多功能聚合物微球/微粒细胞分选方法和系统与流程

本公开总体上涉及用于选择或分选细胞的系统和方法。更具体地，本公开涉及细胞修饰系统和方法，包括用于控制分离步骤的甘油和癸二酸的共聚物(pgs)的聚合物珠。

背景技术：

1、选择特定类型的细胞并将该特定类型的细胞从其他细胞和其他生物材料中分选出来的能力对于许多不同的细胞操作过程是重要的。例如，细胞修饰过程包括细胞选择和细胞分选。

2、细胞修饰过程为特定目的收集和修饰细胞。常规的细胞修饰过程包括多个步骤。常规的细胞修饰过程依靠磁珠进行细胞选择，这极大地限制了生产规模。此外，常规的细胞修饰过程需要将被修饰的细胞多次转移到不同的容器中。这需要额外的时间，并且在细胞健康最大化的情况下(对细胞进行最小程度的操作时)，需要对细胞进行额外的操作。

3、嵌合抗原受体(car)t细胞是用于免疫治疗的基因工程t细胞，其表达一种人工受体，赋予t细胞特异性靶向能力。生产car t细胞的常规多步骤细胞修饰方法包括从血样中收集t细胞，活化t细胞，转导t细胞，扩增t细胞，和收集所得car t细胞。

4、用于car t细胞生产的常规磁珠通常一次只能分离出一个细胞亚群，这是一个缓慢的过程。例如，在含有辅助性t细胞、细胞毒性t细胞和自然杀伤(nk)细胞的系统中，使用常规磁珠的car t细胞生产方法需要一次分离这三种细胞亚群，首先磁性分离出cd4+细胞，然后使剩余的混合细胞群依次再进行两次磁分离，以分离cd8+细胞，然后是cd56+细胞。这需要额外的时间，并且在细胞健康最大化的情况下(对细胞进行最小程度的操作时)，需要对细胞进行额外的操作。

技术实现思路

1、需要一种更高效、可扩展并减少细胞处理的细胞修饰方法和细胞修饰系统。

2、在示例性实施方案中，细胞选择和分选方法包括将目标细胞类型的细胞在室中附着到具有第一珠直径的第一组聚合物珠上。该方法还包括通过具有第一孔径的第一过滤器清洗所述室，第一孔径小于第一珠直径，以保留第一组聚合物珠，并大于细胞直径，以去除未附着的细胞。该方法进一步包括从第一组聚合物珠上释放目标细胞类型的细胞。最后，该方法包括从第二组聚合物珠上释放目标细胞类型的细胞并收集修饰的目标细胞类型的细胞。

3、在示例性实施方案中，细胞修饰方法包括将目标细胞类型的细胞在室中附着到具有第一珠直径的第一组聚合物珠上。该方法还包括通过具有第一孔径的第一过滤器清洗所述室，第一孔径小于第一珠直径，以保留第一组聚合珠，并大于细胞直径，以去除未附着的细胞。该方法进一步包括从第一组聚合物珠上释放目标细胞类型的细胞。该方法进一步包括在室中修饰目标细胞类型的细胞。该方法还包括将目标细胞类型的细胞结合到第二组聚合物珠上，该第二组聚合物珠具有大于第一珠直径的第二珠直径。该方法还包括通过具有第二孔径的第二过滤器清洗所述室，第二孔径小于第二珠直径，以保留第二组聚合物珠，但大于第一珠直径，以去除第一组聚合物珠。最后，该方法包括从第二组聚合物珠上释放修饰的目标细胞类型的细胞并收集修饰的目标细胞类型的细胞。

4、在示例性实施方案中，细胞修饰系统包括细胞修饰室，该细胞修饰室包括至少一个入口和至少一个出口。该细胞修饰系统还包括可选择地位于所述至少一个出口上的多个过滤器，所述多个过滤器中的每一个都具有预定孔径。该细胞修饰系统还包括多组聚合物珠，每组聚合物珠都具有预定直径，所述预定直径被选择成使得所述多组聚合物珠可通过所述多个过滤器分离。

