本发明涉及药敏检测技术领域，特别涉及一种肺炎支原体快速培养、鉴定与药敏的试剂盒。
背景技术：
肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae Mp)是人类新近发现的一种病原微生物。它是一种由患者口鼻分泌物经空气飞沫传播，易引起散发性或区域性流行，其主要症状为呼吸道感染伴肺炎即肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia MPP)的病原体，对人类有明显的致病性。Mp感染四季皆可发病，但秋冬季居多，婴幼儿和青少年为易感染人群，发病率为小儿肺炎类的20-30％，人口稠密及流行季节可达50％，流行周期为3-7年，近年来有流行周期缩短，发病率升高的趋势。Mp感染潜伏期长，病情发展缓慢，症状表现不明显，与常见细菌、病毒感染所致呼吸道症状相似，临床不易诊断或鉴别诊断而治疗药物又大不相同，临床治疗周期长，往往延误病情导致严重的并发症，故Mp感染的快速检测，准确诊断，及时诊治有着重要的临床意义。
培养法是微生物病原体检测的“金标准”，MP液体培养基的工艺、配方经过了几十年的临床验证已相当成熟，但现有的药敏培养时间长，一般为24～72小时，导致常规的MP检测不能常规开展，满足不了临床MP感染疑似患者早期快速筛查的问题。
技术实现要素：
本发明提供一种肺炎支原体快速培养、鉴定与药敏的试剂盒，解决现有的肺炎支原体药敏检测培养时间长的问题。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：
一种肺炎支原体快速培养、鉴定与药敏的试剂盒，包括培养液、稀释液、矿物油和检测板，所述培养液中含有牛心浸液60～80％、NaCl0.6～0.8％、胰蛋白胨0.3～2.0％、Na2HPO4 0.05～0.4％、硫酸镁0.03～0.08％、硫酸铵0.1～0.2％、标准小牛血清10.0～30.0％、卵黄液5.0～15.0％、葡萄糖0.5～1.5％、万古霉素0.001％、二性霉素B0.001％、氯霉素0.01～0.08％、酚红0.004～0.02％、亚甲蓝0.001～0.005％；所述检测板上设置有肺炎支原体鉴别孔和抗生素药敏检测孔。
其中，优选地，所述稀释液为浓度为0.5～1.0％的NaCl水溶液。
其中，优选地，所述肺炎支原体鉴别孔内分别盛装有干燥的精氨酸、氯化三苯基四氮唑蓝、美兰以及β-内酰胺类药物。
其中，优选地，所述抗生素药敏检测组包括多组药敏检测单元，每组药敏检测单元包括两个药敏微孔。
其中，优选地，同一组药敏检测单元的两个药敏微孔内盛装有不同浓度的同一药物。
其中，优选地，所述药敏微孔盛装的药物为红霉素、乙酰螺旋霉素、交沙霉素、强力霉素、罗红霉素、氧氟沙星、阿奇霉素、克拉霉素或环丙沙星。
其中，优选地，所述矿物油为液体石蜡油。
本发明是把培养与生化反应相结合，肺炎支原体具有分解葡萄产酸的能力，使培养液的pH降低，根据酸碱指示剂指示的颜色变化判断结果。抗生素药敏检测孔内若检测的肺炎支原体对包被的抗生素敏感，其酶活性受到抑制，不会引起颜色变化。
本发明的有益效果：
1.本发明的试剂盒、敏感、快速，能在6～10小时出结果，而同类的肺炎支原体试剂盒需要24～48小时才能出结果。
2.本发明的试剂盒特异性强，不适合其它支原体和其它细菌的生长，通过本发明中培养液，同时加入不影响支原体生长的万古霉素、二性霉素B和氯霉素，将其它杂菌抑制或杀灭。
3.本发明试剂盒可同时对多种抗生素进行药敏试验，涵盖面广，临床适应性强。
4.本发明试剂盒培养与药敏同步进行，方便快捷，更有有效治疗临床检测与治疗。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例提一种肺炎支原体快速培养、鉴定与药敏的试剂盒，包括培养液、0.8％的NaCl水溶液、液体石蜡油和检测板，所述培养液中含有牛心浸液70％、NaCl0.6％、胰蛋白胨1.0％、Na2HPO4 0.2％、硫酸镁0.05％、硫酸铵0.14％、标准小牛血清20％、卵黄液7％、葡萄糖0.92％、万古霉素0.001％、二性霉素B0.001％、氯霉素0.05％、酚红0.008％、亚甲蓝0.003％；所述检测板上设置有肺炎支原体鉴别孔和抗生素药敏检测孔。
其中，所述肺炎支原体鉴别孔内分别盛装有干燥的精氨酸、氯化三苯基四氮唑蓝、美兰以及β-内酰胺类药物。
其中，优选地，所述抗生素药敏检测组包括九组药敏检测单元，每组药敏检测单元包括两个药敏微孔。
其中，同一组药敏检测单元的两个药敏微孔内盛装有不同浓度的同一药物。所述药敏微孔盛装的药物为红霉素、乙酰螺旋霉素、交沙霉素、强力霉素、罗红霉素、氧氟沙星、阿奇霉素、克拉霉素和环丙沙星。
实施例2
