无针注射狂犬病疫苗系统与应用

无针注射狂犬病疫苗系统与应用
【专利摘要】本发明公开了无针注射狂犬病疫苗系统与应用，本发明提供了无针注射狂犬病疫苗系统，包括灌装有狂犬病疫苗的容器和可读载体；所述可读载体记载内容包括：所述狂犬病疫苗的无针注射剂量不大于所述狂犬病疫苗标准剂量。本发明实验证明了无针注射安瓿与无针注射器联合应用进行免疫时，抗原用量只需传统肌肉注射抗原用量的一部分，即可与其产生相同或更高的中和抗体水平。进一步说明无针免疫途径为免疫狂犬病疫苗可供选择的理想途径。
【专利说明】
无针注射狂犬病疫苗系统与应用
技术领域
[0001 ]本发明设及医药领域，尤其是传染性疾病领域。更具体地，设及无针注射狂犬病疫 苗系统与应用。适用于各类狂犬病疫苗免疫预防接种。
【背景技术】
[0002] 目前，国内外普遍采用不诱钢制成的注射针头对人体进行药物或疫苗的注射。众 所周知，针头的注射会带来诸如:医护人员意外刺伤、接种者恐针和疼痛W及交叉污染等风 险。因此，注射的安全性已成为临床操作的热点关注问题。也促使了可代替传统有针注射方 式并可避免上述危害的新的药物注射或疫苗接种方式的诞生一一无针注射方式。因避免针 头的使用，可克服接种者特别是儿童的恐针感，同时有效降低医护人员针头刺伤的风险，并 可避免针头不当使用造成的交叉污染的发生。
[0003] 1853年由法国人和美国人共同设计出了第一支无针注射器。1936年美国首次授权 "射流注射"专利技术，并广泛应用于二战期间部队的大规模免疫预防接种。随后，无针注射 器实现商业化，并被认为是极具发展潜力的应用领域。近年来，无针注射技术处在飞速发展 阶段，W传统的高压无针注射创伤大，发展到今天低压无针注射创伤小，推动了无针注射技 术发展与应用。因其突出的优势其在医疗卫生事业将会拥有广泛的应用领域与无限前景。
[0004] 狂犬病是由狂犬病毒感染引起的一种人畜共患急性传染病，全球每年有数万人死 亡，其中亚洲和非洲的负担较大。通过疫苗接种W及在免疫后实施计划免疫是有效的预防 狂犬病方式，然而治疗费用高达40-50美元每人份，运超过了很多疫苗潜在需求者的承担范 围，因此降低费用成为狂犬病疫苗接种的核屯、内容。
[0005] 现有的疫苗免疫接种多采用有针肌肉或皮下部位免疫，存在抗原用量大，免疫应 答与免疫保护不足及副作用大的现实问题。许多研究已经证实皮肤的免疫原性优于肌肉或 其他途径，药物或疫苗透过角质层进入真皮，被真皮层丰富的抗原提呈细胞识别并捕获，并 将抗原呈递给T细胞，引起免疫应答。同时无针注射使药物或疫苗可在注射部位呈现网状分 散状态分布，增加了与抗原提呈细胞的接触，提高免疫应答反应。因此，与呈现团状聚集分 布的肌肉注射不同，无针皮内注射仅需肌肉注射的部分剂量即可引起相同或更强的免疫反 应。运不仅节约疫苗用量与成本，免于受到疫苗短缺的限制，在经济上降低了公共健康的费 用，并可降低不良反应发生率，为大规模接种提供可能。

【发明内容】

[0006] 本发明的一个目的是提供无针注射狂犬病疫苗系统。
[0007] 本发明提供的无针注射狂犬病疫苗系统，为如下1)或2):
[000引1)所示的系统包括灌装有狂犬病疫苗的容器，所述狂犬病疫苗的灌装剂量小于等 于该狂犬病疫苗的标准剂量;其中，灌装有狂犬病疫苗的容器为一次性使用的装有狂犬病 疫苗的容器；
[0009] 2)所示的系统包括灌装狂犬病疫苗的容器和可读载体;所述可读载体记载内容包 括:所述狂犬病疫苗的无针注射剂量小于等于该狂犬病疫苗标准剂量;其中，灌装有狂犬病 疫苗的容器为可多次连续使用的装有狂犬病疫苗的容器。
[0010]上述系统中，狂犬病疫苗标准剂量为2015版中国药典上公布的狂犬病疫苗肌肉注 射剂量，在本发明的实施例中，狂犬病疫苗标准剂量为2.5IU。
[ΟΟ?]上述系统中，
[0012] 所述狂犬病疫苗的灌装剂量为1/5-1倍该狂犬病疫苗的标准剂量；
[0013] 所述狂犬病疫苗的无针注射剂量为1/5-1倍该狂犬病疫苗标准剂量。
[0014] 上述系统中，所述狂犬病疫苗的灌装剂量或无针注射剂量不大于2.5IU，且不为0。
[0015] 和/或，所述狂犬病疫苗的灌装剂量或无针注射剂量具体为0.5IU-2.5IU。
[0016] 和/或，所述狂犬病疫苗的灌装剂量或无针注射剂量具体为0.5IU-1IU。
[0017] 和/或，所述狂犬病疫苗的灌装剂量或无针注射剂量具体为1IU。
[001引上述系统中，所述狂犬病疫苗为灭活疫苗、减毒活疫苗、重组化Ρ疫苗、基因工程疫 苗、抗狂犬病毒血清、特异性免疫球蛋白等中的任何一种或几种混合，但不限于此。
