专利名称：胰高血糖素类似物的制作方法
技术领域：
本发明涉及胰高血糖素类似物及它们的医疗用途(例如在治疗食物摄取过量、肥胖症和超重中的医疗用途)。
背景技术：
前胰高血糖素原(pr印roglucagon)是158个氨基酸的前体多肽，其在组织中被差异性加工而形成多种结构上相关的胰高血糖素原(proglucagon)衍生肽，包括胰高血糖素(Glu)、胰高血糖素样肽-I(GLP-I)、胰高血糖素样肽-2 (GLP-2)和胃泌酸调节素 (oxyntomodulin,OXM)。这些分子参与多种生理功能，包括葡萄糖体内平衡、胰岛素分泌、胃排空和肠生长以及食物摄取调节。胰高血糖素是四个氨基酸的肽，其对应于前胰高血糖素原的53至81位氨基酸， 并具有如下序列:His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Se r-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr(SEQ ID NO :1)。胃泌酸调节素(OXM)是37个氨基酸的肽，其包含胰高血糖素完整的四个氨基酸序列以及八肽羧基端延伸(前胰高血糖素原的82至89位氨基酸，其序列为Lys-Arg-Asn-Arg-Asn-Asn-IIe-Al a (SEQ ID NO :2)，并称为“间插肽 l(intervening peptide 1) ” 或 IP-1 ；因此，人胃泌酸调节素的完整序列为 His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-S er-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-Lys-Arg-Asn-Arg-Asn-As n-IIe-Ala(SEQ ID NO :3))。GLP-1的主要生物活性片段作为30个氨基酸的、对应于前胰高血糖素原之98至127位氨基酸的C端酰胺化肽而产生。胰高血糖素通过结合肝细胞上的胰高血糖素受体来帮助维持血液中的葡萄糖水平，其通过糖原分解使肝释放以糖原形式储存的葡萄糖来实现。随着这些储存的耗尽，胰高血糖素刺激肝通过糖异生合成额外的葡萄糖。这些葡萄糖释放进血流中，从而防止低血糖症的发生。OXM响应于食物摄入而释放到血液中，并与食物卡路里含量成比例。已显示OXM在人中抑制食欲并抑制食物摄取(Cohen 等，Journal of Endocrinology and Metabolism, 88，4696-4701，2003 ；WO 2003/022304)。除了与GLP-I类似的那些食欲抑制作用以外，OXM 一定还通过另一种机制影响体重，这是因为用胃泌酸调节素处理的大鼠与对饲(pair-fed) 大鼠相比显示更轻的体重(Bloom, Endocrinology 2004,145, 2687) 用OXM处理肥胖啮齿类动物还提高了它们的葡萄糖耐受(Parlevliet等，Am J Physiol Endocrinol Metab, 294，E142-7，2008)并抑制体重增加(W02003/022304)。OXM活化胰高血糖素受体和GLP-I受体，其对胰高血糖素受体的效力比对GLP-I 受体的效力高2倍，但比天然胰高血糖素和GLP-I对它们各自受体的效力低。人胰高血糖素也能活化两种受体，但相对于GLP-I受体来说对胰高血糖素受体有强偏好性。另一方面， GLP-I不能活化胰高血糖素受体。胃泌酸调节素的作用机制尚不完全清楚。尤其是，不了解激素作用是通过GLP-I受体和胰高血糖素受体介导，还是通过一种或多种尚未鉴定出的受体介导
