专利名称：皮肤增白剂的制作方法
背景技术：
(a)发明领域本发明涉及5，15-二乙酰基-3-苯甲酰基续随子醇(EL-1)化合物和包含该化合物的皮肤增白组合物，更具体地涉及包含5，15-二乙酰基-3-苯甲酰基续随子醇(EL-1)化合物的药用组合物和化妆用组合物，其不仅可以使雀斑和斑点褪色，而且还可以用作皮肤增白剂。
(b)相关技术描述具有洁白细嫩的皮肤是多数人的愿望。一般来说，人类皮肤的颜色是根据皮肤中黑素的浓度和分布由遗传决定的，但是也可以通过环境或生理因素，如太阳紫外线、疲劳和紧张而改变。黑素是在酪氨酸酶作用于酪氨酸并将其转化成多巴和多巴醌之后，通过非酶氧化反应而产生的。尽管黑素的形成过程是已知的，但是诱导黑素合成的机理，或酪氨酸起作用之前的步骤还不十分清楚。
因此，具有抑制酪氨酸酶活性的常规材料(如氢醌、抗坏血酸、曲酸和谷胱甘肽)已被混入软膏或化妆品中，用于皮肤的增白和雀斑与斑点的褪色。然而，氢醌的问题在于其用量的特别限制，因为它引起严重的皮肤刺激，尽管其皮肤增白效果是公认的；抗坏血酸很容易被氧化，所以混有抗坏血酸的化妆品存在颜色和气味变化的问题；硫醇化合物如谷胱甘肽、半胱氨酸等具有独特的令人不愉快的气味，还存在透皮吸收问题；而配糖体及其衍生物的问题在于因其高极性而不适于用作化妆品的混合成分。
此外，虽然胎盘提取物等可以用于皮肤增白组合物，但是它们的问题在于临床试验的增白效果不充分。因此，现有皮肤增白剂的应用因其毒性和稳定性问题而受到限制。
发明概述本发明是为了解决上述问题而作出的。本发明的一个目的是提供一种皮肤增白组合物，该组合物对活体是安全的，并且具有高的黑素形成抑制效果和皮肤增白效果。
为实现上述目的，本发明提供一种包含化学式1的5，15-二乙酰基-3-苯甲酰基续随子醇(EL-1)化合物的皮肤增白组合物，该组合物具有高的黑素形成抑制效果和皮肤增白效果[化学式1] 附图简述参照下列详述并结合附图，可以更好地理解本发明，由此，对本发明的更完整的理解以及伴随本发明的很多优点将是显而易见的。在附图中
图1是5，15-二乙酰基-3-苯甲酰基续随子醇(EL-1)的质谱；图2是5，15-二乙酰基-3-苯甲酰基续随子醇(EL-1)的质子磁共振谱；图3是5，1 5-二乙酰基-3-苯甲酰基续随子醇(EL-1)的碳磁共振谱。
优选实施方案详述在下列详述中，简单地通过解释发明人实施本发明的最佳方式，仅对本发明的优选实施方案进行说明。可以意识到，本发明可以在多个显而易见的方面进行修改而不脱离其范围。因此，附图和说明书实际上是对本发明的解释而不是对本发明的限制。
下面对本发明进行详细的描述。
本发明人是通过发现5，15-二乙酰基-3-苯甲酰基续随子醇(EL-1)具有非常强烈的黑素形成抑制效果和皮肤增白效果而完成本发明的。这种效果的确立是通过对动物和自然界中自然生长的植物的反复研究的结果而实现的，其目的是开发一种新的皮肤增白剂，所述的动物和植物经B16小鼠黑素瘤细胞处理，所述的黑素瘤细胞恰好能够屏蔽抑制自身诱导黑素合成的材料。
续随子L(Euphorbia lathyris L.)为两年生植物样品，其种子用于本发明。在Dong-ui-bo-gam中公开续随子的提取物对积水、浮肿等症状有效。此外，虽然在日本专利08175954中公开了续随子L提取物的增白效果，但是难于将该提取物直接用作外用的皮肤产品，这是因为其导致急性反应的毒性(Handbook of medicinal herbs，James A，Duke.，CRC Press，p189，1985)。
本发明的皮肤增白组合物包含5，15-二乙酰基-3-苯甲酰基续随子醇(EL-1)化合物，尽管公开的有关5，15-二乙酰基-3-苯甲酰基续随子醇(EL-1)结构异构体的一篇论文，其中乙酰基连接于3位而苯甲酰基连接于5位(Japanesepharmacy Magazine 95(6)，760-763，1975)，以及一篇其中结构没有明确地鉴定的论文，即3位和5位的衍生物没有精确鉴定的论文(Phytochemistry，29(6)，2025-2026，1990)，关于本发明化合物的组成，出版于普通杂志的化合物与本发明的明显不同在于，本发明的5，15-二乙酰基-3-苯甲酰基续随子醇具有连接于3位的苯甲酰基和连接于5位的乙酰基。