[0019] 上述系统中，1)所示的系统或2)所示的系统均还包括与所述灌装有狂犬病疫苗的 容器配套使用的无针注射装置；
[0020] 和/或，所述无针注射装置具体为无针注射器。上述无针注射器为江苏米特公司无 针注射器(例如:MG-0.1;ΜΡ-0.1)，本实施例中用的是ΜΡ-0.1。
[0021] 上述疫苗的剂型为液体、冻干剂、粉末、乳脂或利用生物降解材料包埋的疫苗制剂 等，但不限于此。
[0022] 上述系统中，所述灌装有狂犬病疫苗的容器为灌装有疫苗的无针注射安飯，其包 括：
[0023] 预灌装疫苗的一管体，
[0024] -体设置于所述管体一端的一无针注射器接头，
[0025] 由所述管体另一端滑动设置在所述管体内、并封闭所述管体的一动力推杆，
[00%]设置在所述无针注射器接头内的一喷射口，
[0027] 易断地连接于所述动力推杆的前端的一止动杆，
[0028] 可拆卸地设置在所述无针注射器接头上、并封闭所述喷射口的一密封帽，和
[0029] 可拆卸地设置在所述动力推杆上、并与所述管体的入口相嵌合的一密封锁块；
[0030] 其中，所述喷射口具有一止动槽，所述喷射口通过所述止动槽与所述管体内腔相 连通;所述止动杆与所述止动槽相配合。
[0031] 上述系统中，所述动力推杆的直径与所述管体的内径一致;所述止动杆和止动槽 为锥形;所述密封帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上；
[0032] 所述动力推杆上设置有密封锁块凹槽，所述密封锁块嵌合在所述密封锁块凹槽 中，从而可拆卸地安装在所述动力推杆上；
[0033] 所述密封帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上;所述动力推杆 上设置有密封锁块凹槽，所述密封锁块嵌合在所述密封锁块凹槽中，从而可拆卸地安装在 所述动力推杆上；
[0034] 所述管体、无针注射器接头、喷射口和止动槽一体制造而成。
[0035] 所述管体、无针注射器接头、动力推杆、喷射口和止动杆均采用优质医用级材料制 成，如玻璃、聚乙締、聚丙締、聚碳酸醋、COP或者环状聚締控等中的一种或几种混合制造而 成，或通过共聚、接枝、交联等化学改性和/或共混、填充等物理改性进行优化的材料，但不 限于此。
[0036] 上述管体的长度为1.5-4cm，所述无针注射器接头的长度为0.5-2cm，所述动力推 杆的长度为1.5-6 cm，整个无针注射安爾的长度为2-6 cm;所述喷射口的直径为0.Οδ? ?. 25mm。
[0037] 上述系统中，所述狂犬病疫苗的灌装体积为0.05-lml;
[0038] 或所述疫苗的灌装体积具体为0.1ml或0.2ml或0.5ml。
[0039] 上述系统中，2)所示的系统中，所述可读载体记载内容还包括所述狂犬病疫苗的 无针注射部位、所述狂犬病疫苗的无针注射方式和所述狂犬病疫苗的无针注射使用体积；
[0040] 所述无针注射部位为皮内、皮下或肌肉;所述无针注射部位具体为皮内。
[0041 ]所述狂犬病疫苗的无针注射单次使用体积为0.05-0.5ml;或所述狂犬病疫苗的无 针注射单次使用体积具体为0.1ml或0.2ml或0.5ml。
[0042] 所述无针注射方式为连续免疫或单次免疫。
[0043] 连续多次免疫为一管疫苗多次或多头（只）免疫，可设定相同剂量多次免疫，或设 定不同剂量多次免疫。
[0044] 上述系统在制备免疫动物或人产品中的应用也是本发明保护的范围；
[0045] 上述应用中，所述动物具体为家畜，所述家畜尤其具体为猪或猴或狗。
[0046] 本发明还保护一种对动物或人免疫狂犬疫苗的方法，为用上述系统进行免疫，免 疫剂量为上述系统中的无针注射剂量。
[0047] 上述方法中，免疫方式具体为多次连续免疫或单次免疫;免疫部位具体为皮内、皮 下或肌肉。
[0048] 本发明的疫苗可W单剂量免疫方案递送。或者，本发明的疫苗也可作为初始免疫- 加强免疫的方案的基本单元递送。或者，本发明的疫苗可多次免疫方式递送。
[0049] 免疫原性的特征为，与疫苗施用相关的，能够刺激机体形成特异中和抗体，或刺激 特定的免疫细胞，使免疫细胞活化、增殖、分化，最终产生免疫效应。
[0050] 安全性的特征为，与疫苗施用相关的副作用的局限，尤其是注射部位经无针注射 装备注射后的反应减轻或缺乏。
