专利名称：具有抗氧剂作用的抗过敏剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有氢醌衍生物的具有抗氧剂作用的抗过敏剂。
目前，过敏性疾病快速增长，特别是在城市地区，10个人中就有3个受到过敏性疾病(例如支气管哮喘、过敏性皮炎、花粉病和过敏性鼻炎)的困扰，并且，该病的治疗是全国性的问题。引起这种快速增长的原因包括空气污染、食品添加剂和许多其它问题，但是，其背景仍未搞清楚，并且，其中的某些问题是难以解决的。最基本的预防过敏的方法是避免过敏原，但是，事实上在现实生活中即使是已鉴定出的过敏原(例如日本柳杉)也不易避免，更何况在许多情况下的过敏原是未鉴定出的，或包括许多种类。近来，针对支气管哮喘，由于长效支气管扩张药，特别是吸入型类固醇的发展，以减轻症状为目的的对其发作的控制已有进展，但是，还远远不能最终治愈。
已经研制出了各种以预防治疗为目的的抗过敏药物，但是，在反映过敏性疾病复杂状况的身体中的可利用率远远低于理想水平。近来，白三烯C4、D4和E4受体拮抗剂(ONO-1078)已上市，并因其显示出比常规抗过敏药更好的作用而引人注意。另一方面，据报导白三烯C4受体拮抗剂不起作用的白三烯B4受体是由肥大细胞和嗜酸细胞产生并与过敏症状密切相关。因此，最有效的方式是抑制5-脂氧合酶，即产生白三烯的酶的活性，从而尽可能地控制与过敏症状的开始和发展密切相关的白三烯的作用。
事实上，已提出多种5-脂氧合酶抑制剂作为抗过敏剂的候选化合物。但是，尽管在体外(在试管中)这些候选化合物显示出很强的5-脂氧合酶抑制作用，却在体内(在活体中)几乎没有显示出抗过敏活性，因此，只好放弃将上述化合物用作药物的研究。几乎所有具有强5-脂氧合酶抑制作用的化合物含有作为其基本骨架的儿茶酚骨架，并且，在肝中，由于儿茶酚甲基转移酶(COMT)的作用使具有儿茶酚骨架的化合物几乎完全转化为生理上没有活性的代谢产物。事实上，本发明人首次制备了具有儿茶酚骨架的查耳酮衍生物，该化合物是最强的5-脂氧合酶抑制剂(药物化学杂志J.Med.Chem.36，3904(1993))，但是，当口服给药时，发现该化合物在肝中进行代谢且在血液中几乎检测不到未改变的主体结构。
经过深入的研究，本发明人发现了不带有儿茶酚骨架的新化合物I，该化合物不仅在体外，而且在体内都具有强抗氧剂作用(5-脂氧合酶抑制作用)，此外还具有抗组胺作用，并在动物的口服给药试验中显示出优异的抗过敏作用，从而完成了本发明。因此，本发明的目的是提供具有抑制白三烯产生和抗组胺双重作用，并可口服给药的抗过敏剂。
图.1是在使用大鼠肝微粒体的ADP/Fe3+诱发的脂类过氧化反应中化合物I和BHT的作用图；图.2是在大鼠背部皮肤上的48小时同源的PCA反应中化合物I和tranilast的作用图。
本发明涉及具有氢醌骨架的由下述通式表示的抗过敏化合物
(其中n代表整数2-10)，并且，发现化合物I具有白三烯产生抑制作用、抗组胺作用以及口服并有效的抗过敏活性。
实施例本发明的实施例以试验实施例和合成实施例给出。试验实施例1〔抗氧剂作用(脂类过氧化物产生抑制作用)〕由下式表示的化合物II-VII式
式
式
式
式
式
在使用大鼠肝微粒体的ADP/Fe3+诱发的脂类过氧化反应中显示出依赖于浓度的抑制作用；其中，化合物II、化合物III、化合物IV和化合物V显示出比作为阳性对照物的BHT更高的抑制作用(图.1)。试验方法(ADP/Fe3+诱发的脂类过氧化反应)使用Kiso等人的方法，即将100μl大鼠肝微粒体悬浮液(20mg蛋白质/ml)、100μl 2mM NADPH、100μl 10mM ADP和100μl样品溶液(该溶液的浓度由10％N，N-二甲基甲酰胺(DMF)水溶液控制)加入500μl三羟基甲基氨基甲烷(Tris)-HCl缓冲溶液(167mM KCl，74.4mM三羟基甲基氨基甲烷，pH7.4)，并在37℃加热5分钟；然后，加入100μl 100μM FeCl3，并在37℃加热20分钟。
