具有抗肿瘤活性的嵌合分子及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及癌症药物领域，公开了一种嵌合分子及其制备方法，以及化合物及其药用组合物在治疗癌症中的应用。具体涉及一种对parp-1靶点有抑制作用的嵌合分子。


背景技术：

2.调控蛋白表达水平有三个基本层次：第一种为dna水平，通过knock-out基因敲除，使得表达目标蛋白的dna失活；第二种为mrna水平,通过目标蛋白的mrna结合失活，而抑制蛋白的表达；第三种为蛋白质水平，通过对靶蛋白的修饰，如甲基化等，调控其活性。本发明涉及的嵌合分子是基于蛋白水平，通过调节靶蛋白的降解，用于治疗疾病。
3.parp-1嵌合分子是双功能分子，由e3泛素连接酶识别基团、靶蛋白(parp-1)识别基团、连接基团构成；其中e3泛素连接酶(其中数百种在人类中已知)赋予底物对于泛素化的特异性，并且由于其对于某些蛋白质底物的特异性，比通用蛋白酶体抑制剂更吸引人。现有技术已知具有治疗潜力的e3连接酶是cereblon，是由人类cb基因编码的蛋白，cb同源基因是高度保守的，这表明它在生理学中的重要性。cereblon与损伤dna结合蛋白1(ddbl)、cullin-4a(cul4a)以及cullin-1调节器(roci)组成e3泛素连接酶复合体，该复合体能泛素化一系列蛋白，但具体机制尚不清楚。cereblon泛素化靶蛋白导致成纤维细胞生长因子8(fgfb)和成纤维细胞生长因子10(fgf10)增多，说明泛素化酶复合体对于胚胎肢体生长十分重要。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(adp-ribose)polymerases，parp]是一类广泛存在于真核细胞中的核酶，具有介导dna修复以及维持基因组功能完整性等功能。迄今研究发现，parp酶家族至少有18个成员，parp-1在各亚型中含量最高，它在细胞内adp-核糖基化过程中发挥着90％以上的作用，并且在真核生物中具有高度进化保守性，对其研究也最为深入。parp-1通过介导腺苷二磷酸核糖(adp-核糖)聚合，并将其从烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad+)转移到受体蛋白，参与单链损伤dna的碱基切除修复通路。为维持正常生理功能，细胞必须有多种dna损伤发现和修复机制，使受损的dna得到及时精确的修复。现在很多抗癌药物都是通过损伤肿瘤细胞的dna达到杀灭肿瘤的目的。但肿瘤细胞能够激活自身dna损伤修复体系进行修复，从而对此类抗癌疗法产生耐性。因此，肿瘤治疗的一个重要途径是阻断dna修复通路。parp-1已成为有效的抗肿瘤靶点。嵌合分子的目标是为了通过parp-1识别基团，特别是parp-1抑制剂与靶蛋白parp-1结合，e3泛素连接酶识别基团导致靶蛋白泛素化，最终使靶蛋白被蛋白酶体降解。
[0004]
从基因水平的功能基因的敲除，再到mrna水平的干扰，有很多手段来研究蛋白表达和调控，嵌合分子能在不影响dna及mrna的表达的情况下，在蛋白水平上直接调控蛋白表达，能够避免基因和rna层面所不可预知的影响，同时嵌合分子靶向降解蛋白，在抗肿瘤效果优于parp-1抑制剂，有可能研制成药物，成为新的治疗方法。


技术实现要素：

[0005]
本发明的目的在于提供一些新嵌合分子或其药学上可接受的盐、水合物或前药。
这些化合物有诱导parp-1降解的功能，可用于制备新型抗肿瘤药物。所述肿瘤可以是但不限于多发性骨髓瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、食管癌、结肠癌、髓母细胞瘤、急性粒细胞白血病、慢性白血病、前列腺癌、肝细胞瘤、肾细胞瘤、宫颈癌、皮肤癌、卵巢癌、结肠癌、神经胶质瘤、甲状腺癌或胰腺癌。本发明的目的还在于提供一种合成新嵌合分子的制备方法。本发明的另一目的在于提供一种含有新嵌合分子的药物制剂。
[0006]
本发明首先提供了如式i所示的化合物或其药学上可接受的盐：
[0007]
a-l-b(i)
[0008]
其中：l是连接基团，a和b上的一个原子被连接基团l的一端所取代；
[0009]
a如式ii所示：
[0010][0011]
其中：
[0012]
(r)n中r是卤素或c1-c8烷基，n选自0-2的整数；
[0013]
r1是氢或c1-c8烷基；
[0014]
r2是氢或c1-c8烷基；
[0015]
上文所述c1-c8烷基是指具有1-8个碳的直链或支链烷基，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、戊基、己基、庚基、辛基等；所述卤素是指氟、氯、溴或碘。
[0016]
所述的b是e3泛素连接酶复合体中cb蛋白的小分子配体，包含酰胺类化合物，邻苯二酰亚胺类化合物，沙利度胺或其衍生物，来那度胺或其衍生物，泊马度胺或其衍生物，部分配体结构通式如下所示：
[0017][0018]
其中：
[0019]
g选自ch2、c＝o、so2、nh或n-烷基；
[0020]
x选自o或s；
[0021]
y选自nh、n-烷基、n-芳基、n-杂环、n-芳杂环、n-环烷基、o或s；
[0022]
z选自-烷基、-环烷基、卤素或氢；
[0023]
r3选自氢、烷基、羟基或-ch
2-杂环；
[0024]
w1，w2，w3，w4独立地任选自氮或碳。
[0025]
所述卤素是指氟、氯、溴或碘，优选氟。
[0026]
