一种核酸封装试剂及其应用的制作方法

本发明涉及一种核酸封装试剂及其应用。
背景技术：
：寨卡病毒(Zikavirus,ZIKV)，是一种由伊蚊叮咬传播的病毒。2015年，巴西发现首例寨卡病毒感染病例，随后疫情持续发酵，直至大规模寨卡病毒疫情爆发，迅速蔓延至30多个南美及非洲地区，至今已有150多万人感染寨卡病毒。2016年2月2日世界卫生组织召开紧急会议决定把寨卡病毒传播列为全球紧急公共卫生事件。中国卫生和计划生育委员会2016年2月3日公布了《寨卡病毒病诊疗方案》(2016年第1版)，6天后我国确诊了首例输入性寨卡病毒感染病例，截止目前我国已确诊多例输入性病例。2016年8月底寨卡病毒感染再次在新加坡流行，截止9月9日新加坡已有300例确诊病例。寨卡病毒属于黄病毒科黄病毒属，单链RNA病毒，与登革热病毒属同源同宗。其传播方式主要有：蚊媒传播、母婴传播、血液传播以及性传播。临床症状与登革热类似，包扩发热、皮疹、关节痛、肌肉痛、头痛、结膜炎等，也可感染神经系统导致格林-巴利综合征，重症及死亡病例少见。寨卡病毒感染危害最大的是孕妇及胎儿，目前被怀疑是胎儿及新生儿小头畸形的罪魁祸首。目前，寨卡病毒的实验室诊断包括病原学检测和血清学试验。病毒分离为诊断寨卡病毒感染的金标准，但该方法耗时费力，且成功率低下。技术实现要素：本发明的目的是提供一种核酸封装试剂及其应用。本发明首先提供了一种核酸封装试剂，包括3-10质量份琼脂糖、1-5质量份皂苷和2-6质量份羟丙基纤维素。所述核酸封装试剂具体由3-10质量份琼脂糖、1-5质量份皂苷和2-6质量份羟丙基纤维素组成。所述核酸封装试剂，具体可包括5质量份琼脂糖、3质量份皂苷和4质量份羟丙基纤维素。所述核酸封装试剂更具体可由5质量份琼脂糖、3质量份皂苷和4质量份羟丙基纤维素钠组成。人参皂苷的化学结构式见式(Ⅰ)。羟丙基纤维素的化学结构式见式(Ⅱ)。所述核酸封装试剂的推荐使用浓度为0.05-1g/100ml，优选为0.1g/100ml。所述封装试剂可以直接售卖，也可以配置成母液后售卖。所述母液的具体制备方法如下：取封装试剂，溶于水(优选无菌水)，得到浓度为0.5g/100ml的母液。母液建议4℃保存。本发明还保护以上任一所述的核酸封装试剂的应用，为将核酸包埋于固相表面。所述应用中，具体可将核酸包埋于反应装置内。所述核酸具体可为用于检测靶物质的引物探针组(由用于检测靶物质的一条上游引物、一条下游引物和一条探针组成)。所述靶物质可为微生物，更具体可为病毒。所述引物探针组具体可为基于核酸序列依赖扩增技术的引物探针组。进一步，所述核酸封装试剂可用于通过核酸序列依赖扩增技术检测靶物质。具体来说，是通过所述核酸封装试剂将基于核酸序列依赖扩增技术的引物探针组包埋于反应装置内，然后采用包埋有引物探针组的反应装置进行核酸序列依赖扩增，从而检测靶物质。应用本发明提供的核酸封装试剂将核酸封装于反应装置内后，使用时只需加入反应液使其与被封装的核酸接触，即可发生崩解，核酸可快速溶于反应液中，参与后续反应。本发明提供的核酸封装试剂，核酸包埋效果好，与固相的粘附效果好，能够抵抗剧烈颠簸而不脱落，接触溶液后可立即崩解，溶解效果好，不影响后续的扩增反应(对扩增特异性及灵敏度无影响)。本发明还保护一种靶物质检测装置，是通过以上任一所述核酸封装试剂将用于检测靶物质的引物和探针包埋于反应装置内得到的。具体来说，所述靶物质检测装置中，用于检测靶物质的引物和探针包埋于反应装置的盖内侧。所述靶物质为生物，具体可为微生物，更具体可为病毒，例如寨卡病毒。所述用于检测靶物质的引物和探针具体可为基于核酸序列依赖扩增技术的引物探针组。所述用于检测靶物质的引物和探针具体可为基于核酸序列依赖扩增技术的以序列表的序列4第1至177位核苷酸为靶序列的引物探针组。所述用于检测靶物质的引物和探针具体可为基于核酸序列依赖扩增技术的以序列表的序列4为靶序列的引物探针组。