.体外实验按文献1.2的方法加以改进，取小鼠肝匀浆，测定JYD抗氧化能力及有效剂量。
2.体内实验把小鼠随机分组，每组10只，具体分组如下表1动物分组及用药剂量分组代号 药物 剂量阳性组 A烟毒 5.6ug/gw空白组 B蒸馏水 ------大剂量组 EJYD 5mg/gw大剂量治疗组 G烟毒＋JYD 5.6ug/gw＋5mg/gw阴性组 H维生素E 25ug/gw注喂药5天。gw表示每克动物体重。
动物按表1分组及剂量，每天灌胃一次，连续5天，第二批动物连续16然后处死动物，然后按句海松等人的方法测其肝，脑组织中的LPO含量(即对LPO产生的代谢产物MDA的抑制率)及按向淼鑫等人的方法检测SOD活性。
1.体外结果小鼠肝组织匀浆体外经JYD及烟毒处理后，其JYD本身的抗氧化能力及清除烟毒的能力见表2和表3。
表2JYD对小鼠体外肝组织的抗氧化作用组别剂量(ug/ml)LP0(nmol/ml)抑制率(％)对照 --- 32.8±3.2---JYD 3000 4.2±0.8**87.4±1.5JYD 1000 12.9±1.5*60.8±2.1JYD300 28.2±2.1*14.3±1.1JYD100 29.4±2.5*10.6±0.9VitE30 4.4±0.5 86.6±1.8*与对照P＜0.01**与Vite P＞0.05表3JYD对小鼠体外肝组织中烟毒引起LPO的清除作用组别 剂量(ug/ml)LPO(nmol/ml)清除率(％)烟毒组 758 55.7±3.5*---空白组 --- 32.8±3.2 ---烟毒组＋JYD758＋30006.3±1.2*100*与空白组P＜0.012.体内实验结果JYD对小鼠体内肝，脑组织中的LPO清除能力和对烟毒引起的LPO抑制效果以及对肝，脑组织中SOD活性的影响见表4-表7。
表4JYD对小鼠体内脑组织中LPO清除及解烟毒作用LPO(nmol/ml) 清除率(％) 解烟毒(％)组别Sd 16d Sd 16d Sd16dA 4.5±0.9 8.6±1.5 --- ------ ---B 2.9±0.7 4.5±1.1 --- ------ ---E 2.1±0.4 1.5±0.4 46.2±1.8 66.7±5.7 --- ---G 2.5±0.3 3.5±1.1 --- ---100** 100***与B P＜0.01；**与A P＜0.01表5JYD对小鼠体内肝组织中LPO的清除及解烟毒作用LPO(nmol/ml) 清除率(％) 解烟毒(％)组别Sd 16d Sd16d Sd 16dA 3.9±0.8 6.7±1.2 --- --- --- ---B 3.1±0.5 3.8±0.9 --- --- --- ---E 1.4±0.4 0.9±0.2 54.8±2.5 76.3±4.2--- ---G 1.7±0.4 1.8±0.9 --- --- 100**100***与B P＜0.01；**与A P＜0.01表6JYD对小鼠体内脑组织中SOD活性影响及解烟毒作用SOD相对活性 SOD活性增强率(％)解烟毒(％)组别5d 16d 5d 16d 5d 16dA 4.2±0.7 3.9±0.5 --- --- --- ---B 5.4±0.7 0.1±0.6 --- --- --- ---E 11.5±1.1 10.5±1.2 113.0±10.2* 100.9±7.2* --- ---G 7.2±0.6 8.7±0.7 --- ---100** 100***与B P＜0.01；**与A P＜0.01
表6JYD对小鼠体内肝组织中SOD活性影响及解烟毒作用SOD相对活性SOD活性增强率(％) 解烟毒(％)组别5d16d 5d 16d 5d 16dA 15.4±1.2 14.5±1.5 --- --- --- ---B 19.8±1.1 21.2±1.4 --- --- --- ---E 31.7±1.8 35.1±3.0 60.3±2.4* 65.6±3.2* --- ---G 25.1±2.2 28.2±1.6 --- --- 100**100***与B P＜0.01； **与A P＜0.01一.本实验进行体内LPO和SOD测定，结果表明JYD对小鼠肝，脑组织体外和体内LPO都有明显的清除能力(P＜0.01)，并呈剂量效应关系。体外实验有效剂量范围在100-3000ug/ml在此剂量范围内对LPO清除率达87.4％。
二.JYD对体外组织由香烟凝集物引起的LPO的增多有极为明显的清除作用。在本实验的剂量范围内除可全部清除由香烟凝集物引起的LPO含量外，还可大幅度降低组织内的LPO的浓度。
三.JYD对小鼠体内实验证明不同剂量组对其肝，脑组织中LPO都有明显的清除作用(P＜0.01)，且具量效关系。剂量越大清除率越高。实验证明，JYD有全部清除烟毒引起的LPO的含量，也可大幅度降低机体内LPO的浓度，这与体外实验结果一致。
四.实验表明，三个不同JYD含量中SOD相对活性与对照相比有明显升高(P＜0.01)，特别对脑中SOD活性升高更明显，达113.8％。而在烟毒作用后再补JYD，其SOD活性能增加到正常水平以上。说明JYD能对抗烟毒对SOD的损害和用，提示JYD有解烟毒，增强脑细胞功能以及抗衰老等功能。参考文献1，句海松等，药学学报，1989，24(11)807-812.2，向淼鑫等，中华医学检验杂志，1990，13(1)19-21.3，董伟等，生物化学与生物物理学进展，1986，635.4，谢京儿等，第二军医大学学报，1989，10(5)113-116.试验5JYD对小鼠骨髓嗜多红细胞微核的影响及降低香烟凝集物诱发微核率的研究实验动物选用健康成熟的昆明小鼠，体重18--25g，雌雄各半，由同济大学实验动物中心提供，经检疫一周后随机分为七组，每组10只(雌、雄各半)，给药设高、中、低三个剂量组分别为5mg/gw、1mg/gw、0.2mg/gw设阳性对照组剂量为5.6ug/gw(香烟凝集物)，阴性对照组(双蒸水)；另设高、低剂量组加香烟凝集物(5.6ug/gw)给药方法灌胃，各剂量组连续五天给药，24小时后取材制片然后用1ml胎牛血清冲洗骨髓至离心管内1000转/分，离心10分钟，弃上清液，取管底骨髓涂片，甲醇固定染色镜检。