所述的l是连接基团，选自非线性链、脂肪族链、芳香链、杂芳环结构链，通过共价键与a和b相连，部分连接基团结构如下通式所示：n任选自0-10的整数，
[0027][0028]
进一步地，所述化合物为如式iii所示的化合物：
[0029][0030]
或其药学上可接受的盐；
[0031]
其中：
[0032]
(r)n中r是卤素或c1-c5烷基，优选是卤素，n选自0-2的整数；
[0033]
r1是氢或c1-c5烷基，优选是氢；
[0034]
r2是氢或c1-c5烷基，优选是氢；
[0035]
l为选自以下结构中的任意一种：n1，n2，n3，n4独立地选自0-6的整数，
[0036][0037]
所述卤素是指氟、氯、溴或碘，优选是氟。
[0038]
所述c1-c5烷基是指具有1-5个碳的直链或支链烷基，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基等。
[0039]
进一步地，所述化合物为如式v所示的化合物：
[0040][0041]
或其药学上可接受的盐；
[0042]
其中：
[0043]
l为选自以下结构中的任意一种：n1，n2，n3，n4独立地任选自0-6的整数，
[0044][0045]
进一步地，所述化合物为如下化合物之一：
[0046]
[0047][0048]
或其药学上可接受的盐。
[0049]
本发明还提供了该化合物及其药学上可接受的盐在制备预防或/和治疗癌症的药物上的应用,该嵌合分子化合物具有parp-1抑制剂或蛋白降解剂的功能，进一步的是，具备parp-1抑制剂和蛋白降解剂的双重功能，能够制备parp-1抑制剂类或蛋白降解剂类药物，具有预防、治疗癌症的功效。
[0050]
本发明还提供了该化合物或其药学上可接受的盐在预防、治疗癌症上的用途，例如对乳腺癌细胞株和/或卵巢癌细胞株有细胞增殖抑制活性。
[0051]
进一步地，本发明涉及的化合物及其药学上可接受的盐可作为唯一的抗肿瘤药物单独使用，或者可以与现已上市的其他活性成分联合使用，用于治疗预防癌症等。
[0052]
进一步地，所述癌症可为但不限于多发性骨髓瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、食管癌、结肠癌、髓母细胞瘤、急性粒细胞白血病、慢性白血病、前列腺癌、肝细胞瘤、肾细胞瘤、宫颈癌、皮肤癌、卵巢癌、结肠癌、神经胶质瘤、甲状腺癌或胰腺癌。
[0053]
本发明还提供了一种药物组合物，包括本发明涉及的化合物或其药学上可接受的盐，加上药学上可接受的辅料。上述辅料包括但不限于可用于药学领域的填充剂、粘合剂、崩解剂、释放控制剂、助流剂、润滑剂、包衣剂等。
[0054]
本发明还提供了一种药物组合物，包括本发明涉及的化合物或其药学上可接受的盐，和其他的活性成分。其他的活性成分优选自：选自抗癌药物、激素类药物、干扰素药物等。
[0055]
本发明还提供了合成所述化合物的制备方法。
[0056]
本发明所述的化合物还包括其异构体、及其前药，还可以是化合物的无定型、无水晶型、水合物晶型、溶剂合物晶型或其多晶型。
[0057]
关于本发明的使用术语的定义：除非另有说明，本文中基团或者术语提供的初始定义适用于整篇说明书的该基团或者术语；对于本文没有具体定义的术语，应该根据公开内容和上下文，给出本领域技术人员能够给予它们的含义。
[0058]
术语“取代”是指分子中的氢原子被其它不同的原子或分子所替换。
[0059]
术语“烷基”是指直链或支链烷基，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、己基、庚基、辛基等；所述c1-c8烷基是指具有1-8个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、己基、庚基、辛基等。所述c1-c5烷基是指具有1-5个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基等。
[0060]
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
[0061]
术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。
[0062]
术语“异构体”是指上述化合物的对映异构体、非对映异构体、消旋异构体、顺反异构体、互变异构体、几何异构体、差向异构体及其混合物。
[0063]
术语“前药”是指化合物的前体衍生物，其可能具有较弱的活性甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)能被转化成相应的生物活性形式。
[0064]
术语“盐”和“药学上可接受的盐”是指上述化合物，与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物，或其立体异构体，与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明，药学上可接受的盐包括与下列酸形成的加成盐：例如具有无机酸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等的盐；或具有有机酸如甲酸、乙酸、丙酸、丙酮酸、乙二酸、丙二酸、丁二酸、反丁烯二酸、顺丁烯二酸、三氟乙酸、马来酸、富马酸、草酸、苯甲酸、乳酸、苹果酸、酒
石酸、柠檬酸、琥珀酸、甲基磺酸、乙磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、对甲苯磺酸等的盐；或具有酸性氨基酸如天冬氨酸、谷氨酸等的盐。