本实施例提一种肺炎支原体快速培养、鉴定与药敏的试剂盒，包括培养液、0.9％的NaCl水溶液、液体石蜡油和检测板，所述培养液中含有牛心浸液60％、NaCl0.8％、胰蛋白胨2.0％、Na2HPO4 0.05％、硫酸镁0.08％、硫酸铵0.2％、标准小牛血清30.0％、卵黄液5.308％、葡萄糖1.5％、万古霉素0.001％、二性霉素B0.001％、氯霉素0.08％、酚红0.02％、亚甲蓝0.005％；所述检测板上设置有肺炎支原体鉴别孔和抗生素药敏检测孔。
其中，所述肺炎支原体鉴别孔内分别盛装有干燥的精氨酸、氯化三苯基四氮唑蓝、美兰以及β-内酰胺类药物。
其中，优选地，所述抗生素药敏检测组包括七组药敏检测单元，每组药敏检测单元包括两个药敏微孔。
其中，同一组药敏检测单元的两个药敏微孔内盛装有不同浓度的同一药物。所述药敏微孔盛装的药物为红霉素、交沙霉素、强力霉素、氧氟沙星、阿奇霉素、克拉霉素和环丙沙星。
实施例3
本实施例提一种肺炎支原体快速培养、鉴定与药敏的试剂盒，包括培养液、0.5％的NaCl水溶液、液体石蜡油和检测板，所述培养液中含有牛心浸液72％、NaCl0.7％、胰蛋白胨0.37％、Na2HPO4 70.4％、硫酸镁0.037％、硫酸铵0.1～0.2％、标准小牛血清10.949％、卵黄液15.0％、葡萄糖0.5％、万古霉素0.001％、二性霉素B0.001％、0.04％氯霉素、酚红0.004％、亚甲蓝0.005％；所述检测板上设置有肺炎支原体鉴别孔和抗生素药敏检测孔。
其中，所述肺炎支原体鉴别孔内分别盛装有干燥的精氨酸、氯化三苯基四氮唑蓝、美兰以及β-内酰胺类药物。
其中，优选地，所述抗生素药敏检测组包括八组药敏检测单元，每组药敏检测单元包括两个药敏微孔。
其中，同一组药敏检测单元的两个药敏微孔内盛装有不同浓度的同一药物。所述药敏微孔盛装的药物为红霉素、乙酰螺旋霉素、交沙霉素、强力霉素、罗红霉素、氧氟沙星、克拉霉素和环丙沙星。
实施例4
本实施例提一种肺炎支原体快速培养、鉴定与药敏的试剂盒，包括培养液、1.0％的NaCl水溶液、液体石蜡油和检测板，所述培养液中含有牛心浸液80％、NaCl0.7％、胰蛋白胨1.2％、Na2HPO4 0.3％、硫酸镁0.05％、硫酸铵0.15％、标准小牛血清11.334％、卵黄液5％、葡萄糖1.2％、万古霉素0.001％、二性霉素B0.001％、氯霉素0.05％、酚红0.01％、亚甲蓝0.004％；所述检测板上设置有肺炎支原体鉴别孔和抗生素药敏检测孔。
其中，所述肺炎支原体鉴别孔内分别盛装有干燥的精氨酸、氯化三苯基四氮唑蓝、美兰以及β-内酰胺类药物。
其中，优选地，所述抗生素药敏检测组包括七组药敏检测单元，每组药敏检测单元包括两个药敏微孔。
其中，同一组药敏检测单元的两个药敏微孔内盛装有不同浓度的同一药物。所述药敏微孔盛装的药物为红霉素、乙酰螺旋霉素、强力霉素、罗红霉素、氧氟沙星、阿奇霉素和环丙沙星。
上述实施例的肺炎支原体快速培养、鉴定与药敏的试剂盒制备方法如下：
(1)培养液的制备：按配比称取牛心浸液、NaCl、胰蛋白胨、Na2HPO4、硫酸镁、硫酸铵、标准小牛血清、卵黄液、葡萄糖、万古霉素、二性霉素B0.001％、氯霉素、酚红和亚甲蓝，振荡使溶解，调节pH值7.4±0.2，0.22μm微孔滤膜过滤，即得。
(2)鉴别药敏板的制备：以甲醇为稀释剂，按浓度分别配制精氨酸、氯化三苯基四氮唑蓝、美兰以及β-内酰胺类药物溶液，按100μl/孔计算，精氨酸终浓度为0.05％，氯化三苯基四氮唑蓝的终浓度0.05％、美兰0.2％以及β-内酰胺类100mg/L。
(3)药敏微孔液：以国有临床实验室标准化委员会(NCCLS)公布的判定药物敏感MIC值为低浓度标准(L)、耐受MIC值为高浓度标准(H)，以甲醇为稀释剂，分别配制9种药物的18种浓度；50μl/孔加至特定微孔中，干燥、封装，即得。
使用该试剂盒检测肺炎支原体的检测方法，包括以下步骤：
将样本拭子放入培养管的培养液中充分洗脱挤干；
再将培养液以100微升每孔(ul/孔)的量加入至药敏鉴别板的微孔中
将矿物油以1滴每孔的量添加至各个微孔中；
将试剂盒放置在35℃～37℃的环境下培养24～72小时，根据微孔颜色变化判定结果。
结果判断如下：
鉴别区：Arg-TTC-MB-β-Lac表现为黄-红-黄绿-黄为Mp，否则为其它支原体；
药敏区：同种药物低浓度(L)孔、高浓度(H)孔均红，判敏感；低浓度(L)孔变黄、高浓度(H)孔红，判中敏；低浓度(L)孔、高浓度(H)孔均黄，判耐药。
对上述试剂盒进行了质量评价，其中，重复性试验总符合率在96％以上，稳定性试验表该试剂在-20℃下保存6个月稳定性良好。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。