在骨髓涂片中，选择细胞分布良好的区域，观察和统计嗜多染红细胞中带有微核细胞的出现率称为微核率。每个小鼠各观察1000个嗜多染红细胞，结果以千分率(‰)表示。各剂量组诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率见表表1 连续5天给药小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率组剂量 动物数受检细胞数 微核 微核/细胞mg/gw 数 P值别-ug/gw (只) (个)(个) 均值 标准误JYD 5 10 10,000 161.6 0.45 ＞0.05(a)JYD 1 10 10,000 242.4 0.63 ＞0.05(a)JYD0.2 10 10,000 272.7 0.3 ＞0.05(a)阳性对照组 5.6ug/gw 10 10,000 959.5 0.68 ＜0.01(b)阴性对照组 双蒸水 10 10,000 424.2 1.06 ＞0.05(c)JYD 5 10 10,000 353.5 0.56 ＞0.05(d)阳性对照组 5.6JYD 0.2 10 10,000 444.4 0.58 ＞0.05(d)阳性对照组 5.6a JYD三个剂量组比核b阳性对照组与JYD三个剂量组比较C阴性对照组与JYD三个剂量组比较d JYD(高、低＋香烟凝集物)二个剂量组分别与阳性，阴性对照组比较。结果连续五天给药，结果(见表)表明，各剂量组5mg/gw，1mg/gw，0.2mg/gw微核率分别为1.6±0.45，2.4±0.63，2.7±0.3三者相互比较无显著差异(P＞0.05)未发现JYD随着剂量增高或给药次数增加，微核率有随之增高趋势，且各实验组分别与阳性对照组9.5±0.68之间比较有显著差异(P＜0.01)且各实验组分别与阴性对照组4.2±1.06之同无显著差异(P＞0.05)，提示，JYD高氏添加剂无明显诱变作用，为阴性结果；高低剂量组(分别加香烟凝集物)与阳性对照组有显著差异(P＜0.01)，与阴性对照组比较无显著差异(P＞0.05)。提示JYD既无明显诱变作用，又有降低香烟凝集物诱发微核率的作用。试验6JYD滤液对人体外周血淋巴细胞姐妹染色单体交换(SCE)频率的形响，以及降低香烟凝聚物(CSC)诱发的SCE频率的研究取IN NaOH加入JYD溶液中，调节其PH值至7.0，置于离心管中，3000转/分离心30分钟。取上清液经0.22in微孔滤膜慢正压过滤，所得滤液即为待测物。
香烟凝聚物(CSC)购自武汉卷烟厂，每件玻璃纤维滤膜上吸附有5支《红双喜》牌香烟的凝聚物。重113.75mg。加二甲基亚砜10ml溶解二小时，取部分浸出液作阳性对照物。
淋巴细胞培养与色体制备每毫升培养物含RMP 1640培养基0.9ml(小牛血清占20％，青霉素100单位，链霉素100ug)健康献血员外周静脉血(肝素抗凝)0.1ml，植物凝素(PHA)，37℃恒温培养24小时后加入BrdV 10ug，再分别按表1、表2中剂量加入各种药物，每培养瓶中培养物的部体积为4ml，继续培养44小时，加秋水仙素，4小时后终止培养。离心后去上清液，加0.07MKc17ml低掺15分钟，加1ml固定液(甲醇∶冰醋酸＝3∶1)预固定，离心后上清液，再用固定液固定两次，将细胞悬液滴在洁净的冰湿载片上，经火焰烘干制成染色体标本。将标本于37℃放置24小时，用紫外线加Giemse染色(UPG法)。每份标本观察25个分散适中，色差分明的第二周期中期分裂相，计数SCE频率，在末端和着丝点交换计数一次。中间交换者计数二次，经统计处理得出实验结果。
表1 JYDL对SCE频率的影响组别JYDL终浓度SCE/细胞P值ul/ml阴性对照(生理盐水10ul)0 4.92±2.27
试验7JYD)Ames试验及对抗香烟凝集物和苯并[α]芘致突变性的研究短期生物学致突变试验一沙门氏菌/微粒体法(简称Ames试验)，系由美国加利福尼亚大学的Ames教授所创建。我们利用AⅢes试验．对高佛存的JYD进行了遗传学毒理及对抗香烟凝集物和苯并[α]芘突变性的研究．一、实验菌株采用鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺型突变菌株即TA98和TAl00标准菌株,经鉴定符合其生理性状。
二、样品
1.JYD5ul＋苯并[α]ul 10ml/皿2.JYD原液(lg/ml) 0.1ml/皿3.稀释1倍JYD 0.1ml/皿4.稀释5倍JYD 0.1ml/皿5.JYD原液＋香烟凝集物(4∶1) 0.1ml/皿6.稀释1倍JYD＋香烟凝集物(4∶1) 0.1ml/皿7.稀释5倍JYD＋香烟凝集物(4∶1) 0.1ml/皿8.苯并[α]芘(1mg/ml) 10ul/皿9.香烟凝集物(武汉卷烟厂提供22.75mg/ml) 0.1ml/皿10.二甲亚砜阴性对照(原液)0.1ml/皿11.正常菌落数对照(菌液) 0.1ml/皿(以上样品除JYD及其稀释液溶剂为水外，香烟凝集物和苯并[α]芘溶剂为二甲亚砜。三、主要试剂还原型辅酶II(NADP)，6-磷酸葡萄糖，D-生物素等(由美国Sig公司生产)四、标准平皿掺入法样品每个深度同时设三个平行皿，用加与不加S9活化系统检验得复试验两次，实验结果见表。
