腺病毒体

文档序号:25541930发布日期:2021-06-18 20:38阅读:来源:国知局

技术特征:

1.重组腺病毒核酸,所述重组腺病毒核酸在早期基因中具有突变,其中编码蛋白v的基因和/或编码蛋白vii的基因被置于异源启动子的控制下。

2.根据权利要求1所述的重组腺病毒核酸,其中所述突变为e1a区中的δ24突变和/或e1b区中的δ55k突变。

3.根据前述权利要求中任一项所述的重组腺病毒核酸,其中所述重组腺病毒核酸为条件复制型腺病毒和/或复制缺陷型腺病毒载体的腺病毒核酸。

4.根据前述权利要求中任一项所述的重组腺病毒核酸,其中插入了异源基因。

5.细胞囊泡,所述细胞囊泡包含根据前述权利要求中任一项所述的重组腺病毒核酸。

6.细胞囊泡,所述细胞囊泡包含其中所述编码蛋白v的基因和/或所述编码蛋白vii的基因被置于异源启动子的控制下的重组腺病毒核酸。

7.根据权利要求6所述的细胞囊泡,还包含异源基因。

8.根据权利要求6所述的细胞囊泡,还包含在早期基因中具有突变的腺病毒核酸。

9.根据权利要求7所述的细胞囊泡,包含

-包含其中所述编码蛋白v的基因和/或所述编码蛋白vii的基因被置于异源启动子的控制下的所述重组腺病毒核酸的核酸分子,以及所述异源基因;或者

-包含其中所述编码蛋白v的基因和/或所述编码蛋白vii的基因被置于异源启动子的控制下的所述重组腺病毒核酸的核酸分子,以及包含所述异源基因的核酸分子。

10.细胞囊泡,所述细胞囊泡包含腺病毒蛋白v和/或蛋白vii以及

-包含在早期基因中具有突变的重组腺病毒核酸的核酸分子,和/或

-异源基因。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的重组腺病毒核酸或细胞囊泡,其中所述腺病毒核酸以使得其不再能够产生主要衣壳蛋白中的一种或多种主要衣壳蛋白的方式突变。

12.根据权利要求11所述的重组腺病毒核酸或细胞囊泡,其中编码所述主要衣壳蛋白的晚期基因中的一种或多种晚期基因从所述核苷酸序列部分或完全缺失。

13.根据权利要求1至10中任一项所述的重组腺病毒核酸或细胞囊泡,其中晚期基因中的一种或多种晚期基因被置于表达调节子的控制下,所述表达调节子优选地为用于强力霉素可控基因表达的tet-on或tet-off系统。

14.根据权利要求1至10中任一项所述的重组腺病毒核酸或细胞囊泡,其中所述腺病毒核酸以使得其不再能够被包装在腺病毒衣壳中的方式突变,优选地通过loxp位点侧接腺病毒包装(psi)以建立所述序列的基于cre重组酶的缺失。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的重组腺病毒核酸或细胞囊泡,其中所述异源启动子为早期腺病毒启动子。

16.根据权利要求1至14中任一项所述的重组腺病毒核酸或细胞囊泡,其中所述启动子为蛋白ix的中间启动子。

17.根据权利要求1至14中任一项所述的重组腺病毒核酸或细胞囊泡,其中所述启动子为非腺病毒来源的异源启动子,优选地磷酸甘油酸激酶(pgk)或巨细胞病毒启动子。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的重组腺病毒核酸或细胞囊泡,其中蛋白v和/或蛋白vii与异源分子特别是治疗蛋白、成像蛋白或允许纯化的蛋白融合。

19.根据权利要求18所述的重组腺病毒核酸或细胞囊泡,其中所述异源分子选自包含以下各项的组:绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白、用于磁性分离的亲和标签、snap标签、生物素酰化序列。

20.根据权利要求4至19中任一项所述的重组腺病毒核酸或细胞囊泡,其中所述异源基因编码选自包含以下各项的组的生物分子:前药转化酶,优选地胸苷激酶;细胞因子,优选地gm-csf、il-2或il-12;检查点抑制剂,优选地靶向ctla-4或pd-1;激动性抗体或配体,以刺激免疫细胞,优选地靶向4-1bb、ox40或cd40;重组双特异性t细胞衔接子抗体,优选地bite;微rna、shrns、cas9导引rna、抑制蛋白激酶的肽和刺激抗肿瘤免疫应答的肽。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的重组腺病毒核酸或细胞囊泡,包含与纤维蛋白融合的rgd序列。

