一种岭南山竹子多糖及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种岭南山竹子多糖及其制备方法和应用。本发明从岭南山竹子制备得到了岭南山竹子多糖，该岭南山竹子多糖具有较好的抗氧化活性和抗肿瘤活性，因此可以应用到制备抗氧化活性药物或抗肿瘤药物，具有潜在应用价值。
【专利说明】一种岭南山竹子多糖及其制备方法和应用
【技术领域】:
[0001]本属于岭南山竹子多糖【技术领域】，具体涉及一种岭南山竹子多糖及其制备方法和应用。
【背景技术】:
[0002]多糖(Polysaccharide)是由20个以上的单糖通过糖苷键连接形成的含醒基或酮基的多羟基聚合物及其衍生物，广泛分布于动物、植物及微生物的细胞壁中。多糖具有广泛的生物学功能，它不仅可以作为体内的供能物质及某些物质的基本组分，还参与细胞间的识别、机体免疫功能的调节、细胞间物质的运输、细胞的转化、肿瘤细胞的凋亡等过程。由于多糖广泛的免疫活性、对肿瘤细胞的直接杀伤作用，及其毒副作用小的特点，因而是很有希望的抗肿瘤药物。近年来，对多糖抗肿瘤、抗氧化活性的研究得到了越来越多的关注。富含多糖的物质作为抗肿瘤药物或辅助药物，如灵芝、人参、香菇、银耳、云芝、芦荟、仙人掌等在我国传统中药中早已有广泛的应用。迄今为止，在我国已投放市场的多糖药物主要有:香菇多糖注射液、猪苓多糖注射液、云芝多糖胶囊、黄芪多糖、云芝肝泰、灰树花胶囊等。但是，相对于我国丰富的传统中药资源，现有的研究仍显不足。
[0003]岭南山竹子(Garcinia oblong ifolia Champ.),别名:黄牙果、岭南倒抢子,生于平地、丘陵、沟谷密林或疏林中。分布于广东、广西、海南、越南。作为传统用药，常用于消炎镇痛、收敛生肌、消化不良、溃疡病轻度出血、口腔炎、牙周炎；外用治烧烫伤、湿疹。叶子的浸液可治伤口腐烂。现代研究表明山竹子提取物有抗炎、抗肿瘤、抗氧化、杀虫、抑菌等作用。
·[0004]目前，岭南山竹子化学成分的研究多在于从树皮或树叶中提取分离化合物，但尚未有从岭南山竹子树皮中提取和分尚多糖的报道。
【发明内容】
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[0005]本发明的第一个目的是提供一种具有抗氧化和抗肿瘤活性的岭南山竹子多糖及其制备方法。
[0006]本发明的岭南山竹子多糖是通过以下方法制备的:
[0007]a、将岭南山竹子(Garcinia oblongifolia Champ.)树皮切断,清洗除去杂物，自然风干后粉碎；
[0008]b、将粉碎后的岭南山竹子树皮用乙醇水溶液浸提，过滤，取滤渣，加入到水中煎煮，然后再过滤，取滤液，滤液浓缩至半流体状，过滤，滤液加入到乙醇中，边加边搅拌，待沉淀完全后，固液分离，弃上清，所得沉淀进行干燥，得到干燥后的粗多糖；
[0009]C、将干燥后的粗多糖加入到水中，使其完全溶解，然后加入过氧化氢将溶液由深红色脱色至灰色，反应后，将反应液取出，加入乙醇并搅拌，待沉淀完全后，固液分离，弃上清，固体沉淀进行干燥，即得到纯化后的岭南山竹子多糖。
[0010]优选，将纯化后的岭南山竹子多糖溶解于质量体积分数2%的氢氧化钠溶液，然后依次用截留分子量为500KDa、IOOkDa和IOkDa的超滤膜超滤，收集各部分的残留液，依次得到三个成份，即精制岭南山竹子多糖PU P2和P3。
[0011 ] 所述的乙醇水溶液优选为体积分数95 %的乙醇水溶液。
[0012]所述的步骤b和步骤c的干燥优选是在60°C下干燥。
[0013]本发明的第二个目的是提供精制岭南山竹子多糖PU P2或P3在制备抗氧化药物或抗肿瘤药物中的应用。
[0014]所述的抗肿瘤药物优选为抗人肺癌、人肝癌、人乳腺癌、人表皮瘤、人鼻咽癌、非小细胞肺癌或白血病的药物。