所述靶物质检测装置的制备方法具体如下：将所述核酸封装试剂、所述引物、所述探针和水(优选无菌水)混合，得到包埋液；取反应装置，在每个反应管的管盖内面滴加所述包埋液，然后冷冻干燥，然后将反应管的管盖盖到反应管的管体上。所述包埋液中，封装试剂的浓度具体可为0.1g/100ml，引物的浓度具体可为2μM，探针的浓度具体可为1μM。具体来说，每个反应管的管盖内面滴加2μl所述包埋液。本发明还保护一种寨卡病毒检测装置，是通过以上任一所述核酸封装试剂将引物ZIKV-F、引物ZIKV-R和探针ZIKV-P包埋于反应装置内得到的；所述引物ZIKV-F为如下(a1)或(a2)；(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物ZIKV-R为如下(a3)或(a4)；(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述探针ZIKV-P的核苷酸序列为如下(a5)或(a6)；(a5)如序列表的序列3所示的单链DNA分子；(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子。所述探针ZIKV-P，5'末端具有荧光基团FAM，3’末端具有淬灭基团BHQ2。具体来说，所述寨卡病毒检测装置中，用引物ZIKV-F、引物ZIKV-R和探针ZIKV-P包埋于反应装置的盖内侧。所述寨卡病毒检测装置的制备方法具体如下：将所述核酸封装试剂、所述引物、所述探针和水(优选无菌水)混合，得到包埋液；取反应装置，在每个反应管的管盖内面滴加所述包埋液，然后冷冻干燥，然后将反应管的管盖盖到反应管的管体上。所述包埋液中，封装试剂的浓度具体可为0.1g/100ml，引物ZIKV-F的浓度具体可为2μM，引物ZIKV-R的浓度具体可为2μM，探针ZIKV-P的浓度具体可为1μM。具体来说，每个反应管的管盖内面滴加2μl所述包埋液。以上任一所述反应装置具体可为PCR反应管，可为单独的PCR反应管，也可为联排的PCR反应管(例如八连排的PCR反应管)。以上任一所述反应装置也可为其它单独的或联排的具有特定属性的反应管。所述特定属性指的是薄壁、管盖高透光。本发明还保护一种检测靶物质的试剂盒，包括以上所述靶物质检测装置。本发明还保护一种用于检测寨卡病毒的试剂盒，包括以上所述寨卡病毒检测装置。以上任一所述试剂盒还包括扩增反应液BQ和酶混合液EQ。扩增反应液BQ：溶剂为pH7.8-8.5、50-200mM的Tris-HCl缓冲液；溶质及其浓度如下：1-2mMdNTP(即dATP、dTTP、dCTP和dGTP的浓度均为1-2mM)、2-4mMrNTP(即rATP、rTTP、rCTP和rGTP的浓度均为2-4mM)、40-60mMDTT、40-80mMMgCl2、150-450mMKCl、10％-20％(体积百分含量)DMSO、0.5-1.5M山梨糖醇。酶混合液EQ：溶剂为水；溶质及其浓度如下，AMV逆转录酶0.5-1U/μl、T7RNA聚合酶1.5-5U/μl、核糖核酸酶H0.05-0.5U/μl、焦磷酸酶0.4-0.6U/μl、RNA酶抑制剂4-6U/μl、BSA0.4-0.6μg/μl。扩增反应液BQ具体可为：溶剂为pH8.0、100mM的Tris-HCl缓冲液；溶质及其浓度如下：2mMdNTP(即dATP、dTTP、dCTP和dGTP的浓度均为2mM)、4mMrNTP(即rATP、rTTP、rCTP和rGTP的浓度均为4mM)、50mMDTT、60mMMgCl2、300mMKCl、15％(体积百分含量)DMSO、1M山梨糖醇。酶混合液EQ具体可为：溶剂为水；溶质及其浓度如下，AMV逆转录酶0.8U/μl、T7RNA聚合酶3.5U/μl、核糖核酸酶H0.3U/μl、焦磷酸酶0.5U/μl、RNA酶抑制剂5U/μl、BSA0.5μg/μl。以上任一所述用于检测寨卡病毒的试剂盒还包括阳性质控品和/或阴性质控品。所述阳性质控品为含有寨卡病毒标准品RNA(单链RNA分子，如序列表中的序列4所示)的核酸溶液。