22.根据权利要求1至21中任一项所述的重组腺病毒核酸或细胞囊泡,其中所述编码蛋白v的基因和所述编码蛋白vii的基因被置于异源启动子的控制下。

23.细胞,所述细胞包含根据权利要求1至4或11至22中任一项所述的重组腺病毒核酸,所述细胞优选地her911、per.c6或hek293t细胞。

24.产生根据权利要求23所述的细胞的方法,所述方法包括

-在培养基中培养细胞;

-将根据权利要求1至4、11至22中任一项所述的重组腺病毒核酸引入到所述细胞中。

25.重组腺病毒颗粒,所述重组腺病毒颗粒包含根据权利要求1至4、11至22中任一项所述的重组腺病毒核酸。

26.根据权利要求5至22中任一项所述的细胞囊泡,用于治疗疾病。

27.根据权利要求26所述使用的细胞囊泡,其中所述疾病为癌症。

28.根据权利要求26所述使用的细胞囊泡,其中所述疾病为遗传障碍,特别是脑、肝脏或胃肠道的遗传障碍。

29.根据权利要求26所述使用的细胞囊泡,其中所述疾病为阿尔茨海默病、帕金森氏病或关节炎。

30.根据权利要求26所述使用的细胞囊泡,其中所述疾病为感染性疾病。

31.治疗组合物,所述治疗组合物包含根据权利要求5至22中任一项所述的细胞囊泡或根据权利要求25所述的重组腺病毒颗粒以及药学上可接受的载体或囊泡。

32.根据权利要求5至22中任一项所述的细胞囊泡作为用于体外标记组织或细胞培养物和类器官的染料的用途。

33.用于产生细胞外囊泡的方法,所述方法包括:

-在培养基中培养细胞;

-将根据权利要求1至4、11至22中任一项所述的重组腺病毒核酸引入到所述细胞中;

-收获所述细胞外囊泡。

34.用于治疗疾病特别是遗传障碍、癌症或衰老疾病的方法,所述方法包括向对其有需要的受试者施用根据权利要求1至22中任一项所述的重组腺病毒核酸或细胞囊泡或根据权利要求31所述的治疗组合物。

35.用于检测腺病毒核酸的诊断方法,所述诊断方法包括:

-向对其有需要的受试者施用根据权利要求25所述的重组腺病毒颗粒或根据权利要求5至22中任一项所述的细胞囊泡;

-从所述受试者收获体液;

-对细胞囊泡中的所述腺病毒核酸进行定量。

36.用于制备细胞外囊泡的方法,所述方法包括

-在培养基中培养细胞;

-将其中编码蛋白v的基因和/或编码蛋白vii的基因被置于异源启动子的控制下的重组腺病毒核酸引入到所述细胞中;

-将包含早期基因中的突变和/或异源基因的重组腺病毒核酸引入到所述细胞中;

-任选地使包含所述重组腺病毒核酸的所述细胞经受细胞应激;

-收获所述细胞外囊泡。

37.细胞,所述细胞包含其中编码蛋白v的基因和/或编码蛋白vii的基因被置于异源启动子的控制下的重组腺病毒核酸,所述细胞优选地为her911、per.c6或hek293t细胞。

38.重组腺病毒核酸,其中编码蛋白v的基因和/或编码蛋白vii的基因被置于异源启动子的控制下,其中所述异源启动子为蛋白ix的早期腺病毒启动子或中间启动子。

39.重组腺病毒核酸,其中编码蛋白v的基因和编码蛋白vii的基因被置于异源启动子的控制下。


技术总结
本发明涉及其中编码蛋白V的基因和/或编码蛋白VII的基因被置于异源启动子的控制下的重组腺病毒核酸,涉及其中腺病毒核苷酸序列以使其不再能够产生外壳蛋白中的一种或多种外壳蛋白的方式突变的重组腺病毒核酸,涉及填充有此类腺病毒物质的细胞囊泡、提供有此类腺病毒物质的细胞,并且涉及它们的方法和用途。

技术研发人员:杰罗恩·德夫里吉
受保护的技术使用者:鹿特丹伊拉斯姆斯大学医疗中心
技术研发日:2019.09.17
技术公布日:2021.06.18
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