-甲基腺苷的化学脱甲基方法
【专利摘要】本发明涉及用化学方法特异性的使RNA中N6-甲基腺苷脱甲基化，具体方法如下：双氧水和碳酸氢铵在水相中反应生成过氧碳酸HCO4-，之后N6-甲基腺苷N6位上的N原子作为亲核试剂进攻HCO4-，经历N6-过氧甲基胞嘧啶（oxm6A），N6-羟甲基胞嘧啶（hm6A）和N6-醛基胞嘧啶（f6A）的中间产物后，最终脱甲基生成腺苷。
【专利说明】RNA中N6-甲基腺苷的化学脱甲基方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及RNA中N6-甲基腺苷的化学脱甲基方法，属于化学生物学领域。
【背景技术】
[0002]N6-甲基腺苷是真核生物mRNA中最丰富的化学修饰，也存在于tRNA，rRNA，InRNA 中，自上世纪70年代最初发现以来，目前在哺乳动物植物、苍蝇、减数分裂的酵母和在细胞 核增殖的病毒中都发现了m6A的存在。在细胞mRNA中，m6A占所有腺苷的0. 1%到0. 4%， 一条mRNA上大约有3-5个m6A位点，由于N6位的一个甲基不能改变它的Watson-Crick碱 基配对的性质，因此不能依靠逆转录的方法来检测m6A，这限制了m6A的功能研究。最近，研 究发现FTO和AlkBH5可以作为m6A的脱甲基化酶，证明了m6A的甲基化是一个动态的过程， 揭示了哺乳动物中一种新的调节机制，这种可逆的甲基化现象可能影响基因的表达。其次， 免疫沉淀法结合二代测序技术为m6A功能的研究提供了可能。这些研究为m6A修饰在生物 体内的功能研究提供了的帮助。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是在于提供一种有效的化学方法使N6-甲基腺苷脱甲 基。
[0004]N6-甲基腺苷是上世纪七十年代发现并在最近成为研究的热门，目前已证实了其 在生物体内的甲基化是动态的过程，但目前发现的脱甲基化都是酶促反应，并没有有效的 化学方法氧化N6-甲基腺苷。据文献报道，碳酸氢铵活化的过氧化氢氧化试剂是简单经济 的制备三级胺氮-氧化合物的方法，因此我们想利用此方法氧化N6-甲基腺苷成为硝酮结 构，但实际反应后发现，最终产物并不是硝酮结构的氧化物，而是脱甲基产物，在此化学反 应中我们又发现并证实了一个新的中间产物N6-过氧甲基腺苷（Oxm6A)。反应式如下：
[0006] 中间产物结构式如下：
【权利要求】
1. 一种N6-甲基腺苷的化学脱甲基方法，其特征在于，以N6-甲基腺苷、碳酸氢铵及双 氧水为原料，以水作溶剂在37°C下反应4h，HPLC分离得到白色固体，为N 6-腺苷。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，2mM N6-甲基腺苷与1M碳酸氢铵及200mM 双氧水反应，以水作溶剂在37°C下反应24h，HPLC分离得到白色固体，为脱甲基腺苷。
【文档编号】C07H1/00GK104262434SQ201410586145
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月28日 优先权日:2014年10月28日
【发明者】周翔, 吴晋军, 翁小成 申请人:武汉大学