所述核酸溶液中，寨卡病毒标准品RNA的浓度具体为104copies/μl。所述阴性质控品为确定不含寨卡病毒的灭活的临床阴性样本。本发明还保护一种用于检测寨卡病毒的引物探针组合，由所述引物ZIKV-F、所述引物ZIKV-R和所述探针ZIKV-P组成。本发明还保护以上任一所述寨卡病毒检测装置、以上任一所述用于检测寨卡病毒的试剂盒或所述用于检测寨卡病毒的引物探针组合的应用，为如下(b1)或(b2)：(b1)检测寨卡病毒；(b2)检测待测样本中是否含有寨卡病毒。应用所述用于检测寨卡病毒的试剂盒鉴定待测病毒是否为寨卡病毒的方法如下：(1)取用于检测寨卡病毒的反应装置，每个反应管加入13μl扩增反应液BQ、2μl酶混合液EQ和5μl待测溶液，盖好管盖，瞬时离心，然后置于41℃的金属浴中孵育5min，迅速取出，将管底的液体倒置于管盖上，进行混匀，瞬时离心，然后置于41℃的金属浴中孵育2min；(2)完成步骤(1)后，将用于检测寨卡病毒的反应装置置于ABIPrism7500荧光PCR仪中，进行如下设置：检测通道Reporter设为FAM，Quencher设为None，参比荧光设为None；反应程序：41℃恒温50min；如果显示S型的阳性扩增曲线，待测病毒候选为寨卡病毒；如果不显示S型的阳性扩增曲线，待测病毒候选为非寨卡病毒。应用所述用于检测寨卡病毒的试剂盒鉴定检测待测样本中是否含有寨卡病毒的方法如下：(1)取用于检测寨卡病毒的反应装置，每个反应管加入13μl扩增反应液BQ、2μl酶混合液EQ和5μl待测溶液，盖好管盖，瞬时离心，然后置于41℃的金属浴中孵育5min，迅速取出，将管底的液体倒置于管盖上，进行混匀，瞬时离心，然后置于41℃的金属浴中孵育2min；(2)完成步骤(1)后，将用于检测寨卡病毒的反应装置置于ABIPrism7500荧光PCR仪中，进行如下设置：检测通道Reporter设为FAM，Quencher设为None，参比荧光设为None；反应程序：41℃恒温50min；如果显示S型的阳性扩增曲线，待测样本疑似含有寨卡病毒；如果不显示S型的阳性扩增曲线，待测样本疑似不含有寨卡病毒。核酸序列依赖扩增技术，是由一对引物介导的、在体外特异性并连续均一的对单链RNA进行恒温扩增的过程。其在41℃恒温条件下，1h即可将模板RNA扩增约109-1012倍，而通常的PCR反应需要2-3h。核酸序列依赖扩增技术可检测到溶液中低于10genecopies/μl的痕量靶标，而PCR的检测限一般在100genecopies/μl左右。因此，核酸序列依赖的扩增技术无论是扩增效率还是检测灵敏度都高于RT-PCR技术。核酸序列依赖扩增技术的反应仅需要一个41℃的恒温条件，水浴锅即可满足反应要求，不需要复杂的升降温等常规PCR所依赖的温控设备，因此核酸序列依赖扩增技术的仪器成本非常低廉。与相应的检测技术结合(如实时荧光技术)，核酸序列依赖扩增技术可以在线查看扩增结果。核酸序列依赖扩增技术目前存在操作流程复杂、难以均一稳定控制的问题。现有技术中，核酸序列依赖扩增技术操作过程需先配制好反应Buffer，然后加入模板，在41℃温育3-5min后，保持41℃条件加入扩增所用的酶混合液，这个过程不仅大大增加了操作复杂度，需熟练操作，不易控制，而且此过程严重违反了分子生物学“洁净区配制反应体系→转至模板区加模板→转至污染区进行扩增反应”的线性流程，这个操作过程需要在污染区打开反应管的盖子且需快速进行操作，然后再进入正常的扩增过程，该操作极容易引入污染，引发假阳性结果，且过程繁琐。采用本发明提供的靶物质检测装置，引物探针借助封装试剂包埋于反应装置的盖内侧，使用时直接将扩增反应液以及酶混合液以及待测溶液加入到反应装置内(引物探针包埋于盖内侧，因此与反应体系不接触，不启动扩增反应)，41℃温育后无需开盖，只需将反应装置倒置使反应体系与盖内侧接触，引物探针即可溶于反应体系中，离心后即可进行上机操作。本发明提供的靶物质检测装置简化了核酸序列依赖扩增技术恒温扩增的操作流程，有效的避免了在操作过程中的二次开盖造成的污染问题。