专利名称：一种祛除面部红血丝的中药提取物及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种祛除面部红血丝的中药提取物及其制备方法与应用。
背景技术：
红血丝是面部毛细血管扩张性能差、角质层受损或一部分毛细血管位置表浅引起的面部现象，一丝丝纵横交错，如蜘蛛网般，分散性分布，严重者会连成片状，变成红脸。面部红血丝患者面部看上去比一般正常肤色红，有的仅仅是两侧颧部发红，边界呈圆形。这种皮肤薄而敏感，过冷、过热、情绪激动时脸色更红。严重者还会形成沉积性色斑。目前国内外治疗红血丝的手段多以激光治疗的物理方法为主，违背肌肤新陈代谢的自然规律，强制性的一次性祛除红血丝，造成毛细血管僵死，表层皮肤失去弹性，甚至可能产生结块、色素沉着，易复发；另一种手段是口服药物治疗方法，是药三分毒，中药的功效大多具有多面性，不能准确界定有效成分。随着社会的发展，生活水平的提高，人们对于化妆品的质量和性能要求也越来越高。人们希望出现一系列对人体健康无害，又具有美容保健作用的天然原料制备的护肤化妆品。利用中草药提取物作为美容护肤化妆品的添加剂， 具有药效稳定、持久、对皮肤作用温和、刺激性小、安全性高、疗效显著等特点。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有祛除面部红血丝功效的中药提取物及其制备方法。本发明所提供的中药提取物，是从下述中药组合物中提取得到的；所述中药组合物由大黄、槐米、黄芪和母菊按照质量份数比30-50 15-25 15-25 5_15的比例组成。所述中药组合物中大黄、槐米、黄芪和母菊的质量份数比可进一步为 45-50 20-25 15-20 5-10。所述中药提取物的制备方法如下将大黄、槐米、黄芪和母菊粉碎后按照上述质量份数比混合，得中药组合物；将所述中药组合物加丙二醇进行提取，得到所述中药提取物。所述提取过程中，所述中药组合物与丙二醇的配比可为Ig (10_15)ml，优选为 Ig IOml;所述提取为超声提取；所述超声提取的温度为60-80°C，时间为45-60分钟，超声频率为30-50KHZ ；所述大黄、槐米、黄芪和母菊粉碎后的粒度均为60-80目。本发明的方法还包括下述纯化的步骤提取结束后，过滤、离心、收集上清液，对所述上清液进行抽滤，收集滤液即为纯化后的中药提取物。在纯化步骤中，所述过滤采用纱布进行过滤，所述纱布为100-200目，优选200目； 所述离心的转速为4000-5000r/min，优选为4000r/min ；离心的时间为10-15分钟，优选10 分钟；所述抽滤中采用助滤剂硅藻土进行抽滤。本发明的再一个目的是提供上述中药提取物的应用。本发明所提供的中药提取物的应用是其在制备化妆品中的应用；尤其是在制备具有祛除面部红血丝功效化妆品中的应用。
含有本发明中药提取物的化妆品以及含有该中药提取物的组合物也属于本发明的保护范围。本发明按照中医“君臣佐使”组方思想，针对化学换肤刺激以及一些皮肤过敏所致的面部红血丝的祛除进行研制。不同于一般祛红血丝添加剂只从单方面作用，本发明深入研究红血丝形成机理，利用中医思想科学组方原则，在皮肤科学基础上从“增加角质层厚度、降低血管通透性、增强胶原蛋白和弹性蛋白的活性”三方面达到全方位防治效果，具体配伍如下君药降低毛细血管通透性，增强血管壁弹性——大黄；臣药凉血逐淤，恢复正常微循环——槐米；佐药增强胶原蛋白、弹性蛋白活力——黄芪；使药增强皮肤屏障——母菊。以丙二醇为提取剂，利用超声波在提取溶媒中产生“空化效应”和机械作用进行提取，其优点为提取温度低、提取效率高、提取时间短。以上中药植物大部分功效成分易溶于丙二醇，且丙二醇具有天然防腐功效，无需在添加剂中再加入其它防腐剂，减少其刺激性， 且丙二醇具有促透的功效，使得添加剂加入到化妆品中易于皮肤吸收本发明提供的制备中药提取物的方法，提取分离方法简便，所得产品纯度较高，产品质量有了很大的改进。所选用的中药组合物具有降低血管通透性、恢复微循环、调节免疫功能、促进皮肤代谢、增加胶原蛋白弹性蛋白等功效。对本发明得到的中药提取物进行功能测试，结果表明该提取物对Fltl酪氨酸激酶受体有很强的抑制作用，同时还具有增强皮肤水分含量的功效，以及降低细胞凋亡率的作用。