TA98 TA100试验菌株+S9菌落数 MR -S9菌落数 MR +S9菌落数 MR -S9菌落数 MR正常回变数52 22 90 87样品 1 77 1.48 180.82 76 0.84 86 0.992 64 1.23 170.77 84 0.93 64 0.743 47 0.90 210.95 74 0.82 85 0.984 70 1.35 160.73 55 0.61 74 0.685 59 1.13 140.64 40 0.44 64 0.746 68 1.30 190.86 125 1.39 69 0.797 26 0.50 261.18 110 1.22 71 0.828 158 3.04 160.72 376 4.18 82 0.949 79 1.52 150.68 184 2.04 177 2.0310 -- -- -- -- MR＞2为Ames试验阳性五、结果分析
1.JYD样品各浓度组加与不加S9活化系统其平皿内加变菌落数均在正常范围，MR值＜2说明JYD样品Ames试验为阴性，无致突变性。
2.JY)样品和各浓度组加入香烟凝集物，用Ames试验标准掺入法，加与不加S9活化系统，各浓度平皿内回变菌落数均在正常回变菌落数范围说明JYD样品加入香烟凝集物后，Ames试验结果为阴性。而香烟凝集物阳性组对TA100有致突变作用，MR＞2，说明JYD有抑制香烟凝集物致突变的显著作用。
3.JYD样品加苯并[α]芘阳性物后，加与不加S9活化系统，其平皿内回变菌落数均在正常范围，而阳性对照组苯并[α]芘加S9活化系统后，平皿内回变菌落数大于正常回变菌落数两倍以上，MR值＞2，说明JYD对苯并[α]芘有相当强的抑制作用(TA100＋S9＝95.0％)。试验8JYD对吸烟及缺氧所致狗心、脑、肺循环血液动力学改变作用的研究1.狗急性实验模型制备杂种狗21只，♀♂不拘，3％戊巴比妥静脉麻醉(30mg/kg)后固定于手术台上，经口腔插入胃管用于JYD灌胃，四肢安置电极监测心率(BR)。行气管插管术，任动物自主呼吸，分离右侧股动脉，插入导管至胸主动脉上段测平均动脉压(Psa)，并将导管联接心输量仪，以热稀释法测心输出量(CO)。
分离右侧股静脉插管入上腔静脉近右心房处，用于注入生理盐水。分离右侧颈静脉插入二根导管，一根的尖端置右心室测右心室压(RVP)及±dp/dtmax，另一导管尖端置肺动脉测平均肺动脉压(Ppa)。分离右侧颈总动脉并套入开环式血流传感器测一侧颈总动脉血流量(CBG)。经计算得出肺循环阻力(PVR)、体循环阻力(SVR)、一侧脑循环阻力(CVR)及阻力变化率(ΔPVR％、ΔSVR％、ΔCVR％)，如PVR(kPa.S.L-)＝Ppa(kPa)×60s.min-/CO(L，min-)ΔPVR＝吸烟或缺氧时PVR-吸烟前或缺氧前PVRΔPVR％＝ΔPVR×100％/吸烟前或缺氧前PVRΔSVR、ΔSVR％、ΔCVR、ΔCVR％或ΔCO、ΔCO％、ΔHR、ΔHR％计算方法类似。
2.动物吸烟及缺氧方法
吸烟气管插管外口联接具控制气流方向活瓣的Y型管。利用蠕动泵的抽吸作用吸烟，并将烟雾经硅胶管导入Y型气管插管的进气口，随动物的自主呼吸将烟雾吸入肺内。调节蠕动泵流率(约320～350ml/min)使动物在10分钟内吸市售红双喜牌香烟2支。每支香烟尼古丁含量约1.00mg，焦油27.5mg。
缺氧配制含10％氧-90％氮气体于多氏气袋。缺氧时将气袋外口联接Y型管进气口，动物自主呼吸吸入低氧气体10分钟。
3.实验程序实验制备完成后动物静息1h，待各血流动力学指标稳定。然后间隔30分钟吸入低氧气体3次，待缺氧反应恒定后开始正式实验。程序如下测定正常时各血流动力学指标→缺氧10分钟，并于5分钟、10分钟时测定指标→动物休息30分钟→吸烟2支，测定指标，休息3分钟→吸烟后缺氧、于缺氧5、10分钟的测定指标→神通JYD灌胃(0.7ml/kg，内含2％添加剂)，并于灌胃后60分钟、150分钟、240分钟重复上述实验步骤。
4.血气及肺分流(Qs/Qt)测定在缺氧前、后，吸烟前、后抽取动、静脉血测定血pll、血氧分压(PO2)、血二氧化碳分压(PCO2)。肺分流测定的方法为在吸入纯氧后20分钟抽取动、静脉血测血气，并根据下列公式计算肺内分流肺分流＝(PAO2－PaO2)×0.0031/(PAO2－PaO2)×0.0031＋(CaO2－CvO2)式中 PAO2为肺泡氧分压＝大气压－47－PaCO2；CaO2为动脉血氧含量； CvO2为静脉血氧含量。
5.统计方法采用自身对照t检验及两组均数t检验，显著性界线为P＜0.05。
结果一、肺循环(表1)缺氧使Ppa、PVR较基础值升高，吸烟虽使Ppa、PVR分别降低9.95±2.16％及8.33±2.67％，却显著增强肺血管缺氧性收缩，使缺氧时Ppa、PVR分别升高64.18±5.53％及60.71±4.97％，较吸烟前缺氧效应有极显著差异(P＜0.01)。
用JYD后1h，Ppa、PVR较基础值有轻度升高，其后各指标恢复至对照水平。肺血管的缺氧性收缩及吸烟后肺血管收缩反应的增强在用JYD后均被抑制吸烟所致肺循环阻力的降低在用药后无明显变化。吸烟可加强缺氧性血管收缩(HPV)。JYD能显著地抑制缺氧性肺血管收缩，并能有效地缓接由吸烟所引起的HPV的增强。
二.体循环(表1)吸烟后缺氧时为出现单纯缺氧所引起的Psa、SVR上升。用JYD150分钟内体循环压力、阻力与对照无差异，240分钟后SVR下降约8％，2只狗胃灌生理盐水时在相应时间SVR也有相应幅度下降，可能与实验时程过长(约12h)有关。用JYD后60分钟，150分钟缺氧仍出现Psa的轻度升高(6.48％及3.10％，P＜0.01)。
三、脑循环(表1)1.吸烟对急性缺氧反应的影响缺氧使CBF增加10.65±1.68％，CVR下降4.85±0.94％(均P＜0.05)。
2.JYD对缺氧及吸烟的影响用药后各时程基础CBF无显著变化，CVR较用药前稍下降(约5％)，其中60分钟时有统计学差异。用药后60分钟时，缺氧、吸烟及吸烟后缺氧所致CVR、CBF的变化仍相似于用药前。但吸烟后缺氧所致CBF增多的幅度小于用药前(P＜0.05)。150、240分钟时，缺氧所致CVR、CBF的变化仍相似于用药前，但吸烟后缺氧未引起CBF的增加，即JYD抑制了吸烟后缺氧所致脑血管的扩张。