本发明对于应用核酸序列依赖扩增技术检测靶物质具有重大的应用价值。本发明对于寨卡病毒的检测以及相关疾病的防控具有重大的应用和推广价值。附图说明图1为实施例4的结果。图2为实施例5的结果。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。DTT即二硫苏糖醇。BSA即牛血清白蛋白。AMV逆转录酶：Promega公司，货号M5108。T7RNA聚合酶：Promega公司，货号P4074。核糖核酸酶H：NEB公司，货号M0297S。焦磷酸酶：Sigma公司，货号I5907。RNA酶抑制剂：Promega公司，货号N2611。琼脂糖：Baygene公司，货号162090。人参皂苷：Sigma公司，货号：65839。人参皂苷的化学结构式见式(Ⅰ)。羟丙基纤维素(averageMw～100000)：Sigma公司，货号191884。羟丙基纤维素的化学结构式见式(Ⅱ)。实施例1、封装试剂的制备封装试剂：由5质量份琼脂糖、3质量份皂苷和4质量份羟丙基纤维素钠组成。实施例2、用于检测寨卡病毒的反应装置的制备1、将实施例1制备的封装试剂、引物ZIKV-F、引物ZIKV-R、探针ZIKV-P和无菌水混合，得到包埋液。包埋液中，封装试剂的浓度为0.1g/100ml，引物ZIKV-F的浓度为2μM，引物ZIKV-R的浓度为2μM，探针ZIKV-P的浓度为1μM。引物ZIKV-F：5’-TGCATWGGAGTCAGCAA-3’；引物ZIKV-R：5’-AATTCTAATACGACTCACTATAGGGAGATAGGATCTTACCTCVGCCA-3’；探针ZIKV-P：5’-FAM-CGGACGTCAGGTGGGACYTGGGTTGATGTTGTCTTGGGCCTG-BHQ2-3’。引物ZIKV-F如序列表的序列1所示。引物ZIKV-R如序列表的序列2所示。探针ZIKV-P的核苷酸序列如序列表的序列3所示，5'末端具有荧光基团FAM，3’末端具有淬灭基团BHQ2。以上各个引物和探针的核苷酸序列中，W代表A或T，V代表A或G或C，Y代表C或T。2、取反应装置(八连排的PCR反应管，PCR反应管由管体和管盖组成)，在每个管盖内面滴加2μl步骤1制备的包埋液，然后冷冻干燥，然后将管盖盖到管体上。3、完成步骤2后，取所述反应装置，用铝膜袋进行封装，避光保存(可室温保存6个月)。实施例3、用于检测寨卡病毒的试剂盒的制备一、试剂盒的制备试剂盒由以下组件组成(各个组件独立包装)：(1)实施例2制备的用于检测寨卡病毒的反应装置。(2)扩增反应液BQ：溶剂为pH8.0、100mM的Tris-HCl缓冲液；溶质及其浓度如下：2mMdNTP(即dATP、dTTP、dCTP和dGTP的浓度均为2mM)、4mMrNTP(即rATP、rTTP、rCTP和rGTP的浓度均为4mM)、50mMDTT、60mMMgCl2、300mMKCl、15％(体积百分含量)DMSO、1M山梨糖醇。(3)酶混合液EQ：溶剂为水；溶质及其浓度如下，AMV逆转录酶0.8U/μl、T7RNA聚合酶3.5U/μl、核糖核酸酶H0.3U/μl、焦磷酸酶0.5U/μl、RNA酶抑制剂5U/μl、BSA0.5μg/μl。(4)阳性质控品：含有寨卡病毒标准品RNA(单链RNA分子，如序列表中的序列4所示)的核酸溶液，寨卡病毒标准品RNA的浓度为104copies/μl。(5)阴性质控品：确定不含寨卡病毒的灭活的临床阴性样本。二、试剂盒的使用方法待测溶液可为溶液Ⅰ或溶液Ⅱ。溶液Ⅰ：取待测病毒，提取总RNA，得到的RNA溶液或其稀释液即为溶液Ⅰ。溶液Ⅱ：取待测样本(例如血清或血浆)，提取总RNA，得到的RNA溶液或其稀释液即为溶液Ⅱ。1、取用于检测寨卡病毒的反应装置，每个反应管加入13μl扩增反应液BQ、2μl酶混合液EQ和5μl待测溶液，盖好管盖，瞬时离心，然后置于41℃的金属浴中孵育5min，迅速取出，将管底的液体倒置于管盖上，进行混匀，瞬时离心，然后置于41℃的金属浴中孵育2min。