[0065]
除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的质谱、nmr、细胞生物学和药理学等常规方法，除非另有说明，否则本发明的实验材料包括培养基，细胞系，实验耗材为商业购买可获得或经过已知方法配置获得。除非提供具体的定义，否则与本文描述的分析化学、合成化学、以及医学和药物化学等化学上相关的命名和实验室操作和技术，是本领域技术人员已知的。
[0066]
本发明的1h nmr谱是用bruker仪器(400mhz)测定而得，化学位移用ppm表示。使用四甲基硅烷内标准(0.00ppm)。1h nmr的表示方法：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，m＝多重峰，br＝变宽的，dd＝双重峰的双重峰，dt＝三重峰的双重峰。若提供偶合常数时，其单位为hz。
[0067]
本发明的质谱是用lc/ms仪测定得到，离子化方式可为esi或apci；酶联免疫检测仪为tecan公司tecan spark。
[0068]
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0069]
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
[0070]
下文中提供的实施例和制备例进一步阐明和举例说明本发明化合物及其制备方法。应当理解，下述实例和制备例的范围并不以任何方式限制本发明的范围。
[0071]
实施例1、制备化合物cb-1
[0072][0073]
将f(30g，109.4mmol)加入到1000毫升单口瓶中，加入溴乙酸叔丁酯(42.7g，218.8mmol)，加入碳酸钾(30.2g,218.8mmol),加入dmf 300毫升，90℃反应过夜。反应结束后将反应液放冷，倒入1500毫升水中，搅拌，抽滤，得到g 40.1克，直接用于下一步。再将40.1克g加入400毫升甲酸，100毫升水中，回流3个小时。反应结束后将反应液减压浓缩至50毫升，加水500毫升，搅拌，抽滤，晾干。得到cb-1 28.8g,两步总收率78％，白色固体粉末。表征结果如下：1h nmr(300mhz,dmso)δ13.48
–
13.00(m,1h),11.13(s,1h),7.80(dd,j＝8.5,7.3hz,1h),7.48(d,j＝7.0hz,1h),7.39(d,j＝8.4hz,1h),5.11(dd,j＝12.8,5.3hz,1h),5.00(s,2h),3.00
–
2.80(m,1h),2.69
–
2.53(m,2h),2.15
–
1.92(m,1h).。
[0074]
实施例2、制备化合物cb-2
[0075]
(1)中间体化合物h的合成
[0076][0077]
将t(2g，12.5mmol)加入到250毫升圆底烧瓶中，再加入cb-1(4.15g，12.5mmol)，加入三乙胺(3.8g，37.5mmol)，加入hbtu(6.2g，18.75mmol)，加入dmf 100毫升，室温搅拌2个小时，将反应液倒入500毫升水中，用乙酸乙酯萃取3次每次200毫升，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后，使用石油醚/乙酸乙酯柱层析得到h 4.3克，收率72.5％，白色固体粉末。
[0078]
(2)cb-2的合成
[0079][0080]
将h(4.3g，9.1mmol)加入到250毫升圆底烧瓶中，加入二氯甲烷90毫升中，再加入4n氯化氢的二氧六环溶液11.3毫升，室温搅拌30分钟，抽滤，晾干，得到cb-2 3.3克，收率89％，白色固体粉末。表征如下：1h nmr(300mhz,dmso)δ11.12(s,1h),8.31(t,j＝5.7hz,1h),8.04(s,2h),7.81(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.50(d,j＝7.2hz,1h),7.46(d,j＝8.5hz,1h),5.12(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),4.83(s,2h),3.40(dd,j＝12.1,6.2hz,2h),2.97
–
2.80(m,3h),2.67
–
2.53(m,1h),2.10
–
1.94(m,1h).。
[0081]
实施例3：制备化合物c05
[0082]
(1)中间体化合物a的合成
[0083][0084]
向50ml的反应瓶中加入rucaparib(500mg,1.55mmol)和碳酸钾(428mg,3.09mmol)，加10ml dmf，冷却至0℃，缓慢滴加溴乙酸乙酯(260mg,1.70mmol)，室温25℃反应12h。反应完毕后将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化，得到淡黄色固体a，收率68.0％。
[0085]
(2)中间体化合物b的合成
[0086][0087]
向50ml的反应瓶中加入中间体a(200mg,0.50mmol)，3ml甲醇和3ml四氢呋喃，随后加入2mol
·
l-1
lioh水溶液(2.50ml,5.00mmol)，室温反应过夜。反应完毕后，反应液旋干，加入10ml水溶解后，用二氯甲烷萃取，水相用1n盐酸中和至ph为5-6，过滤，滤饼烘干得化合物b，收率79.6％。
[0088]
(3)化合物c05的制备
[0089][0090]