因此，本发明的5，15-二乙酰基-3-苯甲酰基续随子醇，作为一种分子式为C31H38O7的lathyrane双萜，从未分离出来过。存在于植物中的EL-1和通过化学方法合成的EL-1均可用于本发明。本发明的EL-1包含于续随子L植物中，由于它还以不同的数量存在于其它植物中，所以本发明不限于该种植物。
在本发明中，EL-1是从续随子L提取物中纯化而来的，与其它植物相比，续随子提取物中包含大量的EL-1。在该纯化过程中，EL-1是在液-液萃取之后通过使用合成树脂如硅胶、活性氧化铝等的柱色谱、高效液相色谱等纯化的，液-液萃取所使用的溶剂有甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、乙醚、苯、氯仿、己烷、环己烷和石油醚，但是所述的纯化方法不限于此。
本发明的EL-1的萃取和纯化方法详述如下。
续随子L是一种可以从市场上买到的药材，买来并破碎之后，将碎片以每干重破碎的碎片放置于5-20体积％的水中，并加入具有1-4个碳原子的无水或含水的低级醇，或者加入乙酸乙酯、己烷或氯仿，在带有回流冷凝器的提取器中于50-100℃下煮沸和萃取1-5小时。用200-400目的滤布过滤提取物，之后用与上面方法相同的方法再萃取剩余物一次。合并萃取液并在减压下浓缩，将浓缩物冷冻干燥或喷雾干燥，得到干燥的提取物。然后将干燥的续随子L提取物悬浮于水中，加入相同体积的己烷，由此得到油相的己烷馏分。
用另一种方法，续随子L破碎之后，碎片于室温至250℃下压缩和过滤，由此得到一定数量的续随子L油。
将溶剂以0.2-10倍于油的数量，加到所得到的油相己烷馏分或所得到的压缩和过滤油中。所述的溶剂可以是乙醇、甲醇、乙腈、纯水或它们的混合物，它们可以按不同的比例加入，然后进行液-液萃取，由此得到溶剂可溶馏分。用柱色谱从该馏分中分离出EL-1，分离出的EL-1再用高效液相色谱纯化。分离出的纯物质的结构用质谱和核磁共振谱分析，确认该纯物质为EL-1。
从图1质谱图中的523[分子量+H]+峰和545.3[分子量+Na]+峰，确认所述纯物质的分子量为522。
图2表示上述化学式1的质子磁共振谱，其中确认5.28(dd)ppm的峰和6.21(d)ppm的峰分别为3位氢和5位氢的峰，而且确认图2的峰为1-H3.52(m)，2-H2.35(m)，3-H5.82(dd)，4-H2.90(dd)，5-H6.21(d)，7-H2.10(m)，2.06(m)，8-H1.94(m)，1.75(m)，9-H1.26(m)，11-H1.41(dd)，12-H6.54(d)，16-H0.94(d)，17-H5.01(s)，4.78(s)，18-H1.17(s)，19-H1.17(s)，20-H1.72(s)，21-H2.21(s)，22-H1.83(s)，27-H8.03(d)，28-H7.45(t)，29-H7.57(t)，30-H7.45(t)和31-H8.03(d)。
图3表示碳磁共振谱，其中确认80.9ppm和65.4ppm的峰分别为3位碳和5位碳的峰，而且确认图3的峰为C48.5，2-C37.9，3-C80.8，4-C52.2，5-C65.4，6-C144.5，7-C34.9，8-C21.6，9-C35.4，10-C25.3，11-C28.5，12-C146.5，13-C134.2，14-C196.7，15-C92.5，16-C14.2，17-C115.4，18-C29.0，19-C16.8，20-C12.4，21-C22.0，22-C20.9，23-C169.7，24-C170.1，25-C166.1，26-C130.1，27-C129.6，28-C128.3，29-C133.1，30-C128.3和31-C129.6。