已显示另一些肽结合并活化胰高血糖素受体和GLP-I受体(Hjort等，Journal of Biological Chemistry, 269, 30121-30124,1994)以及抑制体重增加和减少食物摄取(W0 2006/134340 ；WO 2007/100535 ；WO 2008/101017)。肥胖症被认为是日益增多的全球性健康问题，并且其与多种疾病(特别是心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)、2型糖尿病、阻塞性睡眠呼吸暂停、某些类型的癌症和骨关节炎)相关。因此，已发现肥胖症减少预期寿命。根据世界卫生组织所作的2005预测，全球有4亿成年人(年龄> 15岁)被划归为肥胖。在美国，目前认为肥胖症是仅次于吸烟的可预防性死亡之第二大原因。肥胖症的增多导致糖尿病的增多，约90%的患2型糖尿病的人群可划归为肥胖。 全球有2亿4千6百万人患有糖尿病，预计到2025年将会有3亿8千万人患糖尿病。许多人还有另外的心血管风险因素，包括高/异常LDL和甘油三酯以及低HDL。与未患糖尿病的人相比，患有糖尿病的人发生心血管疾病的可能性为前者的2至 4倍，使其成为最常见的糖尿病并发症。在患有糖尿病的人中，心血管疾病导致约50%的死亡。与未患糖尿病的年轻成年人相比，患有糖尿病的年轻成年人患冠心病(CHD)的几率高 12 40倍并极易发生和流行肥胖症和2型糖尿病，这些代谢疾病相关的发病率和死亡率突显了对有效治疗选择的医疗需要。因此，非常需要通过医疗手段治疗肥胖症和提高葡萄糖耐受。发明概述本发明提供了具有式R1-X-Z-R2的化合物或其可药用盐，其中R1为H、CV4烷基、乙酰基、甲酰基、苯甲酰基或三氟乙酰基；R2 为 OH 或 NH2;X为具有式I的肽His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Arg-A rg-Ala-Lys-Asp-Phe-IIe-Glu-Trp-Leu-Leu-Ser-Ala(SEQ ID NO 4)或在至多4个的以下位置处与式I不同；如果与式I不同，则第2位残基选自D_kr、Aib ；第16 位残基选自 Jer、Asp、Lys、Arg ；第18位残基选自Ala ；第20 位残基选自Gln、Arg、Glu、Asp ；第21位残基为Glu ；第23位残基为Val ；第24 位残基选自Gln、Asp、Lys、Arg、Ala ；第27 位残基选自Met、Cys、Lys ；第28 位残基选自Asn、Arg、Lys、Ala、Glu、Asp ；以及第四位残基选自Ilir、Arg ；并且Z不存在或者为具有1 20个选自Ala、Leu、Ser, Thr, Tyr, Cys, Glu、Lys、 Arg、Dbu, Dpr和Orn之氨基酸单元的序列。在一些实施方案中，X在至多4个的以下位置处与式I不同；如果与式I不同，则第2位残基选自D_kr、Aib ；
第16 位残基选自=Ser, Asp、Lys ；第20 位残基选自Gln、Arg、Glu ；第27位残基选自Met、Cys、Lys ；以及第28 位残基选自Asn、Arg、Ala。在一些实施方案中，X可在至多3个的以下位置处与式I不同；如果与式I不同， 则第2位残基选自D-kr、Aib ；第16位残基选自=Ser, Asp、Lys ；以及第20 位残基选自Gln、Arg、Glu0在一些替代性实施方案中，X可在至多4个的以下位置处与式I不同；如果与式I 不同，则第2位残基选自D_kr、Aib ；第16 位残基选自=Ser, Asp、Lys ；第18位残基为Ala ；以及第20 位残基选自Gln、Arg、Glu0在另一些替代性实施方案中，X可在至多4个的以下位置处与式I不同；如果与式 I不同，则第23位残基为Val ；第24 位残基选自Gln、Asp、Lys、Arg、Ala ；第27位残基选自Met、Cys、Lys ；以及第28 位残基选自Asn、Arg、Ala。在上述任一实施方案中，第16位和第20位残基可形成盐桥。合适的残基对的实例包括16-Asp,20-Lys ；16-Glu,20-Lys ；16-Asp,20-Arg ；16-Glu,20-Arg ；16-Lys,20-Asp ；16-Arg, 20-Asp ；16-Lys,20-Glu ；16-Arg, 20-Glu.另外地或作为替代地，第20位和第M位残基可形成盐桥。合适的残基对的实例包括20-Asp,24-Lys ；20-Glu,24-Lys ；20-Asp,24-Arg ；20-Glu,24-Arg ；20-Lys,24-Asp ；20-Arg,24—Asp ；20-Lys,24-Glu ； 20-Arg,24-Glu.