[0051] 皮肤产生免疫应答的基础为，表皮和真皮层富含朗格汉斯细胞和DC细胞，经皮免 疫的抗原被运些抗原提呈细胞捕获，转移至淋己结，从而触发T、B细胞的活化。未被捕获的 抗原也可直接迁移至淋己结，而后被DC细胞捕获并呈递给淋己细胞。
[0052] 本发明的实验证明，本发明提供的无针注射狂犬病疫苗系统，不经过传统有针免 疫注射途径，能够准确、快速、无痛地将疫苗通过无针注射器注入祀向区域，更具体是不需 要大剂量抗原的途径施用疫苗，该无针注射疫苗的无针注射安飯可防止二次利用，避免交 叉污染的发生，免疫前疫苗预灌装，提高注射速度，精确免疫剂量并为大规模快速免疫接种 提供可能。
[0053] 本发明的无针注射狂犬病疫苗系统的免疫方式是一种新型的免疫策略，通过经皮 的免疫途径，只需传统有针肌肉注射剂量的2/5、?Λ或更低剂量，即可诱导抗体的产生和全 身免疫应答的免疫效果；同时，避免针头的免疫方式还具有W下优势：1)使用安全、简便、快 捷，并可适用于大规模免疫接种;2)避免了有针注射的恐针感，降低了注射疼痛，提高了注 射的依从性;3)避免针头滥用带来的交叉污染;4)降低抗原用量，降低生产成本。
[0054] 本发明证实了无针注射疫苗及无针注射安飯与无针注射器联合应用进行免疫时， 注射的准确性与安全性。组合产品在提高免疫效率，节省免疫时间的同时，为大规模快速免 疫接种提供了可能。
[0055] 本发明的优点还在于，无针注射安飯与无针注射器联合应用进行免疫时，抗原用 量只需传统肌肉注射抗原用量的一部分，即可与其产生相同或更高的免疫效果。进一步说 明无针免疫方式为免疫狂犬病疫苗可供选择的理想策略。
【附图说明】
[0056] 图1为一次性无针注射安飯结构示意图。
[0057] 图2为应用系统中的灌装有墨汁的无针注射系统，在小鼠、大鼠、兔子皮肤内注射 墨汁分布的照片。
[0化引图3为化aize scale评分标准。
[0059] 图4为小型猪免疫后中和抗体效价。
[0060] 图5为小型猪无针注射狂犬病疫苗系统经皮内注射的DRAIZE评分。
[0061 ]图6为食蟹猴免疫后中和抗体效价。
[0062] 图7为食蟹猴无针注射狂犬病疫苗系统经皮内注射的DRAIZE评分。
【具体实施方式】
[0063] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0064] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0065] 下述内容为本发明的示例及时说明，但不意味着因此受此限制，凡是本发明在应 用过程中可能对结构的简单变换、和/或一些实施方式中实现的优点的其中一个或多个均 在本申请的保护范围内。
[0066] 实施例1、无针注射安飯的制备
[0067] 下面结合附图和实施例对本发明进行详细的描述。
[0068] 如图1A、图1B所示，本发明提供的预装疫苗或药品的无针注射安飯，其包括一管体 1、一无针注射器接头2、一动力推杆3、一喷射口 4、一止动杆5、一密封帽6和一密封锁块7;其 中，管体1用于预灌装固定精确剂量的疫苗或药品，无针注射器接头2-体设置于管体1的一 端，动力推杆3由管体1的另一端滑动设置在管体1内，并封闭管体1;喷射口4设置在无针注 射器接头纳，其具有一止动槽8，喷射口 4通过止动槽8与管体1内腔相连通;止动杆5易断地 连接于动力推杆3的前端，且止动杆5与止动槽8相配合。当动力推杆3向前运动至管体1底 部，将疫苗从喷射口 4释放时，止动杆5与止动槽8吻合，止动杆5与动力推杆3断开连接，并停 留在止动槽8内，从而防止无针注射安飯的重复利用。密封帽6可拆卸地设置在无针注射器 接头2上，并封闭喷射口 4,密封锁块7可拆卸地设置在动力推杆3上，并且与管体1的入口相 嵌合;在向管体1灌装精确剂量的疫苗或药品后，将密封锁块7安装于动力推杆3的密封锁块 凹槽9中，同时在无针注射器接头2上安装密封帽6,可W避免空气、细菌等与疫苗或药品接 触，达到无菌要求，还可W防止意外碰触导致动力推杆移动带来的药品溢出，有利于疫苗或 药品的长时间储存和运输。
[0069] 上述实施例中，密封帽6采用嵌合结构可拆卸地设置在无针注射器接头2上;动力 推杆3上设置有密封锁块凹槽9,密封锁块7嵌合在密封锁块凹槽9中，从而可拆卸地安装在 动力推杆3上。
[0070] 上述实施例中，动力推杆3的直径与管体1的内径一致。
[0071 ] 上述实施例中，止动杆5和止动槽8为锥形。
[0072] 上述实施例中，管体1的长度为1.5-4畑1，无针注射器接头2的长度为0.5-2畑1，动力 推杆3的长度为1.5-6cm，整个无针注射安爾的长度为2-6cm;喷射口 4的直径为0.05- 0.25mm〇