四.心功能(表1)±dp/dtmax 单纯缺氧使±dp/dt max分别增加23.86±4.36％及22.40±4.71％；吸烟时±dp/dt max了也增加9.32±5.73％。吸烟后缺氧时±dp/dt max也增加，增强与吸烟前缺氧相近。用药后基础值±dp/dt max在不同时间内均有所增加，其中60分钟、150分钟时与对照值比较有差异，但吸烟未引起±dp/dt max的进一步增加。用药后单纯缺氧及吸烟后仍引起±dp/dt max的增加，除240分钟时吸烟后缺氧的增幅与用药前比较稍下降外，余与用药前增幅相当。
五、肺分流(表2)如表2所示，吸烟不对肺分流量产生影响，用JYD后肺分流稍有增加，但无统计学意义。用药后吸烟肺分流稍有减少，也无统计学差异。结果表明吸烟与用JYD均对肺分流量无明显影响。
六、血气变化(表3)
缺氧使PaO2由对照的94.34±10.74％降至44.80±7.26％，PaCO2由38.26±7.80％降至30.09±6.8％(均P＜0.01)。吸烟使PaO2稍有上升，但无统计学差异，但显著降低了PaCO2，表明吸烟时肺通气量增加。用JYD后，除缺氧时PaCO2明显低于用药前水平外，余效值与用药前无异。表明在用JYD后可使缺氧时肺通气量进一步增加。
根据本实验模型的结果，JYD在有效地抑制缺氧性肺血管收缩及由吸烟引起的肺血管收缩反应增强的同时，具轻度抑制吸烟后缺氧时脑血流量的增加、增强心肌舒缩功能的作用；但未明显影响缺氧及吸烟引起的体循环变化。实验结果提示JYD可望作为效果良好的保健饮品用于缓解及预防缺氧及吸烟引起的肺、脑循环的病理改变。表1.急性缺氧和吸烟对狗脑、肺、体循环及心功能的影响及JYD的作用。(n-21，X±SE)PpaPVr Psa SVR CBF CVR CO HR+dp/dt Max -dp/dt Max(kPa) (kPa.s/L) (Kpa)(kPa.s/L) (ml/min) (kPa.s/L) (L/min) (Bs/min) (kPa/s) (kPa/s)对照2.46 71.79 15.85 471.24 148.74 7445.52.15 192.33 1570.53 1343.50用±0.17 ±5.80±0.37±26.59±14.89±158.5 ±0.12 ±7.54 ±103.22 ±98.41缺氧3.40** 96.88*16.78*497.27*161.62*7152.5** 2.19 191.15 1891.50**1551.50**药±0.19 ±7.32±0.40±30.28±15.96±140.1 ±0.12 ±7.68 ±123.73 ±123.94吸烟2.22** 65.69** 15.82 475.88 146.47 7696.32.15 193.55 1701.20* 1477.90前±0.14 ±4.80±0.39±28.20±13.39±205.1 ±0.12 ±7.39 ±115.43 ±128.85吸烟后 3.60**# 102.70**# 16.17 474.82 160.44** 7483.5# 2.16 198.95 2083.95**1834.50**缺氧 ±0.21&& ±6.01&& ±0.43±27.60±14.5&& ±170.7&& ±0.12 ±8.07 ±171.08#& ±215.80#&
对照2.7++86.24++ 15.53 457.50 146.50 7193.2& 2.02*199.00 1799.00+ 1569.5++用±0.13 ±5.53±0.33±31.67±14.87±129.5 ±0.10 ±6.32 ±132.24 ±120.67药 缺氧3.53** 102.88** 16.14* 463.00162.40** 6824.2* 2.16** 203.00 2222.00**1887.00**±0.17+±6.48±0.48±31.09±14.08±143.2 ±0.11 ±6.43 ±203.16++ ±189.41+后吸烟 2.47** 76.50** 15.00 442.25 142.56 7284.62.00 200.05 1755.30 1457.6060±0.12 ±3.72±0.39±26.63±13.15±120.5 ±0.09 ±6.78 ±108.25 ±95.79分 吸烟后 3.28**#93.56**# 15.30 433.57 151.50** 6667.5** 2.17** 201.50 2100.50**1815.0**缺氧 ±0.16&&+ ±5.48&& ±0.42±22.13±12.49# ±120.0& ±0.11& ±6.36 ±160.17&±159.29&
对照 2.55 80.00 15.20 469.28 143.50 6983.51.98 198.50 1646.00++1466.30+用 ±0.11 ±4.58±0.20±19.53±16.69±210.14 ±0.09 ±7.96 ±122.20 ±98.63药 缺氧 3.27** 98.57** 15.87*452.86*155.00** 6643.3* 2.06 197.00 1943.00* 1625.004±0.14 ±6.43±0.39±20.40±17.02±185.1 ±0.10 ±6.43 ±162.35 ±142.49+后吸烟 2.42** 71.47** 15.10 453.60 141.93 7106.42.00 198.62 1661.60* 1344.0050 ±0.10 ±3.72±0.40±17.35±16.28±216.5 ±0.07 ±8.08 ±115.75 ±85.97分 吸烟后 3.07**&& 92.10** 15.31 450.24 148.00+ 6641.3*2.03199.801956.50*1648.50*缺氧 ±0.13++ ±4.80&& ±0.49±19.71±15.71 ±198.5& ±0.09 ±7.11±204.90& ±183.95&对照 2.63 74.3615.10 433.50 152.007088.92.15 195.501688.50 1508.00用 ±0.08±2.45 ±0.28±17.34±15.70 ±144.4 ±0.08 ±6.24±154.49±127.87药 缺氧 3.44**97.86** 15.22 438.50+164.50** 6452.52.17 194.502023.00** 1789.50*±0.14±3.75 ±0.17±20.51±15.72 ±141.2 ±0.09 ±6.33±200.10±184.39后吸烟2.47* 72.1315.17 441.78 152.897127.62.11 198.731701.80 1436.8040 ±0.08±3.02 ±0.40±26.18±15.21 ±152.1 ±0.10 ±5.73±124.60±94.92分 吸烟后 3.38**&& 95.30** 15.33 435.50+158.506706.7& 2.16 195.001915.50*1734.50*缺氧 ±0.16++ ±3.49&& ±0.33±23.35±16.21 ±136.2 ±0.08 ±6.10±159.51& ±154.93&*或**与对照值比较 P＜0.05或P＜0.01#或##与单独缺氧比较 P＜0.05或P＜0.01+或++与用药前比较 P＜0.05或P＜0.01&或&&与吸烟值比较 P＜0.05或P＜0.01表2JYD对吸烟前、后肺分流量(％)的影响(n＝15，x±SD)用药前 用药后对照吸烟对照 吸烟6.556.507.54 7.11±2.42 ±2.03 ±2.54±2.14表3用JYD前、后的血气变化(n＝15，x±SD)用药前 用药后PH PCO2 PO2PH PCO2 PO2对照 7.34638.26 94.347.36036.25 93.63±0.080±7.80±10.74 ±0.080 ±8.06±11.08缺氧 7.39930.09** 44.80** 7.45019.53**# 40.10**±0.101±6.89±7.26 ±0.110 ±9.10 ±3.53吸烟 7.37430.80** 97.707.366 29.35* 94.63±0.060±6.12±13.06 ±0.060 ±3.52±10.26*或**与对照值比较 P＜0.05或P＜0.01#或##与用药前比较 P＜0.05试验9JYD对缺氧耐受性及神经中枢作用研究一、对小鼠低张性缺氧的影响给小鼠分别灌胃(ig)、腹腔注射(ip)JYD原液、腹腔注射3倍、6倍稀释的JYD或等容积生理盐水(0.1ml/10g)ip给药15分钟、ig给药1小时后，将四只小鼠放入装有钠石灰的500ml容积的磨口玻璃瓶内加盖密闭，记录小鼠团瓶后至最后一次呼吸时间(即生存时间)，以此衡量小鼠缺氧耐力的大小。各组小鼠存活时间进行t值检验，结果见表1。表1 JYD对小鼠缺氧耐力的影响给药 存活时间组别n体重(g) 方式 x±SD(min) P1P2生理盐水组 12 18.0±1.3 ip 13.78±0.81JYD原液组 12 17.4±1.7 ip 29.46±4.32 ＜0.001JYD原液组 12 18.2±2.3 ig 29.66±5.21 ＜0.001＞0.051/3 JYD组 12 18.1±1.9 ip 31.79±3.70 ＜0.001＞0.051/6 JYD组 12 17.8±1.5 ip 29.96±4.28 ＜0.001＞0.05P1与对照组小鼠成活时间比较，P2与JYD原液ig组小鼠成活时间比较。
表中可以看出，JYD无论ig组或ip组钧能延长急性缺氧环境下小鼠的存活时间(P＜0.001)，且腹腔注射三种不同剂量JYD组之间无明显差异(P＞0.05)。二、JYD对异丙基腺上素负荷小鼠对低张性缺氧耐受性的影响小鼠分三组，第一组注射生理盐水后15分钟再次注射生理盐水后再注Iso，第三组注JYD，15分钟后再注Iso。然后按上述方法缺氧测定各组对低张性缺氧的耐受性，结果见下表2。与生理盐水组相比Iso可明显降低小鼠耐缺氧能力(P＜0.01)，而JYD对Iso负荷小鼠的缺氧的耐受性有明显提高作用(P＜0.001)。表2对负荷小鼠在常压缺氧下存活时间的影响存活时间组别 n x±SD(min)P1 P2NS+NS组 1213.92±0.91NS+Iso组 1211.43±0.52 ＜0.001JYD+Iso组 1216.84±1.26 ＜0.001＞0.001P1与NS＋NS组比较，P2与NS＋Iso组比较。三、JYD对血液性缺氧耐受性的影响小鼠两组(n＝12)分别ip JYD和等容积生理盐水(0.01ml/10g)，15分钟后，均ip5％NaNO2(0.1ml/10g)。记录小鼠死亡时间，JYD组死亡时间为12.52±2.25min，生理盐水组为8.16±0.49min，结果表明JYD能明显提高NaNO2所致血液性缺氧小鼠存活时间(P＜0.01)。四、对士的宁致惊作用的影响小鼠两组(η＝12)分别ip JYD和等容积生理盐水(0.01ml/10g)，15分钟后，均腹腔注射士的宁1.5mg/kg，观察给药小鼠出现惊厥程度及死亡率。结果30分钟内两组均百分之百出现惊厥，但与对照组比较JYD组小鼠惊厥明显延缓，惊厥程度轻，且JYD组小鼠无一只死亡，对照组死亡率为80％。结果表明JYD能显著减轻士的宁引起的小鼠惊厥的程度和降低死亡率(P＜0.001)。五、JYD的镇痛作用小鼠两组(n＝12)，ipJYD或生理盐水，15分钟后，ip1％的冰醋酸，立即观察15分钟内出现的扭体反应次数和出现扭体反应小鼠的百分率。结果对照组小鼠扭体次数为182次，67.5％的小鼠发生扭体反应而JYD组小鼠未出现扭体反应。表明JYD对冰醋酸所致疼痛导致小鼠扭体反应有明显抑制作用(P＜0.01)。