在与上述定义保持-
項文的同时，可期望X包含以下的一个或多个残基组
20-Lys,24-Glu ； 20-Lys,23-Ile,24-Glu ； 16-Glu,20-Lys,24-Glu ； 16-Glu,20-Lys ； 16-Glu，20-Lys，29-Ala ； 16-Glu,20-Lys,23-Ile，24-Glu ； 16-Glu,20-Lys,23-Ile，24-Glu,29-Ala 16-Glu,20-Lys,24-Glu,29-Ala ； 20-Lys,23-Ile,24-Glu,29-Ala ； 27-Leu,28-Ser,29-Ala ； 29-Ala16-Ser ；
20-Gln ；
23-Val ；
24-Gln ；
16-Ser,20-Gln ；
16-Asp,20-Arg,24-Asp ；
16-Lys,20-Glu ；
24-Arg ；或
28-Arg.
例如，X可具有以下序列
HSQGTFTSDYSKYLDERRAQDFIEffLLSA(SEQIDNO5)
HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFVEffLLSA(SEQIDNO6)
HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIQffLLSA(SEQIDNO7)
HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFIEffLLSA (SEQIDNO8)
HSQGTFTSDYSKYLDDRRARDFIDffLLSA(SEQIDNO9)
HSQGTFTSDYSKYLDKRRAEDFIKffLLSA(SEQIDNO10)
HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIRffLLSA(SEQIDNO11)
HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIEffLLRA(SEQIDNO12)
HSQGTFTSDYSKYLDSRRAKDFIEffLLSA (SEQIDNO13)
HSQGTFTSDYSKYLDERAAKDFIEffLLSA(SEQIDNO14)
HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIDffLLSA(SEQIDNO15)
HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIEffLLAA(SEQIDNO16)
HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIEffLLSA(SEQIDNO17)
或
本发明还提供了编码本发明化合物的核酸(其可为DNA或RNA)、包含该核酸的表达载体以及包含该核酸或表达载体的宿主细胞。
在另一方面中，本发明提供了一种组合物，其包含与载体混合的本文定义之胰高血糖素肽类似物或者其盐或衍生物、编码该胰高血糖素肽类似物的核酸、包含该核酸的表达载体或包含该核酸或表达载体的宿主细胞。在一些优选的实施方案中，所述组合物为可药用组合物并且所述载体为可药用载体。胰高血糖素肽类似物可以是胰高血糖素类似物的可药用酸加成盐。所述化合物用于防止体重增加或促进体重减轻。“防止”是指与不进行治疗相比抑制或减少体重增加，而不必然指体重增加的完全停止。所述肽可引起食物摄取的减少和 /或能量消耗的增加，从而导致对体重的可见作用。不依赖于其对体重的作用，本发明化合物可对葡萄糖耐受和循环胆固醇水平具有有益作用(能降低循环LDL水平并提高HDL/LDL 比值)。因此，本发明化合物可用于直接或间接治疗由体重超重引起或以其为特征的任何病症，例如治疗和/或预防肥胖症、病态肥胖、肥胖相关炎症、肥胖相关胆囊疾病、肥胖引起的睡眠呼吸暂停。本发明化合物还可用于治疗代谢综合征、胰岛素抗性、葡萄糖不耐受、2型糖尿病、高血压、致动脉粥样化血脂异常(atherogenic dyslipidimia)、动脉粥样硬化、动脉硬化、冠心病或中风。