[0015]本发明从岭南山竹子制备得到了岭南山竹子多糖，该岭南山竹子多糖具有较好的抗氧化活性和抗肿瘤活性，因此可以应用到制备抗氧化活性药物或抗肿瘤药物，具有潜在应用价值。
【具体实施方式】:
[0016]以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0017]实施例1:
[0018]A.原料及处理:将原料岭南山竹子(Garcinia oblongifolia Champ.)树皮切段，清洗除去杂物，自然风干后粉碎。
[0019]B.岭南山竹子粗多糖的制备:将粉碎后的岭南山竹子树皮放入提取缸内，用体积分数95%乙醇水溶液浸泡2次，每次48小时，过滤滤去乙醇，滤渣再加入7-10倍纯水中，煎煮2-3次，每次2-3小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩至半流体状,过滤,滤液加入2倍体积乙醇中，边加边搅拌。待沉淀完全后，离心，弃上清。所得沉淀在60°C烘箱中干燥，由此得到岭南山竹子粗多糖。
[0020]C.岭南山竹子多糖的纯化:称取干燥后的岭南山竹子粗多糖，置于500ml圆底烧瓶中，加蒸馏水适量，置于60°C恒温水浴锅中，搅拌使其完全溶解，逐滴加入适量过氧化氢进行脱色，将粗多糖溶液由深红色脱色至灰色(即粗多糖溶液颜色由深变浅)，反应后，将反应液取出，加入等体积乙醇，边加边搅拌。待沉淀完全后，离心，弃上清，沉淀置60°C烘箱干燥，即得纯化的岭南山竹子多糖。
[0021]D.多糖的分级分离:称取经脱色纯化的岭南山竹子多糖，加入质量体积分数
2.0%氢氧化钠溶液中，搅拌使其完全溶解，静置，然后依次使用截留分子量为500kDa、IOOkDa和IOkDa的超滤膜分级分离，分别收集各部分残留液，先置-20°C冰箱预冻，再置真空冷冻干燥机干燥24小时，获得三个组分，即精制岭南山竹子多糖Pl (对应500KDa的超滤膜)，P2 (对应IOOKDa的超滤膜)和P3 (对应IOKDa的超滤膜)。
[0022]超滤条件:超滤是一个连续的动态过滤过程，须在一定的压力差推动下方可进行。本实验采用外源氮气瓶加压，压力大小为0.3Mpa。首先以质量体积分数2.0%氢氧化钠溶液反复过滤样品，直至 滤出液经苯酚-硫酸显色法检测基本无色后，再加蒸馏水反复过滤以除去其中的离子，滤出液经电导率仪检测，电导率小于IOii s / cm即可。分别收集各部分残留液，先置_20°C冰箱预冻，再置真空冷冻干燥机干燥24小时，即得到各部分的精制岭南山竹子多糖。
[0023]E.多糖理化性质分析:分别称取精制岭南山竹子多糖P1，P2和P370mg，精密称定，以质量体积分数2.0%氢氧化钠溶液溶解，配制成IOmg / ml的多糖溶液，在室温(20°C )和钠光D线589nm的条件下测其旋光度，读取三次，取平均值。
[0024]根据比旋光度[a]的计算公式[a ] = 100.a / (1.c) (c:g/100ml, I:dm),求的各样品的比旋光度。
[0025]测定结果为比旋光度Pl: [ a ]2°d=+36.25
[0026]P2: [ a ]2CID=+11.61
[0027]P3: [ a ]20D=-8.13
[0028]F.多糖抗氧化活性的测定:采用FRAP法测定精制岭南山竹子多糖P1，P2和P3的抗氧化活性。
[0029]FRAP(ferric reducing antioxidant power)法
[0030](I)配制 IOmM TPTZ (2, 4, 6-tripyridyl-s-triazine)(用 40mM 的 HCl 溶解)标准对照物，FeSO4的浓度为ImM (用时再稀释成25~1000 u M各浓度梯度);
[0031](2)分别以I体积不同浓度的FeSO4与I体积的IOmM TPTZ和10体积的0.3M的