以上小鼠(昆明种，雌雄各半，18-22g)实验结果表明JYD能明显增强小鼠对低张性缺氧或给予异丙基肾上腺素增加心肌耗氧负荷情况下低张性缺氧的耐受性，也能增强对血液性缺氧的耐受性。JYD并具有镇痛和抗惊厥作用。JYD提高对缺氧耐受性的作用可能与其对中枢神经系统的抑制作用有关。试验10JYD对免疫功能的影响NIH小鼠，雄性，体重202g，随机分成A，B，C，D，E，F，G，H，I九组，每组12只，按各组分别饮用自来水(A，F组)，JYD(B，C，D，E，H，I)，连续30天，并同时腹腔注射环磷酰胺(C，E，F组)剂量25mg/鼠，每隔一天一次，共三次；或吸烟(G，H，I)，每天两次，每次1小时，于第30天眼球取血分离血清，并无菌取小鼠脾脏，分离单个核细胞，采用乳酸脱氢酶试验，MTT比色法，双抗体夹心法和琼脂扩散试验分别测定小鼠脾细胞自然杀伤(NK)细胞活性、白细胞介素2(IL-2)的诱生能力和血清免疫球蛋白及肿瘤坏死因子(TNF)水平。
1，JYD对小鼠脾脏单个核细胞NK活性的影响由表1可见，环磷酰胺对小鼠NK活性有明显的抑制作用(F组)，吸烟对小鼠NK活性有轻度抑制作用(G组)，E组NK活性高于F组，I组NK活性显著高于G组(P＜0.001)，与对照(A组)无差异(P＞0.05)，由此表明JYD能明显促进机体NK活性。
表1.JYD对小鼠脾脏单个核细胞NK活性的影响组别NK活性(％)A.饮自来水 0.12ml/天/鼠40.59±8.94B.饮JYD0.12ml/天/鼠43.24±11.00C.饮JYD0.12ml/天/鼠27.52±6.74注射环磷酰胺D. 饮JYD0.24ml/天/鼠51.35±5.68E.饮JYD0.24ml/天/鼠36.51±7.41注射环磷酰胺F.饮自来水 注射环磷酰胺26.29±7.75G吸烟(红双喜)1hx2/天 31.64±3.70H.饮JYD 0.12ml/天/鼠 吸烟 37.68±4.56I.饮JYD 0.24ml/天/鼠 吸烟 41.67±12.282、JYD对小鼠脾脏单个核细胞IL-2诱生能力的影响表2结果可见，环磷酰胺对小鼠脾脏单个核细胞诱生IL-2的能力有明显的抑制作用(F组)，吸烟对小鼠脾脏单个核细胞诱生IL-2的能力有轻度抑制作用(H组)，E组IL-2诱生水平高于F组，I组IL-2诱生水平高于G组(P＜0.01)，接近对照(A组)水平；由此表明 JYD能明显促进机体IL-2的诱生能力。
表2.JYD对小鼠脾脏单个核细胞IL-2诱生能力的影响组别 IL-2活性(u/ml)A.饮自来水0.12ml/天/鼠82.50±3.49B.饮JYD 0.12ml/天/鼠84.09±4.91C.饮JYD 0.12ml/天/鼠70.10±4.92注射环磷酰胺D.饮JYD 0.24ml/天/鼠85.20±3.49E. 饮JYD 0.24ml/天/鼠74.60±3.68注射环磷酰胺F. 饮自来水注射环磷酰胺67.00±4.93G吸烟(红双喜)1hx2/天 67.60±5.06H. 饮JYD 0.12ml/天/鼠吸烟 72.00±5.41I. 饮JYD 0.24ml/天/鼠吸烟 82.40±6.583、JYD对小鼠血清免疫球蛋白水平(Ig)的影响表3结果可见，环磷酰胺对小鼠血清免疫球蛋白水平有明显的抑制作用(F组)，E组血清免疫球蛋白水平高于F组(P＜0.01)，由此表明，JYD可提高血清免疫球蛋白水平。吸烟组血清蛋白水平略低于对照组(A组)，但经统计学处理无显著性差异(P＜0.05)。
表3.JYD对小鼠血清免疫球蛋白水平(Ig)的影响组别 血清Ig水平(mg/ml)A.饮自来水 0.12ml/天/鼠6.08±2.58B.饮JYD 0.12ml/天/鼠6.83±2.50C.饮JYD 0.12ml/天/鼠3.84±0.91注射环磷酰胺D.饮JYD 0.24ml/天/鼠9.18±2.70E.饮JYD 0.24ml/天/鼠5.17±1.50注射环磷酰胺F.饮自来水 注射环磷酰胺3.45±1.60G吸烟(红双喜) 1hx2/天 5.85±1.39H.饮JYD 0.12ml/天/鼠吸烟 5.92±0.99I.饮JYD 0.24ml/天/鼠吸烟 6.67±2.284、JYD对小鼠血清TNF水平的影响表4结果可见，环磷酰胺对小鼠血清TNF水平有明显的抑制作用(F组)，E组血清TNF水平略高于F组(P＜0.05)，但仍低于对照组(A组)，吸烟组血清TNF水平略低于对照组(A组)，JYD＋吸烟(I组)血清TNF水平与正常组比较，无显著性差异(P＞0.05)，实验结果表明JYD可提高血清TNF水平。表4.JYD对小鼠血清TNF水平的影响组别 血清Ig水平(mg/ml)A.饮自来水0.12ml/天/鼠0.360±0.028B.饮JYD 0.12ml/天/鼠0.362±0.033C.饮JYD 0.12ml/天/鼠0.063±0.030注射环磷酰胺D.饮JYD 0.24ml/天/鼠0.386±0.001E.饮JYD 0.24ml/天/鼠0.105±0.045注射环磷酰胺F.饮自来水 注射环磷酰胺0.062±0.050G吸烟(红双喜) 1hx2/天 0.337±0.107H.饮JYD 0.12ml/天/鼠吸烟 0.349±0.084I.饮JYD 0.24ml/天/鼠吸烟 0.363±0.097试验11JYD对心脑肺免疫功能的影响及对肺癌的预防逆转作用的研究1、JYD对吸烟小鼠呼吸道粘膜的保护作用采用主动和被动吸烟方法，将小鼠分为吸烟组，吸烟＋JYD组，并以未吸烟的小鼠作为对照组。吸烟组将小鼠放入烟雾吸入实验箱内，每次燃烧4支红双喜牌过滤嘴香烟，每天1次，吸烟雾60分钟，每支香烟燃烧10分钟后，休息5分钟，每周6次，连续4周；吸烟＋JYD组每只小鼠在吸烟后30分钟经口食管灌入JYD 0.2ml(1g/ml)；对照组小鼠不吸烟雾，每只动物灌入等容量生理盐水。4周后对其呼吸道的组织进行光镜、扫描电镜观察，镜下见吸烟气管内损害的柱状纤毛上皮细胞纤毛倒伏、零乱、脱落，支气管内一些柱状纤毛上皮消失，细胞表面有较多的脱屑；而吸烟＋JYD组气管支气管损害明显减轻，纤毛柱状上皮完整，纤毛排列大多整齐，杯状细胞饱满，表面微绒毛存在，纤毛未见脱落减少，仅见少许纤毛倒伏零乱。实验结果表明吸烟小鼠呼吸道粘膜损害明显，而吸烟小鼠用JYD后呼吸道粘膜未见明显病变，证实JYD对呼吸道粘膜有明显保护作用。