它们在这些病症中的作用可由它们对体重的作用引起或与其有关，或者可不依赖于其对体重的作用。因此，本发明提供了本发明化合物治疗有此需要之个体中上述病症的用途。本发明还提供了用于医学治疗方法中的本发明化合物，特别是用于治疗上述病症的方法中的本发明化合物。本发明还提供了本发明化合物在制备用于治疗上述病症之药物中的用途。如所述地，本发明还包括含有上述核酸序列(任选地与指导其表达的序列相组合)的表达载体以及包含所述表达载体的宿主细胞。优选地，所述宿主细胞能表达并分泌本发明化合物。在又一方面中，本发明提供了产生所述化合物的方法，该方法包括在适于所述化合物表达的条件下培养所述宿主细胞并纯化由此产生的化合物。本发明还提供了用于医学治疗方法中的本发明之核酸、本发明之表达载体或能表达和分泌本发明化合物的宿主细胞。应理解，所述核酸、表达载体和宿主细胞可用于治疗上述可使用所述化合物本身治疗的任何疾病。因此，除非上下文中另外指出，涉及包含本发明化合物的治疗组合物、本发明化合物的施用或其任何治疗用途的内容应解释为涵盖本发明核酸、表达载体或宿主细胞的等同用途。
图1.图1. ZP2663对db/db小鼠口服葡萄糖耐受的作用。db/db小鼠被禁食过夜并在即将要施用(腹膜内)运载体(vehicle)或 ZP2663 (45nmol/kg)之前采集初始血样(禁食血液葡萄糖水平)。15分钟后给与口服剂量的葡萄糖(5ml/kg中的lg/kg)，并在t = 30分钟、t = 60分钟、t = 120分钟和t = 240 分钟时测量BG水平。针对每个时间点计算与基线(t = 0)的差异，并测定AUCch24c1M值。 ZP2663显著提高糖尿病db/db小鼠的葡萄糖耐受。图2. ZP2663对小鼠食物摄取的作用。多个经分类小鼠组(按照体重分类)被禁食过夜，并用PYY3_36(30nmol/kg)(内部阳性对照)、胰高血糖素(500nmol/kg)、ZP2663 (500nmol/kg)或运载体处理。1小时后，将预先称重的食物施与小鼠，通过在1小时后称量剩余食物来测量食物摄取并相对于体重进行表示(mg食物/g体重)。与根据先前发现所预期的一致，PYY (3-36)显示出食欲抑制作用。ZP^63(500nmOl/kg)在注射肽后第1小时内显著降低了食物摄取。胰高血糖素对食物摄取无影响。图3.用ZP^63处理28天对饮食诱导肥胖(diet induced obese, DI0)小鼠的体重增加的作用。用高脂饮食(high fat diet，HFD)饲喂C57B1/6雄性小鼠并用 ZP2663(500nmol/kg) (ZP2663)或运载体处理(每日两次；皮下)。按照与DIO组相同的治疗方案用运载体(鼠食)处理饲喂常规鼠食的非肥胖对照组。每天记录体重，并利用其在整个研究中施用经体重修正之剂量的肽。ZP2663将所增加体重降低至与用鼠食饲喂组中所观察到的相似水平图4.用Glu-GLP-I双效激动剂处理DIO小鼠4周(每日两次)对LDL胆固醇浓度的作用。OXM (P = 0. 002)和ZP^63(P = 0. 0001)的作用与运载体组具有统计学显著差
已图5.用GlU-GLP-I双效激动剂处理DIO小鼠4周(每日两次)对HDL/LDL比值的作用。用于OXM和exendin-4的运载体为PBS (pH 7. 4)，用于ZP^63的运载体为醋酸盐 (pH 5. 0)。OXM(p = 0. 002)和ZP2663 (p = 0. 0003)的作用与运载体组具有统计学显著差已升。发明详述在本说明书通篇中，采用常规的单字母和三字母编码天然氨基酸，并采用通常接受的三字母编码其它氨基酸(如Aib ( α -氨基异丁酸)、0rn (鸟氨酸),Dbu (2,4- 二氨基丁酸)和Dpr (2，3-二氨基丙酸))。术语“本源(native)胰高血糖素”是指具有如下序列的人本源胰高血糖素H-His -Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-OH(SEQ ID NO :1)。