[0073] 上述实施例中，管体1内预灌装的疫苗剂量为0.02-1.0ml。
[0074] 上述实施例中，管体1、无针注射器接头2、动力推杆3、喷射口4和止动杆5均采用具 有良好透明性、较高初性与刚性、耐高溫、阻湿、与疫苗或药品相容性良好的优质医用级材 料制成，例如玻璃、聚乙締、聚丙締、聚碳酸醋、COP(切clo olefin polymer,环締控聚合物， 一种光学塑料材料）、环状聚締控或通过共聚、接枝、交联等化学改性和/或共混、填充等物 理改性进行优化的材料。
[0075] 上述实施例中，管体1、无针注射器接头2、喷射口 4及止动槽8-体制造而成，强度 高，制造简单方便。
[0076] 上述实施例中，在疫苗或药品预灌装和无针注射安飯的组装过程中需进行灭菌， 预装疫苗或药品的无针注射安飯的组装和包装均在无菌生产环境下进行，同时检测物理、 化学和生物性能，且需经过不溶性微粒等检查。
[0077] 无针注射安飯应用时，如图1B所示，首先将未使用过的预装疫苗或药品的无针注 射安飯的密封锁块7从动力推杆3上拆卸分离，通过无针注射器接头2与无针注射器连接，再 将密封帽6取下，然后将组合后的无针注射系统抵靠在患者皮肤上定位；启动无针注射器， 无针注射器的动力装置驱动无针注射安飯的动力推杆3相对于管体1运动至管体1底部，推 动管体1内的疫苗从喷射口4释放，将抗原（疫苗)准确、快速、无痛地分布于祀向的皮内、皮 下、肌肉和粘膜等部位，可引起相当于传统针头注射免疫全剂量抗原所达到的机体免疫保 护效果。此时，与动力推杆3连接的止动杆5插入止动槽6中，顶端堵住喷射口4,并与动力推 杆3断开连接;止动杆5停留在止动槽8内，防止二次抽药，二次接种必须更换新的安飯，从而 防止无针注射安飯的重复利用。
[0078] 上述各实施例仅用于说明本发明，其中各部件的结构、设置位置及其连接方式等 都是可W有所变化的，凡是在本发明技术方案的基础上进行的等同变换和改进，均不应排 除在本发明的保护范围之外。
[0079] 实施例2、无针注射狂犬病疫苗系统的应用
[0080] 本实施例的无针注射狂犬病疫苗系统包括灌装有0.5-2.5IU狂犬病疫苗的无针注 射安飯和配套使用的无针注射器。
[0081 ] -、无针注射狂犬病疫苗系统的注射深度摸索
[0082] 将墨汁水溶液替换疫苗灌装到实施例1制备的无针注射安飯，得到灌装有墨汁水 溶液的无针注射安飯。
[0083] 墨汁水溶液为将普通用蓝黑色墨水用孔径为0.22um的滤膜过滤，收集过滤液再用 注射用水稀释得到浓度为1 %的墨汁水溶液。
[0084] 将灌装有0.1ml墨汁水溶液的无针注射安飯与MIT无针注射器(江苏丞宇米特医疗 科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG-0.1)连接，得到无针注射装置;将无针注射装置分别 施用于体重16-18g之间的Ba化/c小鼠和200-250g之间的SD大鼠 W及2.化g的家兔，将待注 射部位剌毛，每只注射0.1ml墨汁水溶液。注射施用位置为小鼠的背部和大鼠、家兔的大腿 外侧。
[0085] 注射后30分钟，处死Balb/c小鼠、SD大鼠和家兔，用手术刀在注射部位皮肤划开 2cm2并将皮肤与肌肉分离，进行液体分布位置及深度观察。
[0086] 结果如图2所示，A、B为Ba化/c小鼠经无针皮内注射，C、D为SD大鼠经无针皮内注 射，E、F为家兔经无针皮内注射;可W看出，只在真皮区域发现墨汁，未在皮下区域中发现墨 汁，未在肌肉区域内发现墨汁。因此本发明采用的无针注射疫苗安飯及其配套待注射液体 可W将液体注射于表皮内，且无液体注射于肌肉部位。
[0087] 二、无针注射狂犬病疫苗系统的制备
[0088] 无针注射狂犬病疫苗系统包括灌装有不同剂量的狂犬病疫苗的无针注射安飯、 Μ口无针注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG-0.1)和说明书；
[0089] 灌装有不同剂量的狂犬病疫苗的无针注射安飯为灌装有0.5IU-2.5IU狂犬病疫苗 的容器。
[0090] 说明书记载狂犬病疫苗的无针注射剂量为0.5IU-2.5IU，无针注射部位具体为皮 内，无针注射方式为单次免疫或连续免疫。
[0091] 1、狂犬病疫苗的获得
[0092] 狂犬病疫苗购自迂宁成大生物股份有限公司；也可W按照中国药典2014年版第Ξ 部Ρ136培养、收获、浓缩、灭活病毒、纯化后制成狂犬病疫苗。