向10ml反应瓶中加入b(30mg,0.08mmol)，cb-2(33mg,0.08mmol)和2ml dmf，加入hobt(12mg,0.09mmol)，edci(18mg,0.09mmol)和diea(50mg,0.40mmol),室温25℃下反应12h。将反应液倒入水中，有固体析出，过滤烘干，得到类白色固体26.90mg，总收率22.5％，c05其结构如下：
[0091][0092]
表征结果如下：1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.65(s,1h),11.11(s,1h),8.25(q,j＝6.4,5.9hz,1h),8.04(q,j＝5.6hz,1h),7.95(t,j＝5.5hz,1h),7.75(t,j＝7.9hz,1h),7.59
–
7.49(m,4h),7.48
–
7.28(m,4h),5.10(dd,j＝12.8,5.5hz,1h),4.75(s,2h),3.59(d,j＝9.0hz,4h),3.26(dt,j＝10.5,5.7hz,3h),2.99
–
2.83(m,4h),2.63
–
2.52(m,2h),2.16(s,3h),2.00(dt,j＝13.5,3.5hz,1h),1.81
–
1.66(m,2h).ms：737.79(m+h+).。
[0093]
实施例4：制备化合物c06
[0094][0095]
向10ml反应瓶中加入rucaparib(40mg，0.12mmol)，cb-1(49mg，0.15mmol)和2ml dmf，加入hobt(17mg，0.14mmol)，edci(24mg,0.14mmol)和diea(68mg，0.52mmol),室温25℃下反应12h。将反应液倒入水中，有固体洗出，过滤烘干，得到类白色固体c06 49.76mg，收率65％。表征如下：1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.68(s,1h),11.11(d,j＝2.8hz,1h),8.26(t,j＝5.7hz,1h),7.95(s,1h),7.80(dd,j＝9.6,6.3hz,1h),7.68
–
7.55(m,2h),7.50
–
7.38(m,4h),7.34
–
7.31(m,1h),5.11(dd,j＝12.6,5.4hz,1h),4.76
–
4.35(m,2h),3.04(s,3h),2.89(d,j＝2.3hz,4h),2.73(d,j＝2.2hz,4h),2.28
–
1.85(m,2h).ms：638.12(m+h+).。
[0096]
实施例5：制备化合物c07
[0097]
(1)中间体化合物cb-3的合成
[0098]
cb-3的合成参照实施例2,用t-1替代t，
[0099][0100]
得到cb-3，
[0101][0102]
表征如下：1h nmr(300mhz,dmso)δ11.12(s,1h),8.23(t,j＝5.8hz,1h),7.96(s,3h),7.82(dd,1h),7.50(d,j＝7.2hz,1h),7.40(d,j＝8.5hz,1h),5.12(dd,j＝12.8,5.5hz,1h),4.81(s,2h),3.29
–
3.12(m,2h),3.00
–
2.82(m,1h),2.83
–
2.71(m,2h),2.65
–
2.53(m,2h),2.13
–
1.97(m,1h),1.86
–
1.65(m,2h).。
[0103]
(2)化合物c07的合成
[0104]
具体制备方法参照实施例3，将实施例3中的cb-2用cb-3替代，参照实施例3得到c07类白色固体28.60mg，总收率24.5％，c07其结构如下：
[0105][0106]
表征结果如下：1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.67(s,1h),11.11(s,1h),8.25(t,j＝5.8hz,1h),8.03(t,j＝5.9hz,1h),7.92(t,j＝6.1hz,1h),7.80(t,j＝7.9hz,1h),7.62
–
7.52(m,4h),7.48(d,j＝7.4hz,1h),7.41(dd,j＝12.5,9.0hz,2h),7.34
–
7.26(m,1h),5.11(dd,j＝12.7,5.5hz,1h),4.79(s,2h),3.62(s,2h),3.15(dq,j＝18.7,6.8hz,6h),3.11
–
3.00(m,2h),2.97(s,2h),2.88(ddd,j＝18.0,13.6,5.4hz,1h),2.62
–
2.55(m,2h),2.21(s,3h),2.01(dd,j＝12.4,6.3hz,1h),1.59(p,j＝6.9hz,2h).ms：751.97(m+h+).。
[0107]
实施例6：制备化合物c08
[0108]
(1)中间体化合物cb-4的合成
[0109]
cb-4的合成参照实施例2,用t-2替代t，
[0110][0111]
得到cb-4,
[0112][0113]
表征如下：1h nmr(300mhz,dmso)δ11.12(s,1h),8.14(t,j＝7.5,4.0hz,1h),8.01(s,2h),7.83(dd,j＝8.4,7.4hz,1h),7.50(d,j＝7.2hz,1h),7.41(d,j＝8.5hz,1h),5.12(dd,j＝12.9,5.4hz,1h),4.79(s,2h),3.16(q,j＝6.1hz,2h),2.99