术语“胃泌酸调节素”和“0ΧΜ”是指具有如下序列的人本源胃泌酸调节素=H-His -Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-Lys-Arg-Asn-Arg-Asn-Asn-IIe-Ala-OH(SEQ ID NO 3)。本发明提供了上述化合物。为了避免疑义，在本文提供的定义中，X的序列通常仅在所示允许变化的位置处与式I有差异。可认为序列X中的氨基酸以常规的N端到C端方向从1至四位连续编号。因此，应对X中的“位置”作相应的解释，如同应对人本源胰高血糖素和其它分子中的位置作相应解释一样。本发明化合物可在肽序列X中具有一个或多个分子内桥。每个这样的桥在X的两个氨基酸残基的侧链之间形成，所述两个氨基酸残基通常被χ线性序列中三个氨基酸所间隔(即，在氨基酸A和氨基酸A+4之间形成)。更特别地，所述桥可在残基对12和16、16和20、17和21,20和24或者24和28 的侧链之间形成。两个侧链可通过离子相互作用或通过共价键彼此连接。因此，这些残基对可包含带相反电荷的侧链从而通过离子相互作用形成盐桥。例如，一个残基可以是Glu 或Asp，另一残基可以是Lys或Arg。Lys与Glu配对以及Lys与Asp配对还能够反应形成内酰胺环。同样地，Tyr与Glu或者Tyr与Asp能形成内酯环。特别地，第16和20位和/或第20和M位残基可以允许形成分子内桥。在这些位置合适的残基对的实例包括16-Asp,20-Lys ；16-Glu,20-Lys ；16-Asp,20-Arg ；16-Glu,20-Arg ；16-Lys,20-Asp ；16-Arg，20-Asp ；16-Lys,20-Glu ；16-Arg, 20—Glu ；禾Π / 或20-Asp, 24-Lys ；20-Glu,24-Lys ；20-Asp, 24-Arg ；20-Glu, 24-Arg ；20-Lys,24-Asp ；20-Arg，24-Asp ;20-Lys,24-Glu ；20-Arg，24-Glu.不希望受到任何特定理论的约束，认为这种分子内桥稳定了分子的α螺旋结构并因而提高了针对GLP-I受体以及可能的胰高血糖素受体的效力和/或选择性。不希望受任何特定理论的约束，本源胰高血糖素的第17和18位精氨酸残基似乎提供了针对胰高血糖素受体的显著选择性。第18位疏水性残基(例如Ala)可提高针对 GLP-I受体和胰高血糖素受体两者的效力在第23位替换(例如，替换为lie)可提高针对GLP-I受体的效力和/或选择性
在第M位替换(例如，替换为Glu)也可提高针对GLP-I受体的效力和/或选择性。不希望受任何特定理论的约束，本源胰高血糖素的第27J8和四位残基似乎提供了针对胰高血糖素受体的显著选择性。在本源胰高血糖素这些位置中的1个、2个或所有这3个位置进行替换可提高针对GLP-I受体的效力和/或选择性，并可能不显著降低针对胰高血糖素受体的效力。特别的实例包括第27位的Leu、第观位的Ser和第四位的Ala。对第27位天然存在的Met进行替换(例如用Leu或Lys、尤其用Leu进行替换) 还降低氧化的潜力，从而提高化合物的化学稳定性。对第28位天然存在的Asn进行替换(例如用kr、Arg或Ala)进行替换)还降低在酸溶液中脱酰胺基的潜力，从而提高化合物的化学稳定性还可通过引入可能形成两亲性螺旋结构并且可能不会显著降低针对胰高血糖素受体之效力的残基来提高针对GLP-I受体的效力和/或选择性。这可通过在第16、20、24 和观位中的一个或多个位置引入带电荷残基来实现。因此，第16和20位残基可全部带电荷，第16、20和对位残基可全部带电荷，或者第16、20、对和洲位残基可全部带电荷。例