[0093] 狂犬病疫苗标准剂量为肌肉注射剂量，具体为2.5IU。
[0094] 2、灌装有不同剂量的狂犬病疫苗的无针注射安飯
[0095] 灌装有不同剂量的狂犬病疫苗的一次性无针注射安飯为W下Ξ种：
[0096] 灌装有剂量为0.5IU狂犬病疫苗的一次性无针注射安飯，灌装总体积为0.1ml;
[0097] 灌装有剂量为1.0IU狂犬病疫苗的无针注射安飯，其中狂犬病疫苗按照上述配置 方式灌装总体积为0.2ml;
[009引灌装有剂量为2.5IU狂犬病疫苗的无针注射安飯，其中狂犬病疫苗按照上述配置 方式灌装总体积为0.5ml;
[0099] 使用时分别将上述3种灌装有狂犬病疫苗的一次性无针注射安飯与无针注射器 (江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG-0.1)连接。
[0100] Ξ、无针注射狂犬病疫苗系统的应用
[0101] A、l、免疫
[0102] 18只体重在20-2化g的雌性小型己马猪（购自中科院实验动物中屯、）随机分为组1 和组2，每组9只；将组1和组2又进一步分为a，b，cS个小组，每组3只小型猪;a，b，cS组的剂 量分别为0.5IU上述二制备的狂犬病疫苗、1. OIU上述二制备的狂犬病疫苗、2.5IU上述二制 备的狂犬病疫苗；
[0103] 组1:采用上述分别灌装有0.5IU、1.0IU、2.5IU狂犬病疫苗的无针注射安飯与无针 注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG-0.1)，进行免疫，在第ο、3、 7、14、28天进行皮内免疫，免疫方式为W每剂0.1ml(可多点注射)的体积施用于大腿内侧区 域中，命名为无针0.5IU、无针1. OIU、无针2.5IU。
[0104] 组2:采用传统0.5mm*20mm为规格的有针注射器进行免疫，在第0、3、7、14、28天分 别进行肌肉免疫0.5IU、1. OIU、2.5IU上述二制备的狂犬病疫苗，免疫方式为W每剂0.5ml的 体积施用于大腿内侧区域中，命名为有针0.5IU、有针1.0IU、有针2.5IU。
[0105] 2、中和抗体效价测定
[0106] 在各组动物全程免疫后结束后14天收集血清，通过快速巧光灶抑制试验(参照中 国药典2015年版通则125)，测定待测血清效价，具体如下：
[0107] 将待测血清与标准品（由国家药品检定机构提供，NIBSC:RAI)各稀释度50μ1于96 孔板中，加入中和用病毒（CVS,Kissling RE.Growth of rabies virus in non-nervous tissue culture[J].Proc Soc Exp Biol Med. 1958,98(2) :223-225.)(在巧光显微镜下计 数每孔中的巧光灶比例，W80%~95%的细胞被病毒感染的病毒稀释度为中和试验用病毒 稀释度)5化1/孔，同时设置空白对照（100μΙ/孔DMEM培养基），及中和用病毒对照（5化1/孔 5%牛血清的与50μ1/孔中和用病毒），混匀后置于37°C中和1小时，每孔加入一定量的 BHK-21细胞悬液(购自ATCC，C化-2) 5化1，置于37 °C，5 % C02培养箱中培养24小时。后吸出培 养液，加入PBS清洗并吸出后，每孔加入预冷的浓度为80 %的丙酬50μ1，4°C固定30分钟，弃 丙酬，待挥发干燥后每孔加入工作浓度的巧光标记抗狂犬病病毒核蛋白抗体(Rabies DFA Reagent，Millipore，L0T: 2148939)请提供出售公司及产品目录号）50μ1，37Γ解育30分钟， 弃掉液体后，用PBS洗板3次，弃液体，每孔加入80 %甘油50μ1，置于巧光显微镜下观察，计算 公式如下：
[010引标准品邸50 = lg(l/低于50%巧光灶比例的标准品稀释度)-(0.5-标准品低于50% 巧光灶比例孔的巧光灶百分比）/(高于50%巧光灶比例孔的巧光灶百分比-低于50%巧光 灶比例孔的巧光灶百分比）X Ig标准品稀释倍数
[0109] 待测血清抓50 = lg(l/低于50%巧光灶比例的待测血清稀释度)-(0.5-待测血清低 于50%巧光灶比例孔的巧光灶百分比）/(待测血清高于50%巧光灶比例孔的巧光灶百分 比-待测血清低于50%巧光灶比例孔的巧光灶百分比）X Ig待测血清稀释倍数待测血清效 价=(标准品邸50-待测血清邸50)的倒数X标准品的效价