2、完成步骤1后，将用于检测寨卡病毒的反应装置置于ABIPrism7500荧光PCR仪中，进行如下设置：检测通道Reporter设为FAM，Quencher设为None，参比荧光设为None；反应程序：41℃恒温50min。如果显示S型的阳性扩增曲线，待测病毒候选为寨卡病毒或待测样本疑似含有寨卡病毒。如果不显示S型的阳性扩增曲线，待测病毒候选为非寨卡病毒或待测样本疑似不含有寨卡病毒。实施例4、封装试剂对引物灵敏度的影响取实施例3的步骤一制备的试剂盒中的阳性质控品，用无菌水梯度稀释，得到核酸浓度为104copies/μl的稀释液S1、103copies/μl的稀释液S2、102copies/μl的稀释液S3或101copies/μl的稀释液S4。将稀释液或实施例3的步骤一制备的试剂盒中的阴性质控品(用S5表示)作为待测溶液。一、试验组处理取待测溶液，采用实施例3的步骤一制备的试剂盒按照实施例3的步骤二的方法进行检测。二、对照组处理1、取PCR反应管，加入13μl扩增反应液Q、5μl待测溶液，盖好管盖，瞬时离心，然后置于41℃的金属浴中孵育5min，然后加入2μl酶混合液EQ。13μl扩增反应液Q中含有4×10-6μmol引物ZIKV-F、4×10-6μmol引物ZIKV-R和2×10-6μmol探针ZIKV-P，其它溶质及其浓度均同实施例3中的扩增反应液BQ。2、完成步骤1后，将PCR反应管置于ABIPrism7500荧光PCR仪中，进行如下设置：检测通道Reporter设为FAM，Quencher设为None，参比荧光设为None；反应程序：反应程序：41℃恒温50min。三、结果分析结果见图1。试验组处理的灵敏度为50copies/体系。对照组处理的灵敏度也为50copies/体系。结果表明，采用实施例1制备的封装试剂将引物和探针进行包埋，对扩增灵敏度没有影响，即封装试剂对扩增反应的灵敏度没有影响。实施例5、特异性分析待测病毒如下(12种常见病毒)：寨卡病毒、基孔肯雅病毒、乙型肝炎病毒、EB病毒、麻疹病毒、禽流感H5型病毒、禽流感H7型病毒、登革热病毒Ⅰ型、登革热病毒Ⅱ型、登革热病毒Ⅲ型、登革热病毒Ⅳ型或黄热病毒。提及寨卡病毒的文献：张硕、李德新；寨卡病毒与寨卡病毒病；病毒学报，2016年1月，第32卷第1期，121-123。提及基孔肯雅病毒的文献：汪玉娇，张云波，段新亚，汪亚玲，赵桂萍；基孔肯雅病毒感染的诊断技术研究进展；《临床检验杂志》,2012(7):522-524。提及乙型肝炎病毒的文献：张娟，陈建宗，张金平，贾新，蒋蔚峰；黄芪甲甙体外抗乙型肝炎病毒的作用；第四军医大学,2008,28(24):2291-2293。提及EB病毒(人类疱疹病毒4型)的文献：吴凡，翟维维，葛柳莹，祁燕伟，高辉；245例人类免疫缺陷病毒感染者唾液中人类疱疹病毒1-4型的检测情况分析；《华西口腔医学杂志》,2012,30(5):514-517。本实施例中所用的麻疹病毒为麻疹病毒L4株，提及它的文献：赵大鹏，姚为民，吴晓娟，戚凤春，汪春义；麻疹病毒L4株基因组全序列的测定；全国生物制品学术会议,2007。本实施例中所用的禽流感H5型病毒为H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Guangdong/S1322/2010(DK/GD/S1322/2010)，提及它的文献：卢昆鹏，崔鹏飞，张芳，王晶，肖红波；H5亚型禽流感病毒HA蛋白单克隆抗体的制备与鉴定；《中国兽医科学》,2015(5):453-457。本实施例中所用的禽流感H7型病毒为H7N2亚型禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)A/Chicken/Hebei/1/2002，提及它的文献：王传彬，田克恭，王宏伟，孙明，遇秀玲；我国H_7N_2亚型禽流感病毒CK/HB/1/02株分离鉴定；《中国病毒学》,2005,20(6):632-636。