11如，第16位残基可以是Glu、Lys或Asp。第20位残基可以是Lys、Arg或Glu。第M位残基可以是Glu、Asp、Lys或Arg。第28位残基可以是Arg。在第20和M位中的1个或2个位置用天然存在的残基Gln替换还降低在酸溶液中脱酰胺基的潜力，从而提高化合物的化学稳定性。第对位残基可以是61114印、1^8、八印或 Ala。所述化合物可包含1 20个氨基酸的C端肽序列Z，例如用以稳定胰高血糖素肽类似物的构型和/或二级结构，和/或用以使胰高血糖素肽类似物对酶水解更具抗性，例如，W099/46283中所述。当存在时，Z代表1 20个氨基酸残基(例如，1 15个氨基酸残基，更优选地 1 10个氨基酸残基，特别地1 7个氨基酸残基(例如1、2、3、4、5、6或7个氨基酸残基， 例如6个氨基酸残基))的肽序列。肽序列Z中的每个氨基酸残基可独立地选自Ala、Leu、 Ser、Thr、Tyr、Cys、Glu、Lys、Arg、Dbu (2,4 二氨基丁酸)、Dpr (2，3- 二氨基丙酸)和 Orn (鸟氨酸)。优选地，所述氨基酸残基选自kr、Thr, Tyr, Glu、Lys、Arg、Dbu, Dpr和Orn，更优选地可仅选自Glu、Lys和Cys。上述氨基酸可具有D或L构型，但优选具有L构型。特别优选的序列Z为4、5、6或7个连续的赖氨酸残基(即Lys3、Lys4, Lys5, Lys6或Lys7)，特别是5或6个连续的赖氨酸残基。Z序列的另一些实例示于WO 01/04156中。或者，序列Z的 C端残基可以是Cys残基。这可有助于化合物的修饰(例如PEG化)。在这些实施方案中， 序列Z的长度可例如仅为1个氨基酸(即Z = Cys)或者可为2、3、4、5、6或更多个氨基酸。 因此，其它氨基酸作为肽X和末端Cys残基之间的间隔物。肽序列Z与人OXM IP-I部分的对应序列(其具有序列 Lys-Arg-Asn-Arg-Asn-Asn-Ile-Ala)具有不高于 25% 的序列同一性。相对于另一多肽序列(例如，IP-1)，给定肽或多肽序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”计算为当将两者彼此比对时(适当时可引入空位以进行最佳比对)，给定肽序列中与另一多肽对应序列中相应氨基酸残基一致的氨基酸残基的百分比。同一性百分比的值可通过 WU-BLAST-2 确定(Altschul 等，Methods in Enzymology，266 :460-480 (1996))。 WU-BLAST-2采用若干检索参数，其中大部分设置为缺省值。可调整参数设置为如下值 重叠跨度(overlap span) = 1,重叠分数(overlap fraction) = 0. 125,字阈值(word threshold) (T) =11。氨基酸序列同一性百分比的值通过将由WU-BLAST-2确定的匹配的一致残基数除以参照序列的残基总数(忽略由WU-BLAST-2引入参照序列以使比对值最大化的空位)再乘以100而确定。因此，当将Z与IP-I的8个氨基酸进行最佳比对时，其具有不超过2个与IP-I之
对应氨基酸一致的氨基酸。本发明化合物中的一个或多个氨基酸侧链可与亲脂取代基缀合。所述亲脂取代基可共价键合至氨基酸侧链的原子，或者可通过间隔物缀合至氨基酸侧链。所述氨基酸可以是肽X的一部分，或肽Z的一部分。不希望受理论的约束，认为亲脂取代基结合血流中的白蛋白，从而保护本发明化合物免受酶降解，这可增强化合物的半衰期。所述间隔物(当存在时)用于在所述化合物和所述亲脂取代基之间提供间隔。亲脂取代基可通过酯、磺酰酯、硫代酯、酰胺或磺酰胺与氨基酸侧链或间隔物连接。因此，应理解，优选的亲脂取代基包括酰基，磺酰基，形成酯、磺酰酯、硫代酯、酰胺或磺酰胺之一部分的N原子、0原子或S原子。优选地，亲脂取代基中的酰基与氨基酸侧链或间隔物形成酰胺或酯的一部分。亲脂取代基可包含具有4至30个碳原子的烃链。优选地，它具有至少8或12个 C原子，优选地它具有M个或更少的C原子，或者20个或更少的C原子。烃链可以是线性的或分支的，并且可以是饱和的或不饱和的。应理解，烃链优选地被这样的部分所取代，所述部分形成与氨基酸侧链或间隔物的连接，例如酰基、磺酰基、N原子、0原子或S原子。最优选地，所述烃链被酰基取代，因而烃链可以是烷酰基(例如棕榈酰基、己酰基、月桂酰基、 肉豆蔻酰基或硬酯酰基)的一部分。因此，所述亲脂取代基可具有下式
