猴免疫缺陷病毒的RT‑LAMP检测引物组、试剂盒及其检测方法与流程

文档序号:11145950阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP检测引物组,包括一对外引物、一对内引物和一对环引物,其核苷酸序列分别如下所示:

外引物:

SIV-F3:5’- GCATTCACGCAGAAGAGA- 3’(SEQ ID NO:1);

SIV-B3:5’- CTGGCACTACTTCTGCTC- 3’(SEQ ID NO:2);

内引物:

SIV-FIP:5’- TCTGCTGTTCCTGTTTCCACCGAAACACACTGAGGAAGCA- 3’(SEQ ID NO:3);

SIV-BIP:5’- ACCAACAGCACCATCTAGCGATGGCAGGTGGACATAGT- 3’(SEQ ID NO:4);

环引物:

SIV-LF:5’- ACTAGGTGTCTCTGCACTATCT- 3’(SEQ ID NO:5)

SIV-LB:5’- ACCCAGTACAACAAATAGGTGG- 3’(SEQ ID NO:6)。

2.一种猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP检测试剂盒,其特征在于:该检测试剂盒包括权利要求1所述的检测引物组。

3.根据权利要求2所述的猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP检测试剂盒,其特征在于:该检测试剂盒还包含DNA聚合酶、逆转录酶、RT-LAMP反应液、阳性对照和阴性对照。

4.根据权利要求3所述的猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP检测试剂盒,其特征在于:外引物、环引物、内引物的摩尔比为1:4:8。

5.根据权利要求3所述的猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP检测试剂盒,其特征在于:所述DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶,所述逆转录酶为AMV逆转录酶。

6.根据权利要求3所述的猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP检测试剂盒,其特征在于:所述RT-LAMP反应液含有10mM dNTP、10×ThermoPol反应缓冲液、150mM MgSO4水溶液。

7.根据权利要求3所述的猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP检测试剂盒,其特征在于:所述阳性对照为含有目的基因片段的质粒DNA,阴性对照为DEPC水。

8.一种猴免疫缺陷病毒的RT-LAMP检测方法,包括如下步骤:

1)提取待检样品RNA;

2)反转录环介导等温扩增反应:配制25μl反应体系,含有SIV-F3 0.2μM,SIV-B3 0.2μM,SIV-FIP 1.6μM,SIV-BIP 1.6μM,SIV-LF 0.8μM,SIV-LB 0.8μM,RT-LAMP反应液12.5μl,DNA聚合酶8U,逆转录酶2.5U,待检RNA 1~100ng,用DEPC水补齐到25μl;然后于63~65℃反应45~60min;

3)结果分析:通过肉眼观察反应管中溶液是否变浑浊或通过琼脂糖凝胶电泳分析是否出现梯状条带判定结果;如反应管中溶液变浑浊或电泳出现梯状条带即为阳性,否则,为阴性;

上述检测方法所用检测试剂盒为权利要求2~7中任一项权利要求所述的检测试剂盒。

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