醋酸缓冲液混合，然后测定A595，用于制作标准曲线；
[0032](3)取一定体积的FRAP试剂液，加入适量体积的待测样品(精制岭南山竹子多糖P1，P2或P3)，37°C下反应5~30min以上(若有活性，则生成蓝色的比色液)，测定吸光度A595,反应体系:180 ill FRAP试剂液+20 U I待测样品一A595,通过96孔板与酶标仪测定，波长 595nm·
[0033](4)将待测样品与FRAP试剂液反应后的吸光度A595值，与FeSO4标准曲线，计算出样品的FRAP值。FRAP值定义为在相同吸光度下每克样品相当于FeSO4的微摩尔数；FRAP值越大，表示样品的还原力(将Fe3+还原成Fe2+的能力)越强，即抗氧化活性越高，反之越弱；
[0034](5)每个样品的抗氧化活性测定至少重复4次，阳性对照为L-抗坏血酸(L-ascorbic acid)。
[0035]表1:精制岭南山竹子多糖的抗氧化活性测定
【权利要求】
1.一种岭南山竹子多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: a、将岭南山竹子(Garciniaoblongifolia Champ.)树皮切断,清洗除去杂物，自然风干后粉碎； b、将粉碎后的岭南山竹子树皮用乙醇水溶液浸提，过滤，取滤渣，加入到水中煎煮，然后再过滤，取滤液，滤液浓缩至半流体状，过滤，滤液加入到乙醇中，边加边搅拌，待沉淀完全后，固液分离，弃上清，所得沉淀进行干燥，得到干燥后的粗多糖； C、将干燥后的粗多糖加入到水中，使其完全溶解，然后加入过氧化氢将溶液由深红色脱色至灰色，反应后，将反应液取出，加入乙醇并搅拌，待沉淀完全后，固液分离，弃上清，固体沉淀进行干燥，即得到纯化后的岭南山竹子多糖。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将纯化后的岭南山竹子多糖溶解于质量体积分数2%的氢氧化钠溶液，然后依次用截留分子量为500KDa、IOOkDa和IOkDa的超滤膜超滤，收集各部分的残留液，依次得到三个成份，即精制岭南山竹子多糖P1、P2和P3。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的乙醇水溶液为体积分数95%的乙醇水溶液。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤b和步骤c的干燥是在60°C下干燥。
5.一种按照权利要求1所述的制备方法制备得到的岭南山竹子多糖。
6.一种按照权利要求2所述的制备方法制备得到的精制岭南山竹子多糖P1、P2或P3。
7.权利要求6所述的 精制岭南山竹子多糖P1、P2或P3在制备抗氧化药物或抗肿瘤药物中的应用。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗人肺癌、人肝癌、人乳腺癌、人表皮瘤、人鼻咽癌、非小细胞肺癌或白血病的药物。
9.一种抗氧化药物或抗肿瘤药物，其特征在于，包含有效量的作为活性成份的权利要求6所述的精制岭南山竹子多糖P1、P2或P3。
10.根据权利要求9所述的抗氧化药物或抗肿瘤药物，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗人肺癌、人肝癌、人乳腺癌、人表皮瘤、人鼻咽癌、非小细胞肺癌或白血病的药物。
【文档编号】C08B37/00GK103588889SQ201310536026
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年10月25日 优先权日:2013年10月25日
【发明者】郑希龙, 李榕涛, 杨海建, 崔杰, 黄立标 申请人:中国医学科学院药用植物研究所海南分所