图1为本发明提供的中药提取物的生产工艺流程图；图2为不同浓度中药提取物对Fltl的抑制率比较；图3为中药提取物减少水分流失TEWL值的测定曲线；图4为中药提取物增加皮肤水分含量MMV值的测定曲线；图5为中药提取物与成纤维细胞培养不同时间对成纤维细胞凋亡率的影响。
具体实施例方式下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例1、制备中药提取物中药提取物的生产工艺流程图如图1所示，具体过程如下取料液比1 10，即88g大黄、槐米、黄芪、母菊的混合物(粒度均为60-80目)， 其中，大黄45克，槐米20克，黄芪17. 5克，母菊5. 5克，之后加入IOOOmL丙二醇；超声提取 45min(加盖保鲜膜，减少蒸发)(超声频率为50KHz)，温度为75。C ；停止加热，水循环冷却到40°C，200目纱布粗滤；4000r/min的转速下离心10分钟，取上清液；真空硅藻土滤饼抽滤上清液，收集抽滤液，即为中药提取物溶液(记为提取物质量浓度100%的提取物溶液)。之后根据需要，可进行后续操作，如洗桶，消毒，灌装，装箱，打码，入库。实施例2、制备中药提取物中药提取物的生产工艺流程图如图1所示，具体过程如下取料液比1 15，即105g大黄、槐米、黄芪、母菊的混合物(粒度均为60-80目)， 其中，大黄50克，槐米25克，黄芪20克，母菊10克，之后加入1500mL丙二醇；超声提取 60min(加盖保鲜膜，减少蒸发)(超声频率为30KHz)，温度为65°C ；停止加热，水循环冷却到40°C，200目纱布粗滤；4000r/min的转速下离心10分钟，取上清液；真空硅藻土滤饼抽滤上清液，收集抽滤液，即为中药提取物溶液(记为提取物浓度100%的提取物溶液)。实施例3、中药提取物的功能测定试验下述试验中所用的中药提取物溶液，是将实施例1制备得到的中药提取物溶液记为浓度为100%的提取物溶液，其它浓度的提取物溶液是将该溶液进行相应稀释得到的。1、降低毛细血管通透性能力测定该测定方法按照如下文献中的方法进行庄书斐，周彩红，钱静，钱幕， SHIBUYAMasabumi,叶其壮，新方法随机筛选血管内皮生长因子受体I激酶的抑制剂，中国药理学报，2002年第23期117-123。VEGF作为生长因子结合到它的受体Fltl的细胞表面部分，促使受体从休眠态转到活化态，发生自磷酸化，激活磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B (pl3k/Akt)的活性使得信号通路打开，进而发生一系列级联反应，因其内皮细胞分裂增生，血管内皮通透性增加，因此抑制Fltl活性可以降低毛细血管的通透性。PolvE4Y是一个谷氨酸和酪氨酸多肽聚合物，与Fltl结合发生磷酸化，PolyE4Y中被磷酸化的酪氨酸基团可以通过抗磷酸化单克隆抗体PY20来识别，然后辣根过氧化物酶HRP抗体作为第二抗体结合PY20，在辣根过氧化物酶作用下产生一种物质在450nm进行紫外吸收，加入Fltl抑制剂能够与Fltl竞争和底物结合，使得紫外吸收降低，抑制Fltl活性。实验方法100μ L polyE4Y 溶液(lmg/L，在 20mmol/L，ρΗ7· 5Tris · HC1，140mmol/ LNaCl溶液中稀释)添加到未经处理的96孔板中每一个孔中。4°C下溶液在孔板上放置一夜，弃去上清液。该板在4°C下进行储存并在7d内使用和被覆盖。添加Fltl酪氨酸激酶 (GST-F，100nmol/L)和抑制剂(中药提取物)(5g/L)到板上，并且在30°C下培养Ih0用 Tris/NaCl缓冲液清洗板后，室温下用5% BSA封闭30min。