[0110] 待测血清效价为（lU/ml) = 10(棚細gED日日-欄脚胃地D日日)X标准品效价。
[0111] 图4表示不同组别小型猪血清中和抗体的水平，可W看出1.0IU无针注射狂犬病疫 苗系统接种的中和抗体效价与肌肉注射2.5IU的抗体效价持平，表明小剂量的无针注射系 统也可产生与标准剂量肌肉有针注射相同的中和抗体水平。
[0112] 3、系统免疫安全性评价--DRAIZE评分
[0113] 在应用无针注射狂犬病疫苗系统免疫小型猪后的5天内，每天观察注射部位的皮 肤损伤情况。并根据损伤情况及程度进行评分。评分标准如图3所示。0分:没有红斑，未见水 肿；1分:轻微红斑，皮肤有轻微隆起，几乎难W察觉；2分:清晰红斑，可看到明显的隆起;3 分：中度红斑，隆起可见明显边缘;4分:重度红斑，且有结挪及深度损伤。图5表示免疫后不 同时间点，各注射方式对注射部位皮肤的损伤情况评分结果，无针皮内注射与有针肌肉注 射DRAIZE评分结果相似，均在注射后第1天和第2天出现偶见的表皮擦伤和轻微的红斑。且 在注射后第4天，不良反应均消失。由此表明，无针皮内注射与有针肌肉注射均具有良好的 安全性。
[0114] B、无针注射狂犬病疫苗系统免疫食蟹猴
[0115] 1、免疫
[0116] 18只体重在2.5-3kg的雌性食蟹猴(购自军事医学科学院实验动物中屯、)随机分为 组1和组2，每组9只；将组1和组2又进一步分为a，b，个小组，每组3只小型猪;a，b，组 的剂量分别为0.5IU上述二制备的狂犬病疫苗、1. OIU上述二制备的狂犬病疫苗、2.5IU上述 二制备的狂犬病疫苗；
[0117] 组1:采用上述分别灌装有0.5IU、1.0IU、2.5IU狂犬病疫苗的无针注射安飯与无针 注射器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG-0.1)，进行免疫，在第0、3、 7、14、28天进行皮内免疫，免疫方式为W每剂0.1ml(可多点注射)的体积施用于大腿外侧区 域中，命名为无针0.5IU、无针1.0IU、无针2.5IU。
[0118] 组2:采用传统0.5mm巧0mm为规格的有针注射器进行免疫，在第0、3、7、14、28天进 行皮内免疫〇.5111、1.011]、2.511]上述二制备的狂犬病疫苗，免疫方式为^每剂0.51111的体积 施用于大腿外侧肌肉区域中，命名为有针0.5IU、有针1.0IU、有针2.5IU。
[0119] 2、中和抗体效价测定
[0120] 在各组动物免疫后收集血清，通过快速巧光灶抑制试验，测定待测血清效价。将待 测血清与标准品（由国家药品检定机构提供)各稀释度50μ1于96孔板中，加入中和用病毒 (CVS,Kissling RE.Growth of rabies virus in non-nervous tissue culture[J].Proc Soc Exp Biol Med. 1958,98(2) :223-225. )50μ1/孔，同时设置空白对照（100μΙ/孔DMEM培 养基），及中和用病毒对照（5化1/孔5%牛血清的与50μ1/孔中和用病毒），混匀后置于 37°C中和1小时，每孔加入一定量的ΒΗΚ-21细胞悬液50μ1，置于37°C，5%C02培养箱中培养 24小时。后吸出培养液，加入PBS清洗并吸出后，每孔加入预冷的浓度为80 %的丙酬50μ1，4 °C固定30分钟，弃丙酬，待挥发干燥后每孔加入工作浓度的巧光标记抗狂犬病病毒核蛋白 抗体50μ1，37°C解育30分钟，弃掉液体后，用PBS洗板3次，弃液体，每孔加入80 %甘油50μ1， 置于巧光显微镜下观察，计算公式如下：
[0121] 标准品抓5〇 = lg(l/标准品低于50%巧光灶比例的稀释度)一(0.5-标准品低于 50%巧光灶比例孔的巧光灶百分比）/(高于50%巧光灶比例孔的巧光灶百分比一低于50% 巧光灶比例孔的巧光灶百分比）X Ig稀释倍数
[0122] 待测血清抓50 = lg(l/标准品低于50%巧光灶比例的稀释度)一(0.5-待测血清 低于50%巧光灶比例孔的巧光灶百分比)/(待测血清高于50%巧光灶比例孔的巧光灶百分 比一待测血清低于50%巧光灶比例孔的巧光灶百分比）X Ig稀释倍数
[0123] 待测血清效价=(标准品邸50-待测血清邸50)的倒数X标准品的效价
[0124] 待测血清效价单位为lU/ml。
[0125] 图6表示不同组别食蟹猴血清中和抗体的水平，可W看出1.OIU无针注射狂犬病疫 苗系统接种的中和抗体效价与肌肉注射2.5IU的抗体效价持平。