当以该方法中所制备的续随子L萃取物即EL-1处理小鼠B-16黑素瘤细胞时，其显示出非常强烈的黑素合成抑制作用。另外，当将该化合物放入各种化妆材料如外用皮肤软膏或乳剂中并施用于人的皮肤时，皮肤的增白效果是优异的。而且没有显示出其它副作用，所以EL-1看起来是一种改进的、安全的并且非常有效的雀斑和斑点褪色剂和皮肤增白剂。
在外用皮肤软膏或化妆品中，EL-1的干含量为0.00001-10重量％，优选0.001-1重量％。当含量低于0.00001重量％时，没有观察到明显的皮肤增白效果，当含量高于10重量％时，没有观察到效果的显著提高。
下面描述实施例和对比例，以帮助理解本发明。但是，下面的实施例只是用来更容易地理解本发明，本发明不受下列实施例的限制。
实施例 1将100克续随子L破碎后的碎片加到500毫升80％的甲醇溶液中，并在带有回流冷凝器的萃取器中煮沸3小时，之后萃取，然后用300目的滤布过滤。剩余物用与上述方法相同的方法再处理一次。合并萃取液，用Whatman 2号滤纸过滤，并于室温下除去不溶物。然后在60℃和减压下，于带有冷凝器的蒸馏装置中浓缩滤液，并将浓缩物悬浮于300毫升的纯水中。加入300毫升己烷，充分摇动该混合物，得到己烷可溶物。该己烷可溶物通过硅胶柱色谱分离，得到450毫克含有效成分的馏分。该馏分再通过高效液相色谱纯化，分离出350毫克的EL-1。
实施例2购得续随子L并破碎之后，将100克续随子L破碎的碎片在室温下压缩并过滤，得到35毫升续随子L油。将35毫升乙醇加到上面所得到油中，对该混合物进行液-液萃取，得到乙醇馏分。该乙醇馏分经硅胶柱色谱分离，得到300毫克含有效成分的馏分。该馏分再经高效液相色谱提纯，分离出200毫克的EL-1。
实施例3除了用500毫升100％的乙醇溶液作萃取溶剂之外，用与实施例1相同的方法进行萃取，得到340毫克的EL-1。
实施例4除了用500毫升99.9％的氯仿溶液作萃取溶剂之外，用与实施例1相同的方法进行萃取，得到300毫克的EL-1。
实施例5除了用500毫升99.9％的正己烷溶液作萃取溶剂之外，用与实施例1相同的方法进行萃取，得到310毫克的EL-1。
实施例6购得续随子L之后，将100毫升80％的乙醇溶液加到按与实施例2相同的方法得到的35毫升续随子L油中，通过液-液萃取得到的乙醇馏分经硅胶柱色谱分离，得到230毫克含有效成分的馏分。该馏分再经高效液相色谱分离，分离出170毫克的EL-1。
实施例7购得续随子并破碎之后，将100克续随子L破碎的碎片在150℃下压缩并过滤，得到40毫升续随子L油。将200毫升90％的乙腈加到上面所得到油中，对该混合物进行液-液萃取，得到乙腈馏分。该乙腈馏分经硅胶柱色谱分离，得到470毫克含有效成分的馏分。该馏分再经高效液相色谱分离，分离出340毫克的EL-1。
试验实例1细胞水平下EL-1的黑素形成抑制效果试验增白效果是在细胞水平下测试的，办法是将由实施例1-7得到的EL-1加到B-16小鼠黑素瘤细胞的培养液中(Lotan R.，Lotan D.Cancer Res.403345-3350，1980)。
将由实施例1-7得到的EL-1加到B-16小鼠黑素瘤细胞的培养液中，并使EL-1的最终浓度分别为1微克/毫升、5微克/毫升和50微克/毫升，并将它们培养3天。待将胰蛋白酶加到细胞中并把培养液从培养容器中取出进行离心分离之后，提取黑素。将1毫升的氢氧化钠溶液(浓度为1N)加到提取出的黑素中并煮沸约10分钟，以使黑素溶解。试验是按这样的方式进行的，在此方式中，通过测量在400钠米的吸光度，以每单位细胞数目的吸光度来表示所形成的黑素量，即表示成A400/106细胞。重复该试验3次之后，计算相对于对照样的黑素形成量，并用平均值作为抑制比率(％)。
注重复次数＝3如上面表1所示，可以看出，根据实施例得到的EL-1与通常熟知的增白物质氢醌相比，对培养的小鼠黑素瘤细胞具有相同的黑素形成抑制能力。而且，氢醌在低浓度时具有强的黑素形成抑制能力，但因其高细胞毒性而不能进行超过10微克/毫升浓度的试验。另一方面，EL-1即使在50微克/毫升的浓度下也未显示出细胞毒性，并且具有高于氢醌的黑素形成抑制效果。因此，本发明特别适用于雀斑和斑点的褪色以及皮肤的增白作用。