用含有0. Tween的Tris/ NaCl缓冲液冲洗孔板，PY20 (每个孔100 μ L，20 μ g/L)添加到每个板孔中，在室温下培养池。冲洗该板三次后，添加HRP-IgG (每板孔100 μ L，40 μ g/L)，然后在室温下培养lh。最后该板用TBST缓冲液冲洗四次。显像缓冲液(100 μ L，柠檬酸缓冲液0. lmol/L, ρΗ5· 5， H2O2L 3mmol/L, 0-邻苯二胺10mmol/L)添加到每个板孔中。颜色变化后用100 μ L，lmol/L H2SO4终止反应。在492nm下酶标仪进行检测。实验结果用Curve Expertl. 3软件做双Log 二次拟合曲线。阳性对照组为酪氨酸激酶。实验结果见图2。由图可知，提取物在的浓度抑制率最高达到91%以上，而随着浓度的增加抑制率略有降低。说明本发明提供的中药提取物具有非常强的抑制Fltl酪氨酸激酶受体的功效。2、修复皮肤屏障保湿测定该方法按照如下文献提供进行温竹，黄正梅，高艳玲，化妆品保湿功效评价，日用化学品科学，2009年第12期:26-28.皮肤水分流失TEffL对评估皮肤水分保护层的功能是非常重要的参数，在国际上已经得到了广泛的认可。皮肤水分保护层越完好，皮肤角质层屏障功能越强，水分的含量就会越高，皮肤水分流失TEflfL的数值也就越低。MMV (moisture measurement value)测定皮肤的水分含量，MMV值越大皮肤角质层水分含量越高。实验方法(1)测试环境温度21 士 1°C，湿度50士5%，并且进行实时动态监测。(2)测前准备用水清洗双手手臂内侧，擦干后标记受测部位，同一手臂可同时标记多个区域，区域间隔1cm，测试产品和空白对照均随机分布在左右手臂上，从左臂至右臂依次编号1-10 号，11号不涂抹样品为空白参照。(3)测试所采用的中药提取物溶液的质量浓度为5%。对三十名志愿者进行人体贴敷实验。清洗二十分钟后测试敷面膜前水分含量值， 依次贴敷分别载有0. 2ml 1-10号样品(中药提取物质量浓度5% )液面膜，十五分钟后揭去面膜，用湿纸巾擦拭残留在皮肤表面的样品液，再用干纸巾擦干皮肤表面水分，待皮肤吸收二十分钟后，再次检测测试者贴敷处水分含量值(MMV值)和TEffL值。对皮肤水分含量的测量结果进行统计学分析比较，采用t检验方法进行显著性分析检验，其中ρ < 0. 05表示有显著性差异。估计均数的抽样误差可计算该组数据的标准差或标准误。当个别数据偏差较大时，可根据t检验剔除标准进行筛选，如符合标准则可剔除；当剔除后的受试者人数少于30人时，应增加受试者人数直至符合要求。该实验结果如图3、4所示，由图可知，5%的中药提取物具有明显降低水分含量散失的功效。5%浓度的中药提取物具有增强皮肤水分含量的功效，恢复受损角质层，修复调整皮肤的正常厚度，使其最大程度的发挥生理功能，可以促进皮肤保持健康的、自然的状态。3、MTT法检测成纤维细胞检测该方法按照如下文献中的方法进行王曦.黄芪甲苷对人皱纹与非皱纹皮肤成纤维细胞生物学特性的影响[D].四川四川大学，2005. 4。成纤维细胞是皮肤真皮中的主体细胞成分，它与自身分泌的胶原纤维，弹性纤维及基质成分一同构成了真皮的主体。通过体外培养人皮肤成纤维细胞，采用MTT (四甲基偶氮哇盐)法检测中药提取物对体外培养的成纤维细胞生物学特性的影响，中药提取物中所含有的黄芪多糖，具有促进细胞生长的功效。实验方法(1)成纤维细胞培养采用组织块法(explant culture)。用D-Hanks液将新鲜皮肤标本漂洗，剪去表皮和皮下组织。将真皮组织剪切成0. 5 Imm3组织块放于培养瓶，倒置。加入适量培养液(DMEM培养液)，在37°C、5% CO2的饱和湿度条件下孵育2 3小时， 翻转培养瓶，上述条件下，每周更换培养液两次。待原代培养液中长出的成纤维细胞融合， 用0. 25%胰蛋白酶液消化细胞，进行传代培养。