–
2.84(m,1h),2.83
–
2.68(m,2h),2.67
–
2.53(m,2h),2.17
–
1.96(m,1h),1.76
–
1.32(m,4h).。
[0114]
(2)化合物c08的合成
[0115]
制备c08，具体制备方法参照实施例3，将实施例3中的cb-2用cb-4替代，参照实施例3得到c08类白色固体25.80mg，总收率22.8％，c08其结构如下：
[0116]
[0117]
表征结果如下：1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.67(s,1h),11.12(s,1h),8.25(d,j＝5.9hz,1h),8.07
–
7.92(m,1h),7.81(dt,j＝32.2,7.0hz,2h),7.56(dd，j＝34.3,7.7hz,4h),7.39(ddd，j＝53.3,21.8,8.2hz，4h),5.23
–
5.10(m,1h),4.74(d，j＝11.3hz,2h),3.61(s,2h),3.27
–
2.54(m，12h),2.20(s,3h),1.44(s，4h),1.27
–
0.61(m,2h).ms：766.02(m+h
+
).。
[0118]
实施例7：制备化合物c09
[0119]
(1)中间体化合物cb-5的合成
[0120]
cb-5的合成参照实施例2,用t-3替代t，
[0121][0122]
得到cb-5，
[0123][0124]
表征如下：1h nmr(300mhz，methanol-d4)δ7.82(dd，j＝8.5，7.3hz,1h),7.54(dd,j＝7.4,0.6hz,1h),7.44(dd,j＝8.5,0.6hz,1h),5.14(dd,j＝12.5,5.4hz,1h),4.78(s,2h),3.72
–
3.58(m,12h),3.51(t,j＝5.2hz,2h),3.12(t,j＝5.0hz,2h),2.99
–
2.62(m,3h),2.22
–
2.08(m,1h).。
[0125]
(2)化合物c09的合成
[0126]
制备c09，具体制备方法参照实施例3，将实施例3中的cb-2用cb-5替代，参照实施例3得到c09类白色固体28.40mg，总收率25.8％，c09其结构如下：
[0127][0128]
表征结果如下：1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.69(s,1h),11.12(s,1h),8.26(s,1h),8.00(s,1h),7.81(s,2h),7.63
–
7.19(m,8h),5.11(s,1h),4.77(s,2h),3.80
–
3.18(m,21h),2.97(t,j＝39.3hz,5h),2.11(s,3h),1.76(s,2h).ms：869.97(m+h
+
).。
[0129]
实施例8：制备cb-6
[0130]
(1)中间体化合物j的合成
[0131][0132]
将t(4g，25mmol)加入到250毫升圆底烧瓶中，再加入i(6.9g，25mmol)，加入二异丙基乙基胺(6.5g，50mmol)，加入dmf 80毫升，90℃搅拌2个小时，将反应液倒入500毫升水中，用乙酸乙酯萃取3次每次200毫升，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后，使用石油醚/乙酸乙酯柱层析得到j 4.3克，收率41％，墨绿色固体粉末。
[0133]
(2)中间体化合物cb-6的合成
[0134][0135]
将j(4.3g，10.3mmol)加入到250毫升圆底烧瓶中，加入二氯甲烷90毫升中，再加入4n氯化氢的二氧六环溶液13毫升，室温搅拌30分钟，抽滤，晾干，得到cb-6 3.4克，收率93％，黄色固体粉末。
[0136]
实施例9：制备化合物c10
[0137]
制备c10，具体制备方法参照实施例3，将实施例3中的cb-2用cb-6替代，参照实施例3得到c10类白色固体26.80mg，总收率24.6％，c10其结构如下：
[0138][0139]
表征结果如下：1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.66(s,1h),11.09(s,1h),8.26(t,j＝5.8hz,1h),8.10(t,j＝5.8hz,1h),7.57(dt,j＝8.9,3.7hz,3h),7.50(d,j＝8.2hz,2h),7.42(dd,j＝11.0,2.4hz,1h),7.32(dd,j＝9.0,2.5hz,1h),7.22(d,j＝8.6hz,1h),7.01(d,j＝7.0hz,1h),6.74(t,j＝6.0hz,1h),5.03(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),3.59(s,2h),3.42(s,2h),3.03(q,j＝4.8,3.9hz,2h),2.97(d,j＝8.6hz,3h),2.89(s,1h),2.87
–
2.81(m,1h),2.73(s,1h),2.55(t,j＝3.4hz,1h),2.42(q,j＝7.1hz,2h),2.18(s,3h),2.00
–
1.93(m,1h).ms：679.95(m+h
+
).。
[0140]
实施例10：制备化合物c11
[0141]
(1)中间体化合物cb-7的合成
[0142]
cb-7的合成参照实施例8，用t-1替换t,
[0143][0144]