在对照组中，加入100μl 10％DMF水溶液代替样品溶液。在空白组中，加入100μl 10％DMF水溶液代替样品溶液，加入300μl水代替100μlNADPH，100μl FeCl3和100μl ADP。通过用冰冷却使反应结束，按照Ohkawa等人的方法以丙二醛的量计算脂类过氧化物的量。
上述方法还包括将200μl 8.1％十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液、1.5ml乙酸缓冲溶液(用10M NaOH将含有0.27M HCl的20％ AcOH的pH控制为3.5)和1.5ml 0.8％2-硫代巴比土酸水溶液加入1ml上述反应混合物中，并在沸水浴中加热20分钟。加热后，通过用冰冷却使反应结束，加入4ml n-BuOH-吡啶混合溶液(15∶1)并剧烈混合。然后，将混合物在800xg的条件下离心10分钟，再测量上层液体在532nm的吸收度。
试验实施例2〔5-脂氧合酶抑制作用(白三烯产生抑制作用)〕在本试验中，用在试验1中显示出最强抗氧剂作用的化合物V作为样品。化合物V对5-脂氧合酶的抑制活性(IC50)为6.2μM，仅略低于具有儿茶酚骨架的阳性对照化合物NDGA(IC50＝0.5μM)。试验方法(5-脂氧合酶抑制作用)使用Blackham等人的方法，即将RBL-1细胞悬浮液(用50mM磷酸盐缓冲剂将悬浮液中的细胞数量调节至1×107细胞/ml)进行超声波处理并使细胞破裂。在500μl细胞匀浆溶液中，加入10μl样品溶液(该溶液的浓度用1％ DMSO调节为不同的浓度)、10μl 100mMCaCl2和10μl10mg/ml花生四烯酸的MeOH溶液，并加热至37℃3分钟。在对照组中，加入10μl 1％ DMSO代替样品。在空白组中，加入10μl 1％ DMSO代替样品，并加入500μl 50mM磷酸盐缓冲剂代替RBL-细胞悬浮液。接着，在其中加入500μl MeOH并用冰冷却混合物以使反应结束，混合后在2000xg的条件下离心15分钟。然后，在下述条件下，使用HPLC测量在10μl上层液体中的5-HETE量。HPLC条件柱Cosmosil 5C18(4.6×150mm)流动相乙腈∶0.1％乙酸＝85∶15流速1.0ml/min测量波长235nm按照下式计算5-脂氧合酶活性抑制率
面积峰面积试验实施例3-抗组胺作用在本试验中，用在试验1中显示出最强抗氧剂作用的化合物V作为样品。通过Magnus方法，以二苯基羟基胺盐酸盐为阳性对照物，用豚鼠肠测试化合物V的抗组胺作用；结果，代表化合物V的抗组胺作用的指数-pA2为6.90。方法(Magnus法)将已禁食过夜的豚鼠击死，将其回肠取出切成约2cm的长度，将一端悬浮在等渗换能器，并将另一端固定在不动的杆上。将温控浴的温度保持在37℃并静置回肠约30分钟，同时将含有95％O2和5％CO2的混合气通入10ml Tyrode溶液，注射不同浓度的组胺进行培养，从而，通过累积组胺给药得到次序增长的浓度的剂量反应曲线。接着，洗涤后，同样得到样品给药情况下的关于组胺的剂量反应曲线并计算pA2。试验实施例4-对口服给药的大鼠的抗过敏作用(PCA法)使用大鼠皮过敏性反应(PCA反应)评价化合物II-化合物VII的抗过敏作用，其中以口服抗过敏剂-tranilast作为阳性对照化合物。结果是，甚至通过口服给药，化合物III-化合物VI也表现出抗过敏活性，特别是化合物IV和化合物V表现出比阳性对照物更高的活性。试验方法(通过PCA反应的抗过敏作用)按照Koda等人的方法进行试验{Int.Arch.Allergy Appl.Immunol.87，254(1988)}。