制剂例1和对比例1制备外用皮肤软膏，办法是将下表2中所示的各种成分按表2中所示的比例混合，其中EL-1分别得自实施例1-7。
注*加至100重量％的量制备例2和对比例2制备化妆用的乳剂，办法是将下表3中所示的各种组分按表3中所示的的比例混合，其中EL-1分别得自实施例1-7。
注*加至100重量％的量制剂例3和对比例3制备化妆用的柔和香水(洗液)，办法是将下表4中所示的各个组分按表4中所示的比例混合，其中EL-1分别得自实施例1-7。
注*加至100重量％的量制剂例4知对比例4制备化妆用的香料，办法是将下表5中所示的各个组分按表5中所示的比例混合，其中EL-1分别得自实施例1-7。
注*加至100重量％的量制剂例5和对比例5制备化妆用的润面膏，办法是将下表6中所示的各个组分按表6中所示的比例混合，其中EL-1分别得自实施例1-7。
注*加至100重量％的量制剂例6和对比例6制备化妆用的营养香水(洗液)，办法是将下表7中所示的各个组分按表7中所示的比例混合，其中EL-1分别得自实施例1-7。
注*加至100重量％的量试验实例2选择一组包含20名健康男女的受试者，接受1000瓦ORIEL日光模拟器的照射。照射前，将带有两排孔、每排6孔且孔径为7毫米的铝箔护罩遮盖住两只手臂的下部。手臂距离(光源)10厘米以每平方厘米60毫焦的强度接受照射。将根据制剂例1-6和对比例1-6制备的含EL-1和不含EL-1的样品，一对一对地涂敷于受试者位于各自指定的开孔处的皮肤上。这种涂敷每天进行两次，从开始照射前3天开始，持续至照射后3周。(注意制剂例5和对比例5的润面膏制剂施用15分钟后脱离)制剂例和对比例孔处的色素沉积程度是通过肉眼观察来测定的。测定结果见下面的表8。
注受试者的平均数如上面表8所示，根据制剂例1-6制备的含EL-1的增白软膏和化妆材料，对20名受试者中的至少10名显示出增白效果。特别是在施用大量EL-1的制剂例1与对比例1的对比试验中，35％显示出明显的色素沉积抑制效果，而且没有检出对皮肤的任何负面作用。因此，可以看出EL-1是安全的，而且是一种特别有效的使雀斑和斑点褪色和皮肤增白的改进剂。
本发明的包含EL-1的皮肤增白组合物的优点在于，因其高溶解性贮存稳定性而可以以高浓度混合，而且容易混合，同时它还具有优异的黑素形成抑制作用和优异的色素沉积抑制作用，因此具有使雀斑和斑点褪色的作用。不仅如此，本发明的组合物还是安全的，而且对皮肤无负作用。
尽管已经通过优选的实施方案详细地描述了本发明，但是本领域的技术人员能够理解，对本发明可以作出各种修改和替换，而不脱离所附权利要求书中所限定的本发明的精神和范围。
权利要求
1.下面化学式1所表示的5，15-二乙酰基-3-苯甲酰基续随子醇化合物[化学式1]
2.皮肤增白组合物，其中包含0.00001-10.0重量％的下面化学式1的5，15-二乙酰基-3-苯甲酰基续随子醇化合物[化学式I]
3.权利要求2的皮肤增白组合物，其中的5，15-二乙酰基-3-苯甲酰基续随子醇是这样得到的用一种或多种选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、丙酮、乙醚、苯、氯仿、己烷、环己烷和石油醚的溶剂对续随子L进行液-液萃取，然后用选自硅胶和活性氧化铝的填料进行色谱分离。
全文摘要
本发明涉及5,15－二乙酰基－3－苯甲酰基续随子醇化合物和包含该续随子醇化合物的皮肤增白组合物。由于包含作为黑素产生抑制剂的5,15－二乙酰基－3－苯甲酰基续随子醇,所以本发明的组合物在抑制色素淤积和增强皮肤或斑点变色方面是优良的。此外,由于本发明的组合物不引发副作用,所以其具有优异的稳定性。
文档编号A61P17/00GK1356974SQ99816101
公开日2002年7月3日 申请日期1999年12月14日 优先权日1998年12月31日
发明者金清泽, 金镐正, 陈戊铉, 郑珉涣, 元贞美 申请人:Lg生活健康株式会社