得到cb-7，
[0145][0146]
表征如下：1h nmr(300mhz,dmso)δ11.00(s,1h),8.01
–
7.75(m,2h),7.50(dd,j＝8.5,7.1hz,1h),7.06(d,j＝8.5hz,1h),6.94(d,j＝6.9hz,1h),6.66(t,j＝6.5hz,1h),4.95(dd,j＝12.9,5.4hz,1h),3.39
–
3.27(m,2h)，2.76(dd，j＝12.8，4.3hz,3h),2.55
–
2.41(m,2h),2.01
–
1.86(m,1h),1.83
–
1.65(m,2h).。
[0147]
(2)化合物c11的合成
[0148]
制备c11，具体制备方法参照实施例3，将实施例3中的cb-2用cb-7替代，参照实施例3得到c11类白色固体24.30mg，总收率22.4％，c11其结构如下：
[0149][0150]
表征结果如下：1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.67(s,1h),11.09(s,1h),8.25(t，j＝5.6hz,1h),8.02(t,j＝6.1hz,1h),7.59(d,j＝8.0hz,2h),7.57
–
7.50(m,3h),7.42(dd,j＝11.0,2.5hz,1h),7.32(dd,j＝9.1,2.5hz,1h),7.06(d,j＝8.6hz,1h),7.00(d,j＝7.0hz,1h),6.76(t,j＝6.2hz,1h),5.05(dd,j＝12.7,5.4hz,1h),3.62(s,2h),3.38(s,1h),3.21(q,j＝6.4hz,2h),3.06
–
3.02(m,2h),2.99(s,2h),2.89(s,2h),2.73(s,1h),2.61
–
2.52(m,2h),2.22(s,3h),2.05
–
2.00(m,1h),1.71(p,j＝6.7hz,2h),0.95(d,j＝6.6hz,3h).ms：693.82(m+h
+
).。
[0151]
实施例11：制备化合物c12
[0152]
(1)中间体化合物cb-8的合成
[0153]
cb-8的合成参照实施例8，用t-2替代t，
[0154][0155]
得到cb-8,
[0156][0157]
表征如下：1h nmr(300mhz,dmso)δ11.01(s,1h),7.78(s,2h),7.49(dd,j＝8.5,7.1hz,1h),7.08
–
6.94(m,1h),6.94(d,j＝6.9hz,1h),6.51(t,j＝6.1hz,1h),4.95(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),3.35
–
3.25(m,2h),2.88
–
2.76(m,1h),2.73(d,j＝7.4hz,2h),2.55
–
2.39(m,2h),2.06
–
1.83(m,1h),1.62
–
1.45(m,4h).。
[0158]
(2)化合物c12的合成
[0159]
制备c12，具体制备方法参照实施例3，将实施例3中的cb-2用cb-8替代，参照实施例3得到c12类白色固体28.20mg，总收率26.5％，c12其结构如下：
[0160][0161]
表征结果如下：1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.67(s,1h),11.03(s,1h),8.25(t,j＝5.8hz,1h),7.89(t,j＝6.1hz,1h),7.59(d,j＝8.2hz,2h),7.52(d,j＝7.8hz,3h),7.42(dd,j＝11.0,2.4hz,1h),7.32(dd,j＝9.1,2.5hz,1h),7.07(d,j＝8.6hz,1h),6.99(d,j＝7.0hz,1h),6.56(t,j＝6.0hz,1h),5.03(dd,j＝12.7,5.5hz,1h),3.61(s,2h),3.38(s,1h),3.29(d,j＝6.6hz,3h),3.16(q,j＝6.4hz,2h),3.06
–
3.01(m,2h),2.97(s,2h),2.89(s,1h),2.87
–
2.82(m,1h),2.56(ddd,j＝16.8,4.4,2.3hz,1h),2.19(s,3h),2.03
–
1.96(m,1h),1.59
–
1.49(m,4h).ms：707.80(m+h
+
).。
[0162]
实施例12：制备化合物c13
[0163]
(1)中间体化合物cb-9的合成
[0164]
cb-9的合成参照实施例8，用t-4替代t，
[0165][0166]
得到cb-9，
[0167][0168]
表征如下：1h nmr(300mhz,dmso)δ11.00(s,1h),7.85(s,2h),7.49(dd,j＝8.6,7.1hz,1h),7.00(d,j＝8.5hz,1h),6.92(d,j＝7.0hz,1h),6.59
–
6.28(m,1h),4.95(dd,j＝12.9,5.4hz,1h),3.20(t,j＝6.7hz,2h),2.76(d,j＝13.6hz,1h),2.69
–
2.57(m,2h),2.56
–
2.41(m,2h),2.05
–
1.81(m,1h),1.60
–
1.36(m,4h),1.32
–
1.14(m,4h).。
[0169]
(2)化合物c13的合成
[0170]
