miR-1287-5p及其作为辐射损伤早期诊断的分子标志物的用途的制作方法

mir-1287-5p及其作为辐射损伤早期诊断的分子标志物的用途
技术领域
1.本发明属于生物检测技术领域，涉及mir-1287-5p及其作为辐射损伤早期诊断的分子标志物的用途。


背景技术：

2.目前放射工作人员的健康监护主要是健康体检、健康风险评估和疾病防治等。日常健康体检主要采用常规的临床检查，特殊健康体检包括染色体畸变和微核分析。但它们涉及的指标不能有效地对辐射所致疾病的发生做到早发现。
3.利用分子生物学相关技术获得的分子指标可补充并完善体检手段，对疾病做到早诊断、早治疗。因此，为完善现有健康监护体系，避免或减少辐射危害的潜在风险，亟需建立放射工作人员的早期健康监护技术，从而为放射工作人员的岗位适应性判断提供技术支撑与管理依据。
4.mirna参与了细胞增殖分化以及凋亡的调控，在辐射诱导的机体损伤中起着重要的作用。人类体液中mirna物理性状非常稳定，很适合作为一种生物标志物。
5.mir-1287-5p位于人类10号染色体上，其在肿瘤诊断及预测预后方面的功能在胶质瘤、胰腺癌及乳腺癌的诊断及预测预后方面中有部分报道，此外mir-1287-5p具有抗血管生成的功能。但mir-1287-5p与电离辐射暴露之间的相关研究，在国内外未见报道。


技术实现要素：

6.本发明的首要目的是提供一种mirna，以能够针对其便捷、准确、定量的进行辐射暴露诊断。
7.为实现此目的，在基础的实施方案中，本发明提供一种mirna，所述的mirna为mir-1287-5p，其序列如seq id no.1所示。
8.本发明的第二个目的是提供mir-1287-5p作为辐射损伤早期诊断的分子标志物的用途，以能够便捷、准确、定量的进行辐射暴露诊断。
9.为实现此目的，在基础的实施方案中，本发明提供mir-1287-5p作为辐射损伤早期诊断的分子标志物的用途(即mir-1287-5p作为分子标志物用于制备辐射损伤早期诊断的试剂盒的用途)。
10.在一种优选的实施方案中，本发明提供mir-1287-5p作为辐射损伤早期诊断的分子标志物的用途，其中所述的辐射损伤为局部或全身的组织器官不良反应(如恶心、呕吐、食欲减退、白细胞下降和/或皮肤发红变痒等)。
11.本发明的有益效果在于，利用本发明的mir-1287-5p作为辐射损伤早期诊断的分子标志物的用途，能够便捷、准确、定量的进行辐射暴露诊断。
具体实施方式
12.通过如下的实施例对本发明的实施作进一步说明，但本发明的实施方式并不局限于如下的实施例。
13.实施例1：
14.1、利用高通量测序技术初步筛选辐射敏感的分子标志物
15.1)细胞总mrna的提取、定量和质检
16.将人外周静脉血经0.2gyγ射线照射(同时设有未照射的对照组)，照射后6h，采用外周血mrna提取试剂盒(天根生化科技有限公司)提取mrna，mrna样品经nanodrop进行质检定量(od260/280：1.80-1.89，总量：1699.50-3125.40ng)。
17.2)文库的构建
18.使用每个样品的总rna制备mirna测序文库，主要步骤为：3’接头连接；5’接头连接；cdna合成；pcr扩增；挑选135-155bp的pcr扩增片段(对应15-35nt的小rna)，用agilent 2100进行文库质量测定。
19.3)测序
20.混合好的不同样品的测序文库，通过0.1m naoh变性生成单链dna，在illmina流动池上捕获，原位扩增为簇，并根据供应商说明，在illumina nextseq 500测序仪上进行51个循环。
21.4)数据分析
22.使用edger进行组间mirnas的差异表达分析，设定阈值为1.5倍差异，p值≤0.05来筛选差异表达的mirna，差异倍数正值表示上调，负值表示下调。
23.通过分析可见，与对照组相比，0.2gyγ射线照射后，mir-1287-5p表达上调1.981倍，p值为0.019。
24.2、pcr验证确认mir-1287-5p作为分子标志物用于辐射损伤早期诊断的可行性
25.外周血mirna提取试剂盒(天根生化科技有限公司)提取mirna。按逆转录试剂盒(天根生化科技有限公司)说明书反转录cdna，取适量辐射照射组和对照组样本cdna，对mir-1287-5p的差异表达进行pcr验证。其引物序列及pcr扩增条件见表1。对其进行进一步pcr验证发现：验证结果与测序结果一致，见表2。
26.表1 rt-pcr扩增mirna的引物序列及扩增反应条件
[0027][0028]
表2 rt-pcr扩增的相对定量结果
[0029]
[0030]
上述实验结果表明，经电离辐射作用后，人外周血中mir-1287-5p的表达水平较对照组显著上调。因此，筛选mir-1287-5p作为电离辐射暴露早期损伤诊断的分子标志物，作为受照人员健康监护的一项指标。
[0031]
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若对本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其同等技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。上述实施例或实施方式只是对本发明的举例说明，本发明也可以以其它的特定方式或其它的特定形式实施，而不偏离本发明的要旨或本质特征。因此，描述的实施方式从任何方面来看均应视为说明性而非限定性的。本发明的范围应由附加的权利要求说明，任何与权利要求的意图和范围等效的变化也应包含在本发明的范围内。


技术特征：
1.一种mirna，其特征在于：所述的mirna为mir-1287-5p，其序列如seq id no.1所示。2.mir-1287-5p作为辐射损伤早期诊断的分子标志物的用途。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的辐射损伤为局部或全身的组织器官不良反应。

技术总结
本发明属于生物检测技术领域，涉及miR-1287-5p及其作为辐射损伤早期诊断的分子标志物的用途。利用本发明的miR-1287-5p作为辐射损伤早期诊断的分子标志物的用途，能够便捷、准确、定量的进行辐射暴露诊断。定量的进行辐射暴露诊断。


技术研发人员：董娟聪 原雅艺 党旭红 柴栋良 杨彪 孟倩倩 程娇 王超 刘红艳 左雅慧
受保护的技术使用者：中国辐射防护研究院
技术研发日：2021.11.23
技术公布日：2022/3/1