权利要求
1.具有式R1-X-Z-R2的化合物或其可药用盐，其中R1为H、C1^4烷基、乙酰基、甲酰基、苯甲酰基或三氟乙酰基； R2 为 OH 或 Ml2 ； X为具有式I的肽His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Arg-Arg-A Ia-Lys-Asp-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Leu-Ser-Ala(SEQ ID NO 4) 或在至多4个的以下位置处与式I不同；如果与式I不同，则 第2位残基选自=D-Ser, Aib ； 第 16 位残基选自=Ser, Asp、Lys、Arg ； 第18位残基为Ala ； 第 20 位残基选自Gln、Arg、Glu、Asp ； 第21位残基为Glu ； 第23位残基为Val ；第 24 位残基选自Gln、Asp、Lys、Arg、Ala ； 第27位残基选自Met、Cys、Lys ； 第 28 位残基选自Asn、Arg、Lys、Ala、Glu、Asp ；以及第四位残基选自Thr、Arg;并且Z不存在或者为具有1 20个选自Ala、Leu、Ser, Thr, Tyr, Cys, Glu、Lys、Arg、 Dbu, Dpr和Orn之氨基酸单元的序列。
2.权利要求1的化合物，其中X在至多4个的以下位置处与式I不同； 如果与式I不同，则第2位残基选自=D-Ser, Aib ； 第16位残基选自Jer、Asp、Lys ； 第20位残基选自Gln、Arg、Glu ； 第27位残基选自Met、Cys, Lys ；以及第观位残基选自Asn、Arg、Ala。
3.权利要求2的化合物，其中X在至多3个的以下位置处与式I不同； 如果与式I不同，则第2位残基选自=D-Ser, Aib ； 第16位残基选自=Ser, Asp、Lys ；以及第20位残基选自Gln、Arg、Glu。
4.权利要求1的化合物，其中X在至多4个的以下位置处与式I不同； 如果与式I不同，则第2位残基选自=D-Ser, Aib ； 第16位残基选自Jer、Asp、Lys ； 第18位残基为Ala;以及第20位残基选自Gln、Arg、Glu。
5.权利要求1的化合物，其中肽X在至多4个的以下位置处与式I不同； 如果与式I不同，则第23位残基为Val ；第 24 位残基选自Gln、Asp、Lys、Arg、Ala ； 第27位残基选自Met、Cys, Lys ；以及第观位残基选自Asn、Arg、Ala。
6.前述权利要求中任一项的化合物，其中第16和20位和/或第20和M位的残基能形成盐桥。
7.前述权利要求中任一项的化合物，其中X包含以下的一个或多个残基组 20-Lys,24-Glu ；20-Lys,23-Ile,24-Glu ； 16-Glu，20-Lys，24-Glu ； 16-Glu,20-Lys ； 16-Glu，20-Lys，29-Ala ； 16-Glu,20-Lys,23-Ile,24-Glu ； 16-Glu, 20-Lys,23-Ile，24-Glu,29-Ala ； 16-Glu,20-Lys,24-Glu,29-Ala ； 20-Lys,23-Ile,24-Glu,29-Ala ；27-Leu,28-Ser,29-Ala； 29-Ala ；16-Ser ； 20-Gln ；23-Val；24-Gln； 16-Ser,20-Gln ； 16-Asp,20-Arg,24-Asp ； 16-Lys,20-Glu ； 24-Arg ；或28-Arg0