制备c13，具体制备方法参照实施例3，将实施例3中的cb-2用cb-9替代，参照实施例3得到c13类白色固体25.30mg，总收率25.5％，c13其结构如下：
[0171][0172]
表征结果如下：1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.68(s,1h),10.90(s,1h),8.25(t,j＝5.8hz,1h),7.81(t,j＝6.0hz,1h),7.59(d,j＝8.0hz,2h),7.56
–
7.50(m,3h),7.42(dd,j＝11.0,2.4hz,1h),7.31(dd,j＝9.0,2.5hz,1h),7.03(d,j＝8.6hz,1h),6.99(d,j＝7.1hz,1h),6.50(t,j＝5.9hz,1h),5.04(dd,j＝12.8,5.5hz,1h),3.61(s,2h),3.24(t,j＝6.7hz,2h),3.11(q,j＝6.7hz,2h),3.04(q,j＝6.3,5.6hz,2h),2.96(s,2h),2.90
–
2.87(m,1h),2.61
–
2.55(m,1h),2.47
–
2.44(m,1h),2.20(s,3h),2.04
–
1.97(m,1h),1.54(t,j＝7.3hz,2h),1.44(q,j＝7.1hz,2h),1.37
–
1.23(m,5h),0.94(d,j＝6.5hz,1h).ms：736.03(m+h
+
).。
[0173]
实施例13：制备化合物c14
[0174]
(1)中间体化合物cb-10的合成
[0175]
cb-10的合成参照实施例8，用t-5替代t，
[0176][0177]
得到cb-10,
[0178][0179]
表征如下：1h nmr(300mhz,dmso)δ11.10(s,1h),7.95(s,2h),7.58(dd,j＝8.5,7.1hz,1h),7.09(d,j＝8.6hz,1h),7.02(d,j＝7.0hz,1h),6.62
–
6.45(m,1h),5.05(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),3.29(d,j＝6.0hz,2h),2.98
–
2.81(m,1h),2.79
–
2.67(m,2h),2.67
–
2.49(m,2h),2.14
–
1.94(m,1h),1.66
–
1.43(m,4h),1.42
–
1.19(m,8h).。
[0180]
(2)化合物c14的合成
[0181]
制备c14，具体制备方法参照实施例3，将实施例3中的cb-2用cb-10替代，参照实施例3得到c14类白色固体23.80mg，总收率24.1％，c14其结构如下：
[0182][0183]
表征结果如下：1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.67(s,1h),11.09(s,1h),8.25(t,j＝5.8hz,1h),7.80(t,j＝5.9hz,1h),7.60(d,j＝8.2hz,2h),7.53(t,j＝7.1hz,3h),7.42(dd,j＝10.9,2.4hz,1h),7.31(dd,j＝9.1,2.4hz,1h),7.02(dd,j＝17.5,7.8hz,2h),6.48(t,j＝5.9hz,1h),5.04(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),3.61(s,2h),3.39(s,1h),3.23(q,j＝6.7hz,3h),3.10(q,j＝6.6hz,2h),3.04(q,j＝7.4,6.3hz,2h),2.96(s,2h),2.89(s,1h),2.62
–
2.55(m,1h),2.20(s,3h),2.02(ddd,j＝12.7,5.4,3.0hz,1h),1.55
–
1.49(m,2h),1.41(d,j＝6.9hz,2h),1.25(s,9h).ms：764.07(m+h
+
).。
[0184]
实施例14：制备化合物c15
[0185]
(1)中间体化合物cb-11的合成
[0186]
cb-11的合成参照实施例2,用t-5替代t，
[0187][0188]
得到cb-11,
[0189][0190]
表征如下：1h nmr(300mhz,dmso)δ11.12(s,1h),7.96(t,j＝5.6hz,1h),7.87
–
7.77(m,1h),7.72(s,2h),7.51(d,j＝7.2hz,1h),7.40(d,j＝8.5hz,1h),5.12(dd,j＝12.8,5.2hz,1h),4.77(s,2h),3.14(dd,j＝12.6,6.4hz,2h),3.00
–
2.82(m,1h),2.83
–
2.67(m,2h),2.65
–
2.52(m,2h),2.17
–
1.94(m,1h),1.62
–
1.36(m,4h),1.36
–
1.13(m,8h).。
[0191]
(2)化合物c15的合成
[0192]
制备c15，具体制备方法参照实施例3，将实施例3中的cb-2用cb-11替代，参照实施例3得到c15类白色固体26.40mg，总收率26.1％，c15其结构如下：
[0193][0194]