[01%] 3、系统免疫安全性评价--DRAIZE评分
[0127]在应用无针注射狂犬病疫苗系统免疫小型猪后的5天内，每天观察注射部位的皮 肤损伤情况。并根据损伤情况及程度进行评分。评分标准如图3所示。0分:没有红斑，未见水 肿；1分:轻微红斑，皮肤有轻微隆起，几乎难W察觉；2分:清晰红斑，可看到明显的隆起;3 分：中度红斑，隆起可见明显边缘;4分:重度红斑，且有结挪及深度损伤。图7表示免疫后不 同时间点，各注射方式对注射部位皮肤的损伤情况评分结果，无针皮内注射与有针肌肉注 射DRAIZE评分结果相似，均在注射后第1天和第2天出现偶见的表皮擦伤和轻微的红斑。且 在注射后第4天，不良反应均消失。由此表明，无针皮内注射与有针肌肉注射均具有良好的 安全性。
[0128] C、无针注射狂犬病疫苗系统免疫比格犬 [01巧]1、暴露后免疫
[0130] 18只3月龄比格犬(购自军事医学科学院实验动物中屯、），将CVS标准攻毒株(CVS, Kissling RE.Growth of rabies virus in non-nervous tissue culture[J].Proc Soc Exp Biol Med. 1958，98(2): 223-225.)接种于后肢肌肉，每只动物攻毒0.1ml。随机分为感 染对照组，免疫组1，免疫组2。并于攻毒暴露后化于暴露位置同侧进行后肢免疫，感染组接 种PBS。免疫程序为0，3，7，14，28天免疫五次。
[0131] 组1和组2,每组9只；将组1和组2又进一步分为a，b，cS个小组，每组3只比格犬;a, b，组的剂量分别为0.5IU上述二制备的狂犬病疫苗、1.0IU上述二制备的狂犬病疫苗、 2.5IU上述二制备的狂犬病疫苗；
[0132] 组1:采用分别灌装有0.5111、1.011]、2.511]狂犬病疫苗的无针注射安飯与无针注射 器(江苏丞宇米特医疗科技有限公司，产品型号:MP-0.1，MG-0.1)，进行免疫，在第0、3、7、 14、28天进行皮内免疫，免疫方式为W每剂0.1ml(可多点注射)的体积施用于大腿外侧区域 中，命名为无针0.5IU、无针1.0IU、无针2.5IU。
[01削组2:采用传统0.5mm*20mm为规格的有针注射器进行免疫，在第0、3、7、14、28天进 行皮内免疫0.5111、1.011]、2.511]上述二制备的狂犬病疫苗，免疫方式为^每剂0.51111的体积 施用于大腿外侧肌肉区域中，命名为有针0.5IU、有针1.0IU、有针2.5IU。
[0134] 2、暴露后中和抗体效价测定
[0135] 在各组动物免疫后收集血清，通过快速巧光灶抑制试验，测定待测血清效价。将待 测血清与标准品（由国家药品检定机构提供)各稀释度50μ1于96孔板中，加入中和用病毒 (CVS,Kissling RE.Growth of rabies virus in non-nervous tissue culture[J].Proc Soc Exp Biol Med. 1958,98(2) :223-225. )50μ1/孔，同时设置空白对照（100μΙ/孔DMEM培 养基），及中和用病毒对照（5化1/孔5%牛血清的与50μ1/孔中和用病毒），混匀后置于 37°C中和1小时，每孔加入一定量的ΒΗΚ-21细胞悬液50μ1，置于37°C，5%C02培养箱中培养 24小时。后吸出培养液，加入PBS清洗并吸出后，每孔加入预冷的浓度为80 %的丙酬50μ1，4 °C固定30分钟，弃丙酬，待挥发干燥后每孔加入工作浓度的巧光标记抗狂犬病病毒核蛋白 抗体50μ1，37°C解育30分钟，弃掉液体后，用PBS洗板3次，弃液体，每孔加入80 %甘油50μ1， 置于巧光显微镜下观察，计算公式如下：
[0136] 标准品抓5〇 = lg(l/标准品低于50%巧光灶比例的稀释度)一(0.5-标准品低于 50%巧光灶比例孔的巧光灶百分比）/(高于50%巧光灶比例孔的巧光灶百分比一低于50% 巧光灶比例孔的巧光灶百分比）X Ig稀释倍数
[0137] 待测血清抓50 = lg(l/标准品低于50%巧光灶比例的稀释度)一(0.5-待测血清 低于50%巧光灶比例孔的巧光灶百分比)/(待测血清高于50%巧光灶比例孔的巧光灶百分 比一待测血清低于50%巧光灶比例孔的巧光灶百分比）X Ig稀释倍数
[0138] 待测血清效价=(标准品邸50-待测血清邸50)的倒数X标准品的效价
[0139] 待测血清效价单位为lU/ml。