将体重约200g的Wistar-strain雄性大鼠的背脱毛，将0.1ml抗血清皮内注射入背，该抗血清显示48小时同源的PCA强度并以1∶128-1∶256的比例用生理盐水稀释。48小时后，将含用蛋白质表示为1mg的DNP-BSA的1ml 0.5％伊凡斯蓝生理盐水注射入尾静脉。30分钟后，用驱血法处死大鼠，切下背部皮肤上产生的色素斑并测出渗出的色素量。该方法还包括将切下的皮肤放入试管，加入1ml 1N KOH后，在37℃静置过夜以洗脱色素；加入9ml含有丙酮和0.6N磷酸(以13∶5混合)的混合物并摇动，再通过过滤除去不溶物，并且测量滤液在620nm的吸收度和测出色素量。将样品悬浮在0.2％CMC-Na中，使样品以0.5ml/100g大鼠体重的量对大鼠给药且在抗原给药之前2小时口服给药。结果示于图.2。合成实施例1氢醌衍生物化合物II的合成方法
(1)将三甲基氢醌(10.0g，66mmol)和2-溴-1-乙醇(8.4g，66mmol)溶于甲苯(40ml)，并加入磷钼酸(1.92g)，再回流24小时。随后，用硅藻土吸滤，用旋转蒸发器减压除去溶剂，并使用硅胶柱色谱纯化(己烷∶苯＝1∶5)得到白色化合物VIII(8.0g，47％，mp105-107℃)。
(2)将化合物VIII(1g，3.86mmol)和化合物XIV(0.974g，3.86mmol)溶于乙腈(20ml)，加入碳酸钾(1.08g，7.72mmol)，并回流20小时。随后，吸滤，用旋转蒸发器减压除去溶剂，并使用硅胶柱色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)得到白色化合物II(0.6g，36％，mp147-149℃)。<化合物II>1HNMR(200 MHz，CDCl3)δ2.09(s，3H)2.12(s，3H)2.15(s，3H)2.44(bs，4H)2.63(bs，4H)2.79(t，J＝5.7Hz，2H)3.95(t，J＝5.7Hz，2H)4.18(s，1H) 6.43(s，1H) 7.14-7.42(m，10H)；MS(EI-DI)430(M+)盐酸盐mp142-145℃。合成实施例2氢醌衍生物III的合成方法
(1)将三甲基氢醌(7.6g，50mmol)和3-溴-1-丙醇(7.0g，50mmol)溶于甲苯(40ml)，并加入磷钼酸(1.0g)，再回流24小时。随后，用硅藻土吸滤，用旋转蒸发器减压除去溶剂，并使用硅胶柱色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝7∶1)得到白色化合物IX(5.4g，40％，mp60-62℃)。
(2)将化合物IX(1g，3.66mmol)和化合物XIV(0.924g，3.66mmol)溶于乙腈(20ml)，加入碳酸钾(1.01g，7.32mmol)，并回流20小时。随后，吸滤，用旋转蒸发器减压除去溶剂，并使用硅胶柱色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)得到白色化合物III(0.776g，48％，mp47.5-50℃)。<化合物III>1HNMR(200MHz，CDCl3)δ1.92(tt，J＝6.1Hz，2H)2.11(s，3H)2.13(s，3H)2.17(s，3H)2.44(bs，4H)2.49(t，J＝6.1Hz，2H)2.53(bs，4H)3.84(t，J＝6.1Hz，2H)4.18(s，1H)6.47(s，1H)7.10-7.42(m，10H)；MS(EI-DI)444(M+)盐酸盐mp211-213℃。合成实施例3氢醌衍生物IV的合成方法