表征结果如下：1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.67(s,1h),11.12(s,1h),8.25(t,j＝5.8hz,1h),7.90(t,j＝5.9hz,1h),7.81(d,j＝7.4hz,2h),7.60(d,j＝7.9hz,2h),7.53(d,j＝8.0hz,2h),7.49(d,j＝7.2hz,1h),7.42(dd,j＝10.9,2.5hz,1h),7.38(d,j＝8.5hz,1h),7.31(dd,j＝9.2,2.5hz,1h),5.11(dd,j＝12.8,5.5hz,1h),4.75(s,2h),3.61(s,2h),3.38(d,j＝6.8hz,2h),3.11(q,j＝6.8hz,4h),3.06
–
3.03(m,2h),2.96(s,1h),2.89(s,1h),2.73(s,1h),2.59(d,j＝19.9hz,2h),2.20(s,3h),2.03(d,j＝12.6hz,1h),1.40(d,j＝7.5hz,3h),1.23(s,9h).ms：822.03(m+h
+
).。
[0195]
实施例15、本发明化合物对乳腺癌细胞mda-mb-231增殖抑制作用的生物学测定
[0196]
(1)实验原理：cell counting kit-8简称cck-8试剂盒，是一种基于wst-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
[0197]
cck-8试剂中含有wst
–
8：化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2h-四唑单钠盐]，它在电子载体的作用下被细胞线粒体中的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。根据测得的吸光度值(od值)，来判断活细胞数量，od值越大，细胞活性越强,如果是测药物毒性，od值越大，则表示药物毒性越小。
[0198]
(2)试剂与细胞：
[0199]
试剂：dmem培养基：cellmax cgn101.5，添加10％fbs(gemini 900-108)；cck-8试剂盒：bimake 25ml。
[0200]
测试细胞：乳腺癌细胞mda-mb-231(购自：中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)
[0201]
(3)实验步骤：
[0202]
1)收集对数期细胞，用dmem培养基调整细胞悬液浓度，分于96孔板，每孔100μl，3000-10000个/孔；
[0203]
2)置37℃、5％co2温箱培养使细胞贴壁，培养24h；
[0204]
3)吸出培养基，pbs洗三遍，用dmem培养基溶解待测化合物，每孔加入200μl溶有待测化合物的培养基(浓度2μm，三个复孔)继续培养48h；
[0205]
4)每孔加入10ul cck-8试剂，继续培养4h；
[0206]
5)在酶联免疫检测仪450nm处测量各孔的吸光值；
[0207]
6)同时设置空白孔(dmem培养基、cck-8试剂)，对照孔(细胞、dmem培养基、cck-8试剂)，每组设定3复孔；
[0208]
7)计算抑制率＝[(od
对照-od
空白
)-(od
给药-od
空白
)]/(od
对照-od
空白
)*100％。
[0209]
其中定义的抑制率范围与抑制程度对照表如下：
[0210]
抑制率％抑制程度0-5％+5-10％++10-15％+++15-20％++++20％以上+++++未获得数据/
[0211]
备注说明：抑制率5-10％是指抑制率大于5％且小于等于10％的抑制率范围，其他以此类推。
[0212]
表1.本发明所述化合物对乳腺癌细胞mda-mb-231增殖抑制的活性数据
[0213]
[0214]
[0215][0216]
上述结果表明，本发明公开的化合物c06，c09，c10，c13，c14，c15对乳腺癌细胞mda-mb-231比化合物rucaparib对乳腺癌细胞mda-mb-231有更强的细胞增殖抑制活性，显示出嵌合分子的抗肿瘤效果优于化合物rucaparib，有降低药物使用剂量，减轻毒副作用的潜力。另外，化合物c05对乳腺癌细胞mda-mb-231的细胞抑制活性与rucaparib相当。
[0217]
实施例16、本发明化合物对卵巢癌细胞a2780细胞增殖抑制作用的生物学测定
[0218]
(1)实验原理：同实施例15
[0219]
(2)试剂与细胞：
[0220]
试剂：dmem培养基：cellmax cgn101.5，添加10％fbs(gemini 900-108)；cck-8试剂盒：bimake 25ml。
[0221]
测试细胞：卵巢癌细胞a2780细胞(购自：中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)。
[0222]
(3)实验步骤：同实施例15.
[0223]
表2.本发明所述化合物对卵巢癌细胞a2780增殖抑制的活性数据
[0224]
[0225]
[0226][0227]
上述结果表明，本发明公开的化合物c05，c07，c13，c14对卵巢癌细胞a2780比化合物rucaparib对卵巢癌细胞a2780有更强的细胞增殖抑制活性，显示出嵌合分子c05，c07，
c13，c14的抗肿瘤效果优于parp-1抑制剂化合物rucaparib,有降低药物使用剂量，减轻毒副作用的潜力。另外，化合物c06，c08，c09，c10，c11，c12，c15对卵巢癌细胞a2780的细胞抑制活性与rucaparib相当。
[0228]
综上，本发明提供了一种嵌合分子，该分子由目标蛋白靶向小分子化合物单元、e3泛素连接酶结合单元和连接基团组成，具备癌症细胞增殖抑制活性，可以作为parp-1蛋白降解和/或抑制药物，用于治疗癌症。