专利名称：：一种青稞肽及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及生物领域，特别是植物多肽。二
背景技术：
：生物活性肽是由20种编码氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称。活性肽具有多种人体代谢和生理调节功能:有促进免疫、激素调节、降血压、降血脂等作用，是当前国际药学和食品界热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。目前有些活性多肽已成为疗效显著的临床药物，如胰岛素、脑活素等，但是尽管人们在动物体内发现了许多重要的活性多肽，但对植物中存在的天然活性肽的研究却比较少。我国是植物资源大国，特别是高原植物中的青稞具有多种保健功能，种植潜力巨大。据国内外研究证实，青稞中含有的小分子肽具有突出的降血脂、调剂血糖、排毒清肠和防癌作用的生理功效成分，而且其功效要比从大豆、玉米中提取出的植物肽要好。在过去由于青稞产量不低,但青稞只能制成糌粑和青稞酒,而且都是家庭式加工生产，每年有大量的青稞无法转化，导致农民增产不增收，青稞的附加值体现不出。
发明内容本发明的目的是克服上述不足问题，提供一种青稞肽，具有保健功能，优化青稞资源的利用，另外还提供其制备方法，方法简单，易操作、工业化生产。本发明为实现上述目的所采用的技术方案是一种青稞肽，其为分子量100~2000D。本发明青稞肽的制备方法(1)制备青稞蛋白粉将青稞磨成粉，细度《lmm;取单位青稞粉，加入0.5mol/L的Na0H溶液，料液质量比为1:15-1:30，调pH值至9.5-10.0，温度50°C-60°C,常压的条件下，搅拌1-1.5小时；将混合液在4000-4500r/min的条件下，离心45-55分钟；取离心后的上清液，加入0.5mol/L的HC1溶液，缓慢将上清液的pH值调至4.0-4.5;将调后的混合液在4000-4500r/min的条件下，离心45-55分钟；离心后将上清液去除，将沉淀物水洗2次，水温15-25°C，pH值至中性；将水洗后的溶液进行喷雾干燥，进风温度为150°C-160°C，喷雾后得青稞蛋白粉；(2)青稞蛋白粉酶解用水将(1)制得的青稞蛋白粉配置成质量浓度4-6%的溶液，加入酶进行酶解，酶解过程的pH通过滴加0.5mol/L的NaOH或HCl溶液保持恒定，酶解时间为4-5小时；酶解后温度9(TC-95"C下水浴10-15分钟进行酶灭活；灭活后，将酶解液进行超滤;超滤后将溶液进行喷雾干燥，进风温度为150°C-160°C，制得青稞多肽粉。所述青稞蛋白粉酶解采用的酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶(trypsin)、碱性蛋白酶(alcalase)、胃蛋白酶(p印sin)、风味蛋白酶(Flavourzyme)、中性蛋白酶(Neutrase)、胰酶(Pancreatin)或复合蛋白酶(Protamex)。所述采用木瓜蛋白酶酶解时，加酶量为2%，酶解温度为6(TC，溶液pH值为7.5。所述采用胰蛋白酶酶解时，加酶量为2%，酶解温度为45。C，溶液pH值为8。所述采用碱性蛋白酶酶解时，加酶量为2%，酶解温度为5(TC，溶液pH值为7.5。所述采用胃蛋白酶酶解时，加酶量为2%，酶解温度为4(TC，溶液pH值为3。所述采用风味蛋白酶、中性蛋白酶或复合蛋白酶酶解时，加酶量为4%，酶解温度为5(TC，溶液pH值为7。所述采用胰酶酶解时，加酶量为4%，酶解温度为50"C，溶液pH值为8。本发明随着分离鉴定技术的发展和多肽蛋白质研究的深入，从青稞中提取出具有保健功能的肽产品，是优化青稞资源的利用，改善高原地区经济发展的产业方向。本发明制备方法简单易操作，实现工业化生产，满足市场发展需求。四图1为本发明青稞肽的测序报告。五具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不限于具体实施例。实施例1按照下述方法制备青稞肽，具体制备方法为(1)制备青稞蛋白粉将青稞磨成粉，细度《lmm;取单位青稞粉，加入0.5mol/L的NaOH溶液，料液比为1:15-1:30，调pH值至9.5-10.0，温度5(TC，常压的条件下，搅拌l小时；将混合液在4000r/min的条件下，离心45分钟；取离心后的上清液，加入0.5mol/L的HC1溶液，缓慢将上清液的pH值调至4.0-4.5;将调后的混合液在4000r/min的条件下，离心45分钟；离心后将上清液去除，将沉淀物水洗2次，水温15-25'C，pH值至中性；将水洗后的溶液进行喷雾干燥，进风温度为15(TC，喷雾后得青稞蛋白粉；(2)青稞蛋白粉酶解用水将(1)制得的青稞蛋白粉配置成质量浓度4-6%的溶液，加入青稞蛋白粉溶液重量2%的木瓜蛋白酶，温度为6(TC进行酶解，酶解过程的pH通过滴加0.5mol/L的NaOH或HC1溶液保持恒定值为7.5，酶解时间为4小时；酶解后温度90°C下水浴10-15分钟进行酶灭活；灭活后，将酶解液进行超滤；超滤后将溶液进行喷雾干燥，进风温度为15(TC，制得青稞多肽粉。