[0140] 结果见表1所示，不同组别暴露后免疫比格犬血清中和抗体的水平，可W看出PBS 对照组与有针0.5IU免疫组在7天内全部死亡，对暴露后比格犬无法产生良好的保护效果。 而在注射后第7天其他各免疫组均产生保护效果，在各个时间点各无针注射狂犬病疫苗系 统接种的中和抗体效价与肌肉注射2.5IU的抗体效价持平，均对暴露后的比格犬产生了良 好的保护效果。
[0141] 表1比格犬CVS肌内感染后血清抗体效价
[0142]
【主权项】
1. 无针注射狂犬病疫苗系统，为如下1)或2): 1) 所示的系统包括灌装有狂犬病疫苗的容器，所述狂犬病疫苗的灌装剂量小于等于该 狂犬病疫苗的标准剂量； 2) 所示的系统包括灌装狂犬病疫苗的容器和可读载体;所述可读载体记载内容包括： 所述狂犬病疫苗的无针注射剂量小于等于该狂犬病疫苗标准剂量。2. 根据权利要求1所述的系统，其特征在于:所述狂犬病疫苗的灌装剂量或无针注射剂 量均为1/5-1倍所述狂犬病疫苗标准剂量。3. 根据权利要求1或2所述的系统，其特征在于： 所述狂犬病疫苗的灌装剂量或无针注射剂量不大于2.5IU，且不为0; 和/或，所述狂犬病疫苗的灌装剂量或无针注射剂量具体为〇. 5IU-2.5IU; 和/或，所述狂犬病疫苗的灌装剂量或无针注射剂量具体为0.5IU-1IU; 和/或，所述狂犬病疫苗的灌装剂量或无针注射剂量具体为1IU。4. 根据权利要求1-3中任一所述的系统，其特征在于:所述狂犬病疫苗为灭活疫苗、减 毒活疫苗、重组VLP疫苗、基因工程疫苗、抗狂犬病毒血清、特异性免疫球蛋白等中的任何一 种或几种混合。5. 根据权利要求1 _4中任一所述的系统，其特征在于： 1)所示的系统或2)所示的系统均还包括与所述灌装有狂犬病疫苗的容器配套使用的 无针注射装置； 和/或，所述无针注射装置具体为无针注射器。6. 根据权利要求1-5所述的系统，其特征在于： 所述灌装有狂犬病疫苗的容器为灌装有疫苗的一次性无针注射安瓿，其包括： 预灌装疫苗的一管体， 一体设置于所述管体一端的一无针注射器接头， 由所述管体另一端滑动设置在所述管体内、并封闭所述管体的一动力推杆， 设置在所述无针注射器接头内的一喷射口， 易断地连接于所述动力推杆的前端的一止动杆， 可拆卸地设置在所述无针注射器接头上、并封闭所述喷射口的一密封帽，和 可拆卸地设置在所述动力推杆上、并与所述管体的入口相嵌合的一密封锁块； 其中，所述喷射口具有一止动槽，所述喷射口通过所述止动槽与所述管体内腔相连通； 所述止动杆与所述止动槽相配合。7. 根据权利要求6所述的系统，其特征在于： 所述动力推杆的直径与所述管体的内径一致;所述止动杆和止动槽为锥形;所述密封 帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上； 所述动力推杆上设置有密封锁块凹槽，所述密封锁块嵌合在所述密封锁块凹槽中，从 而可拆卸地安装在所述动力推杆上； 所述密封帽采用嵌合结构可拆卸地设置在所述无针注射器接头上;所述动力推杆上设 置有密封锁块凹槽，所述密封锁块嵌合在所述密封锁块凹槽中，从而可拆卸地安装在所述 动力推杆上； 所述管体、无针注射器接头、喷射口和止动槽一体制造而成。8. 根据权利要求1-7中任一所述的系统，其特征在于： 所述狂犬病疫苗的灌装体积为〇. 〇5-lml。9. 根据权利要求1-8中任一所述的系统，其特征在于： 所述可读载体记载内容还包括所述狂犬病疫苗的无针注射部位和所述狂犬病疫苗的 无针注射方式； 所述无针注射部位为皮内、皮下或肌肉； 所述无针注射方式为多次连续免疫或单次免疫。10. 权利要求1-9中任一所述系统在制备免疫动物或人产品中的应用； 所述动物具体为家畜，所述家畜尤其具体为猪或猴或狗； 或，一种对动物或人免疫狂犬疫苗的方法，为用权利要求1-9中任一所述系统进行免 疫，免疫剂量为权利要求1-9中任一所述系统中的无针注射剂量;免疫方式具体为多次连续 免疫或单次免疫;免疫部位具体为皮内、皮下或肌肉。
【文档编号】A61K39/205GK105999259SQ201610308474
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月11日
【发明人】任天宇, 王希良, 刘晓峰, 许振国, 刘洪 , 王鋮, 邢丽, 张良艳, 杨鹏辉, 段跃强, 赵忠鹏
【申请人】长春海基亚生物技术股份有限公司, 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所