本实施例中所用的登革热病毒Ⅰ型为DEN-1夏威夷株，提及它的文献：舒莉萍，左丽，李永念，郝牧，陈阿英；通用引物检测登革热病毒NS1基因及其酶切分型；《贵阳医学院学报》,2004,29(4):283-286。本实施例中所用的登革热病毒Ⅱ型为DEN-2NGC株，提及它的文献：舒莉萍，左丽，李永念，郝牧，陈阿英；通用引物检测登革热病毒NS1基因及其酶切分型；《贵阳医学院学报》,2004,29(4):283-286。本实施例中所用的登革热病毒Ⅲ型为DEN-3H87株，提及它的文献：舒莉萍，左丽，李永念，郝牧，陈阿英；通用引物检测登革热病毒NS1基因及其酶切分型；《贵阳医学院学报》,2004,29(4):283-286。本实施例中所用的登革热病毒Ⅳ型为DEN-4H241株，提及它的文献：舒莉萍，左丽，李永念，郝牧，陈阿英；通用引物检测登革热病毒NS1基因及其酶切分型；《贵阳医学院学报》,2004,29(4):283-286。提及黄热病毒的文献：郑伟，徐琦，罗鹏，冯娟，郭利川；重组酶介导扩增方法快速检测黄热病毒；《中国卫生检验杂志》,2016(1):1-3。1、取待测病毒，提取核酸(如果待测病毒为DNA病毒，提取基因组DNA；如果待测病毒为RNA病毒，提取总RNA)，作为待测溶液。2、取待测溶液，采用实施例3的步骤一制备的试剂盒按照实施例3的步骤二的方法进行检测。结果见图2。待测病毒为寨卡病毒时，显示S型的阳性扩增曲线，为阳性结果。待测病毒为其它11种病毒时，均不显示S型的阳性扩增曲线，为阴性结果。阴性质控品不显示S型的阳性扩增曲线，为阴性结果。结果表明，本发明提供的试剂盒对11种常见病毒均不存在非特异性扩增，特异性良好。结果表明，采用实施例1制备的封装试剂对引物和探针进行包埋，不影响其扩增特异性。实施例6、临床样本的检测待测溶液为疑似寨卡病毒感染病人的血清样本(共25例)，血清样本由厄瓜多尔疾控中心提供。取血清样本，提取总RNA，得到核酸溶液。将核酸溶液分为两份。一份采用实施例3的步骤一制备的试剂盒按照实施例3的步骤二的方法进行检测。另一份采用实时荧光定量RT-PCR的方法进行检测。实时荧光定量RT-PCR所用的引物探针如下：ZIKV-F’：5’-CCGCTGCCCAACACAAG-3’ZIKV-R’：5’-CCACTAACGTTCTTTTGCAGACAT-3’ZIKV-P’：5’-FAM-CGGACAGCCTACCTTGACAAGCAGTCAGACACTCAAGCCTG-BHQ1-3’。结果见表1。表1采用实施例3的步骤一制备的试剂盒采用实时荧光定量RT-PCR阳性例数1918阴性例数67对于每一个采用实时荧光定量RT-PCR检测结果为阳性的样本采用本发明的试剂盒检测的结果也为阳性。另外，对于少数样本而言，采用实时荧光定量RT-PCR检测结果为阴性，但采用本发明试剂盒检测的结果为阳性，对这些样本进行病毒培养验证，结果表明本发明提供的试剂盒的检测结果正确。本发明提供的试剂盒对相应病毒的检出率高于实时荧光定量RT-PCR，且其检测结果准确可靠。序列表<120>一种核酸封装试剂及其应用<130>GNCYX161841<160>4<210>1<211>17<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(6)<223>w=aort<400>1tgcatwggagtcagcaa17<210>2<211>47<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(43)<223>v=aorgorc<400>2aattctaatacgactcactatagggagataggatcttacctcvgcca47<210>3<211>42<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(18)<223>y=cort<