(1)将三甲基氢醌(2.0g，13.1mmol)和4-氯-1-丁醇(1.4g，13.1mmol)溶于甲苯(20ml)，并加入磷钼酸(0.5g)，再回流24小时。随后，用硅藻土吸滤，用旋转蒸发器减压除去溶剂，并使用硅胶柱色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝10∶1)得到白色化合物X(1.4g，44％，mp58-59℃)。
(2)将化合物X(1.0g，4.12mmol)和化合物XIV(1.04g，4.12mmol)溶于乙腈(20ml)，加入碳酸钾(1.14g，8.24mmol)，并回流20小时。随后，吸滤，用旋转蒸发器减压除去溶剂，并使用硅胶柱色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)得到白色化合物IV(1.4g，74％，mp46-48℃)。<化合物IV>1HNMR(200MHz，CDCl3)δ1.63-1.78(m，4H)2.12(s，3H)2.16(s，3H)2.21(s，3H)2.36-2.51(m，10H)3.87(t，J＝6.1Hz，2H)4.21(s，1H)6.49(s，1H)7.16-7.44(m，10H)；MS(EI-DI)458(M+)盐酸盐mp141-143℃。合成实施例4氢醌衍生物V的合成方法
(1)将三甲基氢醌(1.0g，6.6mmol)和6-氯-1-己醇(0.9g，6.6mmol)溶于甲苯(20ml)，并加入磷钼酸(0.5g)，再回流24小时。随后，用硅藻土吸滤，用旋转蒸发器减压除去溶剂，并使用硅胶柱色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝14∶1)得到白色化合物XI(1.02g，57％，mp 44-46℃)。
(2)将化合物XI(1g，3.69mmol)和化合物XIV(0.932g，3.69mmol)溶于乙腈(20ml)，加入碳酸钾(1.01g，7.38mmol)，并回流20小时。随后，吸滤，用旋转蒸发器减压除去溶剂，并使用硅胶柱色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)得到白色化合物V(0.9g，50％，mp42-43℃)。<化合物V>1HNMR(200MHz，CDCl3)δ1.26-1.82(m，8H)2.13(s，3H)2.16(s，3H)2.21(s，3H)2.33(t，J＝7.3Hz，2H)2.45(m，8H)3.85(t，J＝6.6Hz，2H)4.20(s，1H)6.50(s，1H)7.15-7.42(m，10H)；MS(EI-DI)486(M+)盐酸盐mp155-157℃。合成实施例5氢醌衍生物VI的合成方法
(1)将三甲基氢醌(0.8g，5.26mmol)和8-溴-1-辛醇(1.1g，5.26mmol)溶于甲苯(20ml)，并加入磷钼酸(0.5g)，再回流24小时。随后，用硅藻土吸滤，用旋转蒸发器减压除去溶剂，并使用硅胶柱色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝8∶1)得到白色化合物XII(1.03g，57％，mp62-64℃)。
(2)将化合物XII(2g，5.82mmol)和化合物XIV(1.47g，5.82mmol)溶于乙腈(20ml)，加入碳酸钾(1.61g，11.64mmol)，并回流20小时。随后，吸滤，用旋转蒸发器减压除去溶剂，并使用硅胶柱色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)得到白色化合物VI(2.00g，67％，油状物)。<化合物VI>1HNMR(200MHz，CDCl3)δ1.2-1.79(m，12H)2.13(s，3H)2.17(s，3H)2.21(s，3H)2.26-2.53(m，10H)3.85(t，J＝6.5Hz，2H)4.21(s，1H)6.51(s，1H)7.16-7.43(m，10H)；MS(EI-DI)514(M+)盐酸盐mp179-182℃。合成实施例6氢醌衍生物VII的合成方法
