本发明涉及一种老虎素的制备方法。
背景技术：
：老虎素tigecycline，对有抗药性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、抗万古霉素肠球菌、耐多药肺炎链球菌、多重抗药性结核杆菌等均有效，已被批准用于18岁及18岁以上复杂皮肤和皮肤结构感染或者复杂腹内感染患者的治疗，包括复杂阑尾炎、烧伤感染、腹内脓肿、深部软组织感染及渍疡感染。随着化合物专利在美国等地的到期，国际上对老虎素的需求剧增，但目前，老虎素获批的剂型仅有冻干粉，作为注射剂，其对产品质量要求极高，尤其需要严控杂质，一个常见的杂质是C4异构体杂质。在老虎素的合成过程中，为了减少这种异构体的转变，主流文章均指出，老虎素应维持pH值在6以上的环境。经调研，原研公司制备老虎素所用的原料是米诺环素，国内公司使用的亦是米诺环素，尽管有小公司披露可使用去甲金霉素的，但多篇文献，如CN104230744，指出使用去甲金霉素需要7步，所用试剂腐蚀性强、污染较大，不适合大规模生产。事实上，CN101450916根本未披露最终产物的纯度、摩尔收率。以米诺环素为原料时，通常先通过硝化、还原、盐转换制得9-氨基米诺环素盐酸盐，然后通过两步或一步反应接上N-叔丁基甘氨酰侧链，其中：两步反应是先与酰卤进行酰化反应，再与叔丁胺反应制得老虎素；一步反应通常是与N-叔丁基甘氨酰氯缩合得到老虎素，CN102391148则通过N-叔丁基甘氨酸在氨基酸缩合剂作用下得到老虎素，但本申请人未能重现。经查询合成老虎素的文献，从机理上，有文章指出氨基酸缩合剂会导致叔丁基甘氨酸自已发生聚合反应，CN104230744则直接点名指出，CN102391148使用缩合剂“副产物较难分离，对产品质量造成影响，直接使用有机酸也会提高产品中异构体杂质的含量”，初步发现，CN102391148在缩合得老虎素后先调节pH3.0～4.5(这与主流文献记载的pH应在6以上不符)，再调pH至7.0～7.5，对此中性体系进一步纯化的操作中还加入乳糖，总之，诸多操作复杂和反常。CN104230744提供的工艺避免了使用缩合剂，而通过与N-叔丁基甘氨酸的酸酐缩合制得老虎素。技术实现要素：本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种新的纯度高、收率好、适合工业化应用的老虎素制备方法。本发明的制备方法包括：N-叔丁基甘氨酸,在缩合剂碳酰二亚胺与羰基二咪唑存在下，与9-氨基山环素缩合，再经硝化、还原甲基化，制得老虎素；9-氨基山环素可直接购买或通过氨基化山环素制得；缩合反应中可加入缚酸剂，如二异丙基乙胺，缚酸剂可预先处理N-叔丁基甘氨酸以使反应更快进行。优选地，所述碳酰二亚胺与羰基二咪唑的摩尔比为1:1～5，如为1:3。优选地，所述缩合剂与N-叔丁基甘氨酸的摩尔比为1:1～3，更优选为1:1.5。优选地，所述缩合剂碳酰二亚胺为N,N'-二异丙基碳二亚胺，羰基二咪唑为N,N’-羰基二咪唑。作为示例，所述缩合反应物料摩尔比为碳酰二亚胺：羰基二咪唑：N-叔丁基甘氨酸：9-氨基山环素＝1:3:6:4。优选地，所述缩合反应的温度为10～30℃，更优选为20℃。优选地，所述9-氨基山环素与N-叔丁基甘氨酸的摩尔比为1:1.2～1.8，更优选为1:1.5。优选地，所述硝化反应在硝酸钾、浓硫酸作用下进行。优选地，所述还原甲基化反应在Pd/C、甲醛和氢气存在下进行，所述还原甲基化反应的温度可为10～30℃，优选为20℃；氢气气压为1.5～2.5atm，优选为2atm。优选地，所述还原甲基化反应后，是通过将所得反应液(可预设置pH为中性)加入到甲醇与丙酮的混合液中析晶而制得老虎素：甲醇与丙酮的体积比可为1.2～1.8:1，优选为1.5:1；析晶温度可在0℃以下，析晶时间可为1h(根据固体析出速度可调整)。本发明尝试改采用9-氨基山环素为原料，并筛选特定的复合缩合剂实现了直接缩合，这些做法均克服了现有技术的偏见，令人意外地发现，本发明无需复杂的处理过程即得到高纯度的产品，反应步骤少，收率大大提高。具体实施方式实施例1:100ml二异丙基乙胺中加入12mmol的N-叔丁基甘氨酸，搅拌下加入2mmol的N,N'-二异丙基碳二亚胺(下称缩合剂A)、2mmol的N,N’-羰基二咪唑(下称缩合剂B)和5mmol的三乙胺，继续搅拌20min，接着加入8mmol的9-氨基山环素，20℃下搅拌反应(HPLC监测反应进度)，缩合反应3h后，冰浴，然后加入40ml硫酸(硫酸摩尔量为80mmol)，分批缓慢分批加入KNO3(共计15mmol)，继续在冰浴条件下搅拌反应1h，滴加异丙醚至固体充分析出，氮气保护下过滤，得滤饼；将滤饼转移到200ml乙二醇甲醚溶液(水的体积分数为10％)中，加入1g担载量10％的Pd/C、30ml质量分数40％的甲醛水溶液，在20℃、2atm的氢气压力下搅拌反应10h，过滤，将滤液调节pH至中性后浓缩，搅拌下将滤液缓慢加到120ml甲醇与80ml丙酮的混合液中，降温至0℃，继续搅拌1h使固体充分析出，过滤后用甲醇淋洗，干燥后得到橙色固体4.139g，检测确定为老虎素，对照品检测得老虎素、其C4差向异构体含量为99.5％、0.4％，计算得老虎素摩尔收率为88％。MS(M+H+)：5861H-NMR(DMSO-d6+D2O)：δ1.1(s，9H)，1.4(dd，1H)，1.9-2.0(m，1H)，2.2(t，1H)，2.4-2.5(m，2H)，2.7-2.9(m，1H)，3.1-3.2(dd，1H)，3.4(s，2H)，3.6(s，12H)，8.2(s，1H，8H)。实施例2:将实施例1的缩合剂B(N,N’-羰基二咪唑)的用量增加至6mmol或10mmol，其他条件相应不变，所得老虎素产物的对比如下：缩合剂用量老虎素含量C4杂质含量摩尔收率2mmolA+6mmolB99.9％0.05％95％2mmolA+10mmolB99.0％0.5％85％实施例3：将实施例1缩合剂改为仅用12mmol的N,N'-二异丙基碳二亚胺，不用其他缩合剂，结果发现最终所得产物中老虎素的含量仅85％，C4杂质含量达2％，总收率经计算约75％。实施例4：不使用实施例1中的缩合剂，而将实施例1的N-叔丁基甘氨酸替换为其酸酐，直接进行缩合，结果发现缩合反应需要数十小时，最终所得产物中老虎素的含量仅70％，C4杂质含量达4％，总收率经计算约50％。当前第1页1 2 3