呼吸道粘膜柱状纤毛上皮细胞的纤毛对烟雾很敏感，烟雾中一些有害物质如丙烯醛、氰氢酸、甲醛等纤毛毒性物质能够抑制呼吸道上皮细胞纤毛的运动，破坏上皮细胞，使纤毛脱落，细胞坏死，造成吸烟者对呼吸道传染性疾病易感性增高，并有利于致癌物质在呼吸道滞留，促进癌肿的发生及发展。JYD可能对烟雾中有害物质有明显拮抗，抑制作用，并能通过增强粘液-纤毛屏障的清除功能，而对预防感染和癌肿的发生起到良好的效果。2、JYD对正常小鼠T细胞激活作用的影响采用昆明种小鼠，MTT法测小鼠脾脏T细胞增殖反应，经统计学配对试验检验进行差异比较，结果表明JYD能促进T细胞对增殖反应(P＜0.05或P＜0.01)，作用强弱与JYD含量存在依赖关系，随着浓度的增加对T细胞激活的促进作用越强。结果见表表对正常小鼠细胞激活作用的影响JYD稀释倍数ODX±SD200 0.460±0.017*100 0.515±0.047**75 0.562±0.032**50 0.593±0.037**对照 0. ±0.059均与对照组比较*P＞0.05 **P＜0.013、JYD对人肺腺癌GLC直接杀伤作用JYD对人肺腺癌GLC细胞体外进行实验研究，结果表明，JYD对人肺腺癌细胞50％杀抑率、稀释倍数为1∶80和1∶100，其24h持续至48h时杀抑效果为佳，而JYD为澄清可溶性部分，经JYD作用后人肺细胞(GLC)增殖受到明显抑制，结果见表表.JYD对人肺腺癌细胞GLC直接杀/抑作用JYD作用时间JYD稀释倍数 20h 24h 48hOD值 杀抑率OD值 杀抑率OD值 杀抑率1∶80 0.220±0.004 46.99 0.165±0.018 60.24 0.129±0.004 51.141∶100 0.222±0.018 46.51 0.183±0.005 55.90 0.117±0.003 55.681∶200 0.377±0.007 9.16 0.225±0.030 45.73 0.145±0.007 45.081∶400 0.400±0.011 3.61 0.287±0.009 30.84 0.167±0.030 36.341∶800 0.401±0.014 3.37 0.335±0.016 19.27 0.218±0.007 17.421∶1000 0.404±0.016 2.45 0.356±0.015 14.22 0.228±0.027 13.64对照0.415±0.013 00.415±0.012 0 0.264±0.032 04、JYD对小鼠Lewis肺癌生长转移的影响以C57BL/6肺癌移植瘸为模型，进行JYD预防给药和治疗性给药，观察对小鼠实体瘤及肺转移的影响，结果表明JYD有效预防性给药对肿瘤的抑制率＞30％(31.85％，P＜0.01)，说明JYD有预防移植性肺癌发生和抑制其生长作用。JYD治疗性给药对肿瘤的抑制率＜30％(15.47％P＞0.05)说明JYD治疗性给药对小鼠实体瘤无明显抑制作用，对其肺癌肺转移灶也无明显抑制作用(P＞0.05)，结果见以下各表。
国内规定抗肿瘤药物，肿留抑制率≥30％且P＜0.05重复三次才有效，本实验在作了预实验以后再选择纯系小鼠作正式实验，故结果有一定的可靠性。有人证实肺部癌灶(即转移灶)与皮下原位移植瘤对药物的敏感性并不完全相同，虽然本实验JYD对转移灶无明显抑制作用，但预防性给药对其皮下实体瘤有明显抑制作用。说明本实验JYD有一定抗肿瘤作用。表1预防性给药对实体瘤生长的影响组别动物数平均体重(g) 肿瘤重量抑制率(％)开始 结束 M±S对照组847.7 22.84 8.125±.294预防组8.5 20.82 5.537±.312 .85与对照组相比较P＜0.0表2 治疗性给药对小鼠实体瘤的影响组别动物数 平均体重(g) 肿瘤重量抑制率(％)开始 结束M±S对照组10 21.0 23.2 6.27±1.30预防组10 20.5 21.0 5.3 ±0.8315.47与对照组相比较P＞0.05表3 JYD对小鼠皮下移植的Lewis肺癌转移的抑制作用组别动物数肺表面转移数目M±S对照组10 20.7±15.319治疗组10 18.6±13.517与对照组相比较P＞0.05综合上述一系列实验研究，证实JYD对烟草烟雾中有害物质有明显拮抗抑制作用。并能通过增强粘液-纤毛屏障的清除功能，提高机体免疫功能，在预防感染和肿瘸的发生、发展等方面可起到一定的良好效果。图片说明
图1.正常气管内柱状纤毛上皮纤毛排列整齐，杯状细胞饱满，表面有微绒毛。
×2,000图2.吸烟组气管柱状纤毛上皮纤毛脱落、消失，表面可见红细胞附着。×2,000图3.吸烟组气管柱状纤毛上皮、纤毛大多数脱落。
×2,000图4.5.吸烟组气管柱状纤毛上皮，纤毛脱落的细胞表面扁平，残留有纤毛脱落的痕迹，受损害的细胞，形成一片如“水田状”的上皮表面结构。图6.7.吸烟＋JYD组气管柱状纤毛上皮细胞，纤毛排列绝大多数整齐，杯状细胞饱满；表面有微绒毛，仅有少数纤毛零乱。×2,000图8.吸烟＋JYD组，气管柱状纤毛零乱。
×2,000图9.10.正常支气管柱状纤毛上皮排列整齐，杯状细胞饱满。×2,000图11.正常支气管柱状纤毛上皮、纤毛排列整齐，杯状细胞饱满，表面有密集的微绒毛。×2,000图12.13.吸烟组对支气管柱状纤毛上皮纤毛减少、消失，细胞表面有较多的脱屑。× 2,000图14.吸烟组对支气管柱状纤毛上皮部分纤毛零乱、倒伏。×2,000图15.16。吸烟＋JYD组对支气管柱状纤毛排列整齐，大多数杯状数细胞饱满，表面有多量微绒毛。×2,000