8.权利要求1的化合物，其中X具有以下序列HSQGTFTSDYSKYLDSRRAKDFIEffLLSA (SEQIDNO13)HSQGTFTSDYSKYLDERRAQDFIEffLLSA(SEQIDNO5)HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFVEffLLSA(SEQIDNO6)HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIQffLLSA(SEQIDNO7)HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFIEffLLSA(SEQIDNO8)HSQGTFTSDYSKYLDDRRARDFIDffLLSA(SEQIDNO9)HSQGTFTSDYSKYLDKRRAEDFIKffLLSA(SEQIDNO10)HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIRffLLSA(SEQIDNO11)HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIEffLLRA(SEQIDNO12)HSQGTFTSDYSKYLDERAAKDFIEffLLSA(SEQIDNO14)HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIDffLLSA(SEQIDNO15)HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIEffLLAAor(SEQ ID NO 16)；HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIEffLLSA(SEQ ID NO: 17)。
9.前述权利要求中任一项的化合物，其中R1为H。
10.前述权利要求中任一项的化合物，其中R2为NH2。
11.前述权利要求中任一项的化合物，其中Z与具有序列 Lys-Arg-Asn-Arg-Asn-Asn-Ile-Ala的人胃泌酸调节素IP-I序列的对应部分具有不高于 25%的序列同一性。
12.前述权利要求中任一项的化合物，其中Z的C端残基为Cys。
13.权利要求1至10中任一项的化合物，其中Z不存在。
14.前述权利要求中任一项的化合物，其中所述化合物如肽X中一个或多个氨基酸侧链与亲脂取代基或聚合物部分缀合。
15.编码前述权利要求中任一项之化合物的核酸。
16.包含权利要求15之核酸的表达载体。
17.包含权利要求15之核酸或权利要求16之表达载体的宿主细胞。
18.药物组合物，其包含与可药用载体混合的前述权利要求中任一项的化合物、核酸、 表达载体或宿主细胞。
19.权利要求1至17中任一项之化合物、核酸、表达载体或宿主细胞在制备药物中的用途，所述药物用于防止体重增加、促进体重减轻或者用于治疗由体重超重引起或与其相关的病症或肥胖症，包括病态肥胖、肥胖相关炎症、肥胖相关胆囊疾病和肥胖引起的睡眠呼吸暂停，或者用于治疗胰岛素抗性、葡萄糖不耐受、2型糖尿病、高血压、致动脉粥样化血脂异常、动脉粥样硬化、动脉硬化、冠心病或中风。
20.权利要求1至17中任一项的化合物、核酸、表达载体或宿主细胞，其用于医学治疗的方法中。
21.权利要求1至16中任一项的化合物、核酸、表达载体或宿主细胞，其用于以下方法中防止体重增加、促进体重减轻或者用于治疗由体重超重引起或与其相关的病症或肥胖症，包括病态肥胖、肥胖相关炎症、肥胖相关胆囊疾病和肥胖引起的睡眠呼吸暂停，或者用于治疗胰岛素抗性、葡萄糖不耐受、2型糖尿病、高血压、致动脉粥样化血脂异常、动脉粥样硬化、动脉硬化、冠心病或中风。
全文摘要
本发明提供了用于促进体重减轻或防止体重增加以及用于糖尿病、代谢综合征和相关疾病治疗中的材料和方法。特别地，本发明提供了在这些方法中有效的新型胰高血糖素肽类似物。所述肽可通过具有与人胰高血糖素相比提高的针对GLP-1受体之选择性来介导其作用。
文档编号C07K14/605GK102292348SQ200880132702
公开日2011年12月21日 申请日期2008年12月15日 优先权日2008年12月15日
发明者埃迪·迈尔, 延斯·罗森格伦·道高, 比亚内·杜·拉森, 特里内·斯科夫隆德·吕厄·尼鲁普, 迪特·里贝尔, 马里耶·斯科夫高 申请人:西兰制药公司