400>3cggacgtcaggtgggacytgggttgatgttgtcttgggcctg42<210>4<211>1506<212>RNA<213>人工序列<400>4aucaggugcauuggagucagcaauagagacuucguggagggcaugucaggugggaccugg60guugauguugucuuggaacauggaggcugcguuaccgugauggcacaggacaagccaaca120gucgacauagaguuggucacgacgacgguuaguaacauggccgagguaagauccuauugc180uacgaggcaucgauaucggacauggcuucggacagucguugcccaacacaaggugaagcc240uaccuugacaagcaaucagacacucaauaugucugcaaaagaacauuaguggacagaggu300uggggaaacgguuguggacuuuuuggcaaagggagcuuggugacaugugccaaguuuacg360uguucuaagaagaugaccgggaagagcauucaaccggaaaaucuggaguaucggauaaug420cuaucagugcauggcucccagcauagcgggaugauuggauaugaaacugacgaagauaga480gcgaaagucgagguuacgccuaauucaccaagagcggaagcaaccuugggaggcuuugga540agcuuaggacuugacugugaaccaaggacaggccuugacuuuucagaucuguauuaccug600accaugaacaauaagcauugguuggugcacaaagagugguuucaugacaucccauugccu660uggcaugcuggggcagacaccggaacuccacacuggaacaacaaagaggcauugguagaa720uucaaggaugcccacgccaagaggcaaaccgucgucguucuggggagccaggaaggagcc780guucacacggcucucgcuggagcucuagaggcugagauggauggugcaaagggaaggcug840uucucuggccauuugaaaugccgccuaaaaauggacaagcuuagauugaagggcguguca900uauuccuugugcacugcggcauucacauucaccaaggucccagcugaaacacugcaugga960acagucacaguggaggugcaguaugcagggacagauggacccugcaagaucccaguccag1020auggcgguggacaugcagacccugaccccaguuggaaggcugauaaccgccaaccccgug1080auuacugaaagcacugagaacucaaagaugauguuggagcuugacccaccauuuggggau1140ucuuacauugucauaggaguuggggacaagaaaaucacccaccacuggcauaggaguggu1200agcaccaucggaaaggcauuugaggccacugugagaggcgccaagagaauggcaguccug1260ggggauacagccugggacuucggaucagucggggguguguucaacucacuggguaagggc1320auucaccagauuuuuggagcagccuucaaaucacuguuuggaggaauguccugguucuca1380cagauccucauaggcacgcugcuagugugguuagguuugaacacaaagaauggaucuauc1440ucccucacaugcuuggcccuggggggagugaugaucuuccucuccacggcuguuucugcu1500gacgug1506当前第1页1 2 3