本发明涉及真菌提取领域，尤其涉及一种禾本科植物茎髓中内生真菌的提取方法。
背景技术：
禾本科(学名：gramineae)别称早熟禾科，分为620多属，10000多种，中国有190余属约1200种。地球陆地大约有20％覆盖着草，禾本科包括多种俗称作"某某草"的植物。但是必须指出，不是所有的草都是禾本科植物；同样，并不是所有禾本科植物都是低矮的"草"，就如竹子，也可以高达十数米，连片成林。禾本科包含了许多重要的粮食作物。
内生真菌可以侵染多个禾本科植物，并产生生物碱。目前，还缺少从禾本科植物茎髓中提取内生真菌的方法。
技术实现要素：
发明目的：针对现有技术的不足与缺陷，本发明提供一种真菌提取效率高、杂菌含量少、操作简单的禾本科植物茎髓中内生真菌的提取方法。
技术方案：本发明所述的禾本科植物茎髓中内生真菌的提取方法，包括下述步骤，
(1)将禾本科植物植株整体取回操作室，将植株剪成5至8厘米的小段，去除茎秆外部的叶片，取茎秆部分；
(2)将步骤(1)获得的茎秆小段放入75％酒精溶液中清洗60至100秒，然后放入1％次氯酸钠溶液中清洗30至40秒，使用清水清洗2至3次后放在无菌纸上干燥待用；
(3)将步骤(2)获得的茎秆小段利用解剖刀纵向切开，使茎髓裸露；
(4)利用镊子将茎髓取出，并放置在玻璃皿的培养基上，每个玻璃皿选择3至4个位置放置茎髓；
(5)将玻璃皿进行密封，并放置在暗室25摄氏度的环境下培养5至6天，剔除其他微生物菌落，继续培养满10至15天；
(6)利用接种针将内生真菌菌落挑出进行单独培养，获得内生真菌菌株。
其中，所述的步骤(2)中无菌纸通过预先的高温高压灭菌操作。
其中，所述的步骤(3)中解剖刀通过预先的高温灭菌操作。
其中，所述的步骤(4)中镊子通过预先的高温灭菌操作。
其中，所述的步骤(5)中玻璃皿通过密封条进行密封。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有以下显著优点：本发明禾本科植物茎髓中内生真菌的提取方法真菌提取效率高、杂菌含量少、操作简单。
具体实施方式
实施例1：
本实施例的禾本科植物茎髓中内生真菌的提取方法，包括下述步骤，
(1)将禾本科植物植株整体取回操作室，将植株剪成5厘米的小段，去除茎秆外部的叶片，取茎秆部分；
(2)将步骤(1)获得的茎秆小段放入75％酒精溶液中清洗60秒，然后放入1％次氯酸钠溶液中清洗30秒，使用清水清洗2次后放在预先高温高压灭菌的无菌纸上干燥待用；
(3)将步骤(2)获得的茎秆小段利用预先高温灭菌的解剖刀纵向切开，使茎髓裸露；
(4)利用预先高温灭菌的镊子将茎髓取出，并放置在玻璃皿的培养基上，每个玻璃皿选择3个位置放置茎髓；
(5)将玻璃皿通过密封条进行密封，并放置在暗室25摄氏度的环境下培养5至6天，剔除其他微生物菌落，继续培养满10天；
(6)利用接种针将内生真菌菌落挑出进行单独培养，获得内生真菌菌株。
实施例2：
本实施例的禾本科植物茎髓中内生真菌的提取方法，包括下述步骤，
(1)将禾本科植物植株整体取回操作室，将植株剪成8厘米的小段，去除茎秆外部的叶片，取茎秆部分；
(2)将步骤(1)获得的茎秆小段放入75％酒精溶液中清洗100秒，然后放入1％次氯酸钠溶液中清洗40秒，使用清水清洗3次后放在预先高温高压灭菌的无菌纸上干燥待用；
(3)将步骤(2)获得的茎秆小段利用预先高温灭菌的解剖刀纵向切开，使茎髓裸露；
(4)利用预先高温灭菌的镊子将茎髓取出，并放置在玻璃皿的培养基上，每个玻璃皿选择4个位置放置茎髓；
(5)将玻璃皿通过密封条进行密封，并放置在暗室25摄氏度的环境下培养5至6天，剔除其他微生物菌落，继续培养满15天；
(6)利用接种针将内生真菌菌落挑出进行单独培养，获得内生真菌菌株。
实施例3：
本实施例的禾本科植物茎髓中内生真菌的提取方法，包括下述步骤，
(1)将禾本科植物植株整体取回操作室，将植株剪成6厘米的小段，去除茎秆外部的叶片，取茎秆部分；
(2)将步骤(1)获得的茎秆小段放入75％酒精溶液中清洗80秒，然后放入1％次氯酸钠溶液中清洗35秒，使用清水清洗3次后放在预先高温高压灭菌的无菌纸上干燥待用；
(3)将步骤(2)获得的茎秆小段利用预先高温灭菌的解剖刀纵向切开，使茎髓裸露；
(4)利用预先高温灭菌的镊子将茎髓取出，并放置在玻璃皿的培养基上，每个玻璃皿选择3个位置放置茎髓；
(5)将玻璃皿通过密封条进行密封，并放置在暗室25摄氏度的环境下培养5至6天，剔除其他微生物菌落，继续培养满12天；
(6)利用接种针将内生真菌菌落挑出进行单独培养，获得内生真菌菌株。