(2)MTT法测成纤维细胞增殖取处于对数生长期的皮肤成纤维细胞，用含EDAT的胰蛋白酶消化，再用含10%新生小牛血清的DMEM培养液吹打培养瓶底部，制成单细胞悬液。苔盼兰染色计数，接种于96孔培养板中。次日取出细胞板，试验组向细胞板中加入 20 μ 1质量浓度为的中药提取液；对照组向细胞板中加入20 μ 1培养液。分别于培养时间结束前4 他取出培养板，依次在每孔中加入MTT溶液，继续孵育至培养结束。弃去孔中培养上清液，再于每孔加入DMSO (二甲基亚砜)。在酶联免疫检测仪上选择570nm波长，测定各孔光吸收值(0D值)。细胞凋亡率=(处理组OD值-对照组OD值)/对照组OD值X 100 %该实验结果如图5所示，由图可知，加入1 %的中药提取物，分别在Mh、72h、120h 对细胞凋亡率进行测定，在120h后凋亡率由67. 3%降低到28. 8%。
权利要求
1.一种中药提取物，是从下述中药组合物中提取得到的；所述中药组合物由大黄、槐米、黄芪和母菊按照质量份数比30-50 15-25 15-25 5_15的比例组成。
2.根据权利要求1所述的中药提取物，其特征在于所述中药组合物中大黄、槐米、黄芪和母菊的质量份数比为45-50 20-25 15-20 5_10。
3.根据权利要求1或2所述的中药提取物，其特征在于所述中药提取物是按照权利要求4-7中任一项所述方法制备得到的。
4.一种制备权利要求1或2所述中药提取物的方法，包括下述步骤将大黄、槐米、黄芪和母菊粉碎后按照权利要求1或2所述的质量份数比混合，得到中药组合物；将所述中药组合物用丙二醇进行提取，得到所述中药提取物。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述提取过程中，所述中药组合物与丙二醇的配比为Ig (10-15)ml，优选为Ig IOml ；所述提取为超声提取；所述超声提取的温度为60-80°C，时间为45-60分钟，超声频率为30_50KHz ；所述大黄、槐米、黄芪和母菊粉碎后的粒度均为60-80目。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于所述方法还包括下述纯化的步骤提取结束后，过滤、离心、收集上清液，对所述上清液进行抽滤，收集滤液即为纯化后的中药提取物。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述过滤采用纱布进行过滤，所述纱布为 100-200目，优选200目；所述离心的转速为4000-5000r/min，优选为4000r/min ；离心的时间为10-15分钟，优选10分钟；所述抽滤中采用助滤剂硅藻土进行抽滤。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的中药提取物在制备化妆品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于所述化妆品为具有祛除面部红血丝功效的化妆品。
10.一种具有祛除面部红血丝功效的化妆品，其特征在于所述化妆品含有权利要求 1-3中任一项所述的中药提取物。
全文摘要
本发明公开了一种具有祛除面部红血丝功效的中药提取物及其制备方法与应用。该中药提取物是从下述中药组合物中提取得到的；所述中药组合物由大黄、槐米、黄芪和母菊按照质量份数比30-50∶15-25∶15-25∶5-15的比例组成。制备方法如下将大黄、槐米、黄芪和母菊粉碎后按比例混合，加入提取剂丙二醇浸润，超声提取，冷却，过滤、离心，抽滤，取上清液，得到所述中药提取物。本发明提供的中药提取物的提取分离方法简便，所得产品纯度较高，产品质量有了很大的改进。所选用的中药组合物具有降低血管通透性、恢复微循环、调节免疫功能、促进皮肤代谢、增加胶原蛋白弹性蛋白等功效，故其提取物可作为祛除面部红血丝添加剂。
文档编号A61Q19/00GK102397175SQ20101028099
公开日2012年4月4日 申请日期2010年9月10日 优先权日2010年9月10日
发明者何聪芬, 刘文婷, 王领, 董银卯, 赵华 申请人:北京工商大学