(1)将三甲基氢醌(4.0g，26.3mmol)和10-氯-1-g癸醇(5.06g，26.3mmol)溶于甲苯(30ml)，并加入磷钼酸(1.0g)，再回流24小时。随后，用硅藻土吸滤，用旋转蒸发器减压除去溶剂，并使用硅胶柱色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝20∶1)得到白色化合物XIII(6.0g，70％，mp 57-58℃)。
(2)将化合物XIII(3g，9.18mmol)和化合物XIV(2.32g，9.18mmol)溶于乙腈(20ml)，加入碳酸钾(2.54g，18.36mmol)，并回流20小时。随后，吸滤，用旋转蒸发器减压除去溶剂，并使用硅胶柱色谱纯化(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)得到白色化合物VII(3.0g，60％，油)。<化合物VII>1HNMR(200MHz，CDCl3)δ1.21-1.78(m，16H)2.13(s，3H)2.15(s，3H)2.20(s，3H)2.29(t，J＝6.5Hz，2H)2.34-2.44(m，8H)3.86(t，J＝6.5Hz，2H)4.19(s，1H)6.50(s，1H)6.50(s，1H)7.15-7.43(m，10H)；MS(EI-DI)542(M+)盐酸盐mp182-185℃。
权利要求
1.通式I表示的氢醌衍生物
其中n是2和10之间的整数。
2.按照权利要求1的氢醌衍生物，所述化合物以下式表示
3.按照权利要求1的氢醌衍生物，所述化合物以下式表示
4.按照权利要求1的氢醌衍生物，所述化合物以下式表示
5.按照权利要求1的氢醌衍生物，所述化合物以下式表示
6.按照权利要求1的氢醌衍生物，所述化合物以下式表示
7.按照权利要求1的氢醌衍生物，所述化合物以下式表示
8.如权利要求1所述氢醌衍生物的盐酸盐。
9.如权利要求2所述氢醌衍生物的盐酸盐。
10.如权利要求3所述氢醌衍生物的盐酸盐。
11.如权利要求4所述氢醌衍生物的盐酸盐。
12.如权利要求5所述氢醌衍生物的盐酸盐。
13.如权利要求6所述氢醌衍生物的盐酸盐。
14.如权利要求7所述氢醌衍生物的盐酸盐。
15.具有抗氧剂作用的抗过敏剂，所述抗过敏剂包括以下式表示的氢醌衍生物或其盐酸盐
其中n是包括在2和10之间的整数。
16.如权利要求15所述的抗过敏药，所述抗过敏药包括以下式表示的氢醌衍生物或其盐酸盐
17.如权利要求15所述的抗过敏药，所述抗过敏药包括以下式示的氢醌衍生物或其盐酸盐
18.如权利要求15所述的抗过敏药，所述抗过敏药包括以下式表示的氢醌衍生物或其盐酸盐
19.如权利要求15所述的抗过敏药，所述抗过敏药包括以下式表示的氢醌衍生物或其盐酸盐
20.如权利要求15所述的抗过敏药，所述抗过敏药包括以下式表示的氢醌衍生物或其盐酸盐
21.如权利要求15所述的抗过敏药，所述抗过敏药包括下式表示的氢醌衍生物或其盐酸盐
全文摘要
本发明提供可口服给药的具有白三烯产生抑制作用和抗组胺作用的抗过敏剂,所述抗过敏剂包括以通式Ⅰ表示的氢醌衍生物(其中n代表2—10的整数)。
文档编号A61K31/495GK1201791SQ98108729
公开日1998年12月16日 申请日期1998年3月20日 优先权日1997年3月21日
发明者佐藤利夫, 江幡彻士, 小坂康雄 申请人:佐藤利夫, 株式会社Ltt研究所, 株式会社库雷