权利要求
1，一种解香烟毒的全天然保健品，其特征在于它是由下述重量配比的原料制成的保健品制剂①苦苣8-25份①薏苡仁10-30份 ①枸杞子10-25份 ①山楂13-26份①何首乌5-18份 ①黄精4.5-15份①松子2-8份 ①白芍5-13份①灵芝2-6份 ①猪毛菜6-25份①菟丝子3-10份 ①老鹳草4-8份①桔梗菜10-25份 ①丹参8-24份 ①麦冬7-24份②淫羊藿8-24份①党参7-21份①金银花10-25份 ①百合8-28份①生姜10-20份①瓜蒌8-26份②当归3-10份 ②抱茎苦荬菜8-28份 ②五味子5-16份②陈皮8-26份
2，根据权利要求1所述解除香烟毒的全天然的保健品，其中各原料的重量配比是①苦苣12.5-18份 ①薏苡仁13-20份 ①枸杞子10-18份 ①山楂8-21份①何首乌8-12份 ①黄精7.5-11份①松子2.5-3.5份 ①白芍7.5-10份①灵芝3-4份 ①猪毛菜10-20份 ①菟丝子4-8份 ①老鹳草5-7.5份①桔梗菜13-19份 ①丹参10-20份 ①麦冬12-17份 ②淫羊藿12-18份①党参12.5-18份 ①金银花12.5-20份 ①百合10-20份 ①生姜10-20份①瓜蒌12-20份②当归5-8份 ②抱茎苦荬菜12-18份 ②五味子8-11份②陈皮12-18份
3，根据权利要求1所述的解除香烟毒的全天然保健品，其中各原料的重量配比是①苦苣5份 ①薏苡仁5份①枸杞子5份 ①山楂5份①何首乌3份①黄精3份 ①松子1份 ①白芍3份①灵芝1份 ①猪毛菜5份①菟丝子2份 ①老鹳草2份①桔梗菜5份①丹参5份 ①麦冬5份 ②淫羊藿5份①党参5份 ①金银花5份①百合5份 ①生姜5份①瓜蒌5份 ②当归2份 ②抱茎苦荬菜5份 ②五味子3份②陈皮5份
4，根据权利要求1、2或3所述的解除香烟毒的全天然保健品，其特征在于1)对小鼠的急性毒性试验结果表明属于实际无毒物(根据急性毒性分级)；2)致畸变试验结果表明，对动物骨髓细胞不产生畸变作用；3)小鼠精子畸变试验结果表明，对动物精子不产生畸变作用4)Ames氏试验结果表明对试验菌株，无论是直接作用还是代谢活化作用，均不呈现致突变性。
5，根据权利要求1、2或3所述的解除香烟毒的全天然保健品，其特征在于1)相对阴性对照组来说，除能全部清除烟毒产生的脂质过氧化物(LPO)的代谢产物丙二醛(MDA)外，尚可大幅度降低动物肝、脑组织本身的NDA含量；2)能使超氧化物歧化酶(SOD)活性大幅度升高(香烟毒所致的该酶活性降低)。
6，根据权利要求1、2或3所述的解除香烟毒的全天然保健品，其特征在于1)能使烟毒所致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率上升、烟毒所致人外周血淋巴细胞的姐妹染色单体互换(SCE)频率升高、烟毒所致Ames氏试验的试验菌株鼠伤寒沙门氏杆菌TA98、TA100回复突变菌落数增加等项指标均降至正常范围内。
7，根据权利要求1、2或3所述的解除香烟毒的全天然保健品，其特征在于1)可明显降低由吸烟和缺氧引起的肺动脉高压，并可抑制由缺氧引起的脑血管扩张；2)可增强心肌的收缩功能和舒张功能。
8，根据权利要求1、2或3所述的解除香烟毒的全天然保健品，其特征在于对三种类型的急性缺氧(低张性缺氧、血液性缺氧、组织性缺氧)能部份明显提高机体的耐受性的作用。
9，根据权利要求1、2或3所述的解除香烟毒的全天然保健品，其特征在于可使香烟及环磷酰胺引起下降的四项免疫指标(NK活性、IL-2活性、Ig、TNF)升高。
10，根据权利要求1、2或3所述的解除香烟毒的全天然保健品，其特征在于可明显减轻由吸烟引起的呼吸道损伤(纤毛紊乱和脱落)。
11，根据权利要求1、2或3所述的解除香烟毒的全天然保健品，其特征在于能抑制肺腺癌细胞的增殖及移植性实体瘤生长。
12，根据权利要求1、2或3所述的解除香烟毒的全天然保健品，其特征在于所说的制剂是任何一种保健品所采用的剂型。
13，根据权利要求12所述的解除香烟毒的全天然保健品，其特征在于将配方中的成分分为两部份，其一部份(配方中标①，即原料1)加工成液体剂型，另一部份(配方中标②，即原料2)制成固体剂型。
14，根据权利要求12所述的解除香烟毒的全天然保健品的制备方法，其特征在于对原料1各成分经清洗成净料，加水后100℃蒸煮两次，第一次加水10倍，第二次加水8倍，每次1.5-2小时后4层纱布过滤，两次所得滤液混合。滤液中加等量乙醇混合后静置24小时去沉淀，对上清液蒸发，回收乙醇后得到母液。滤液被浓缩至原量的1/2。按0.02％的量加入高蛋白糖后溶解后过滤而成营养液，经灌装，105℃蒸汽灭菌30分钟、冷却、清洗外瓶、凉干、贴签、包装；对原料2中的成分经清洗成净料，加水后100℃蒸煮两次，第一次加水10倍，第二次加水8倍，每次1.5-2小时后4层纱布过滤，两次所得滤液混合，滤液中加等量乙醇混合后静置24小时去沉淀，对上清液蒸发，回收乙醇后得到浓缩液。滤液被浓缩至原量的1/2，相对密度为1.30-1.33。加淀粉拌匀，烘干并粉碎至通过120目筛，粉料可装装胶囊或加辅料制片、压板；将以上液体成品及胶囊或片剂成品装C式拖盘盒内而成产品。
全文摘要
本发明公开了一种解香烟毒的全天然保健品，它是由苦苣、薏苡仁、枸杞子、山楂等全天然药食同源的食用植物为原料，根据原料的特性组合制成两种剂型。本发明制品安全无毒，能有效清除吸烟导致的体内有害物(自由基等)、灭活致癌物，保护呼吸道粘膜和纤毛，提高体内SOD活性，提高人体缺氧耐受力，缓解和预防吸烟和慢性缺氧对机体的不良影响，明显减轻吸烟导致的肺、心、脑血管损伤。
文档编号A61P25/34GK1122238SQ9510792
公开日1996年5月15日 申请日期1995年8月8日 优先权日1995年8月8日
发明者高扶存 申请人:高扶存