实施例2-8按照实施例1所述的制备方法制备青稞多肽粉，所用的酶及配比条件如下表:<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>实施例1-8所得产品理化指标:<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>青稞肽对血压降低的功能评定:实验方法取80uL5mmol/LHHL溶液(pH8.3，含O.3mol/LNaCl)与40uLACE抑制肽混合，37。C水浴预热5min后，加入10uL0.1U/mLACE溶液，继续37'C水浴30min。随后加入200yLlmol/LHC1溶液终止反应。再加入l.2mL乙酸乙酯均匀混合15s，以萃取反应体系中的马尿酸。离心(1000r/min)lOmin后取出O.9mL酯层溶液转入另一试管中，80'C烘干，并重新溶于2mL去离子水中，在228nm处测定吸光值。ACE抑制率如下式计算<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>式中ODa为ACE及ACE抑制肽都存在条件下的吸光度；ODb为不存在ACE抑制肽条件下的吸光度；ODc为ACE不参与反应条件下的吸光度。经测定，该青稞肽对ACE的抑制率为60-90%。血管紧张素-I转换酶(ACE)，是动物肺血管内皮细胞分泌的，与调节末梢血压的凝乳酶血管紧张素系统有关，它可以切除血管紧张素I的羧端His-Leu，形成至今已知升高血压活性最强的多肽-血管紧张素II。肾素会将血管紧张素I转化为血管紧张素II，血管紧张素II是一种力量强大的激素，能使血管收縮，血压上升；血管紧张素II还可以刺激醛酮的分泌，而这种激素会使人体留住水分和Na，使血压升得更高。降血压肽可以干扰肾素的作用，可以一定程度上抑制ACE的这种活性，所以可以降血压。降血压肽亦能阻止血管舒缓素-激肽系统中产生的缓激肽的分解，缓激肽是血液中的一种物质，可以使血管舒张，血压下降。抗氧化、淬灭自由基、促钙吸收、促矿物质吸收、通过抑制ACE而达到降低血压的效果表l:抗氧化性的结果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表2:淬灭自由基研究结果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>权利要求1、一种青稞肽，其特征是其分子量为100～2000D。2、青稞肽的制备方法，其特征是具体工艺为-(1)制备青稞蛋白粉将青稞磨成粉，细度《lmm;取单位青稞粉，加入0.5mol/L的NaOH溶液，料液质量比为1:15-1:30，调pH值至9.5-10.0，温度50。C-6(TC，常压的条件下，搅拌1-1.5小时；将混合液在4000-4500r/min的条件下，离心45-55分钟；取离心后的上清液，加入0.5mol/L的HCl溶液，缓慢将上清液的pH值调至4.0-4.5;将调后的混合液在4000-4500r/min的条件下，离心45-55分钟;离心后将上清液去除，将沉淀物水洗2次,水温15-25°C，pH值至中性；将水洗后的溶液进行喷雾干燥，进风温度为15(TC-16(TC，喷雾后得青稞蛋白粉；(2)青稞蛋白粉酶解用水将(1)制得的青稞蛋白粉配置成质量浓度4_6%的溶液，加入酶进行酶解，酶解过程的pH通过滴加0.5mol/L的NaOH或HCl溶液保持恒定，酶解时间为4-5小时；酶解后温度90°C-95t:下水浴10-15分钟进行酶灭活；灭活后，将酶解液进行超滤；超滤后将溶液进行喷雾干燥，进风温度为150°C-160°C，制得青稞多肽粉。3、根据权利要求2所述的青稞肽的制备方法，其特征是青稞蛋白粉酶解采用的酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶(trypsin)、碱性蛋白酶(alcalase)、胃蛋白酶(p印sin)、风味蛋白酶(Flavourzyme)、中性蛋白酶(Neutrase)、胰酶(Pancreatin)或复合蛋白酶(Protamex)o4、根据权利要求2或3所述的青稞肽的制备方法，其特征是-采用木瓜蛋白酶酶解时，加酶量为2%，酶解温度为60°C，溶液pH值为7.5。5、根据权利要求2或3所述的青稞肽的制备方法，其特征是采用胰蛋白酶酶解时，加酶量为2%，酶解温度为45'C，溶液pH值为8。6、根据权利要求2或3所述的青稞肽的制备方法，其特征是采用碱性蛋白酶酶解时，加酶量为2%，酶解温度为50°C，溶液pH值为7.5。7、根据权利要求2或3所述的青稞肽的制备方法，其特征是述采用胃蛋白酶酶解时，加酶量为2%，酶解温度为40°C，溶液pH值为3。8、根据权利要求2或3所述的青稞肽的制备方法，其特征是采用风味蛋白酶、中性蛋白酶或复合蛋白酶酶解时，加酶量为4%，酶解温度为5(TC，溶液pH值为7。9、根据权利要求2或3所述的青稞肽的制备方法，其特征是采用胰酶酶解时，加酶量为4%，酶解温度为50。C，溶液pH值为8。全文摘要本发明涉及生物领域，特别是植物多肽。一种青稞肽，其分子量为100～2000D。本发明随着分离鉴定技术的发展和多肽蛋白质研究的深入，从青稞中提取出具有保健功能的肽产品，是优化青稞资源的利用，改善高原地区经济发展的产业方向。本发明制备方法简单易操作，实现工业化生产，满足市场发展需求。文档编号C07K7/08GK101418038SQ20081022882公开日2009年4月29日申请日期2008年11月14日优先权日2008年11月14日发明者华子昂申请人:华子昂