5、在示例性实施方案中，流通式细胞修饰系统包括多个捕获室，每个捕获室具有一组预定直径的捕获聚合物珠，以捕获多个预定细胞类型的细胞。该流通式细胞修饰系统还包括多个释放室，多个捕获室和多个释放室交替地顺序布置。该流通式细胞修饰系统进一步包括多个过滤器，每个过滤器都具有预定的孔径，每个过滤器将多个捕获室中的一个和多个释放室中的一个分开，以分开各组捕获聚合物珠。

6、从以下结合附图的更详细的描述中，本发明的各种特征和优点将变得显而易见，附图以示例的方式示出了本发明的原理。

技术特征：

1.一种细胞选择和分选方法，其包括：

2.根据权利要求1所述的细胞选择和分选方法，其中所述聚合物珠包括甘油和癸二酸的共聚物。

3.根据权利要求1所述的细胞选择和分选方法，其中所述聚合物珠包含对用于附着的目标细胞类型的细胞具有特异性的表面修饰。

4.根据权利要求1所述的细胞选择和分选方法，其中所述目标细胞类型的细胞是t细胞，并且修饰的细胞是嵌合抗原受体t细胞。

5.根据权利要求1所述的细胞选择和分选方法，其进一步包括在清洗所述室之前活化所述目标细胞类型的细胞。

6.根据权利要求1所述的细胞选择和分选方法，其进一步包括在清洗所述室之前转染所述目标细胞类型的细胞。

7.根据权利要求1所述的细胞选择和分选方法，其进一步包括：

8.一种细胞修饰方法，其包括：

9.根据权利要求8所述的细胞修饰方法，其中所述聚合物珠包括甘油和癸二酸的共聚物。

10.根据权利要求8所述的细胞修饰方法，其中所述聚合物珠包含对用于附着的目标细胞类型的细胞具有特异性的表面修饰。

11.根据权利要求8所述的细胞修饰方法，其中修饰所述目标细胞类型的细胞包括在清洗所述室之前活化所述目标细胞类型的细胞。

12.根据权利要求8所述的细胞修饰方法，其中修饰所述目标细胞类型的细胞包括在清洗所述室之前转染所述目标细胞类型的细胞。

13.根据权利要求8所述的细胞修饰方法，其中所述目标细胞类型的细胞是t细胞，并且所述修饰的细胞是嵌合抗原受体t细胞。

14.一种细胞修饰系统，其包括：

15.根据权利要求14所述的细胞修饰系统，其进一步包括在所述至少一个出口处的掩模，以选择所述多个过滤器中的一个用于清洗细胞修饰室。

16.根据权利要求14所述的细胞修饰系统，其中所述聚合物珠包括甘油和癸二酸的共聚物。

17.根据权利要求14所述的细胞修饰系统，其中所述多组聚合珠中的每一个包含对用于附着的目标细胞类型的细胞具有特异性的表面修饰。

18.根据权利要求14所述的细胞修饰系统，其中所述至少一个入口包括单采产物入口和遗传修饰剂入口。

19.根据权利要求14所述的细胞修饰系统，其中所述至少一个出口包括细胞出口和废物收集口。

20.根据权利要求19所述的细胞修饰系统，其进一步包括在所述细胞出口处与所述细胞修饰室连接的细胞分级室。

21.根据权利要求14所述的细胞修饰系统，其中所述细胞修饰室是单细胞修饰室，并且细胞修饰过程的所有步骤都发生在所述单细胞修饰室中。

22.一种流通式细胞选择和分选系统，其包括：

23.根据权利要求22所述的流通式细胞选择和分选系统，其中所述捕获聚合物珠包括甘油和癸二酸的共聚物。

24.根据权利要求22所述的流通式细胞选择和分选系统，其中每组捕获聚合物珠包含对用于附着的目标细胞类型的细胞具有特异性的表面修饰。

技术总结
一种细胞选择和分选方法，其包括：将目标细胞类型的细胞附着到第一组聚合物珠上，通过具有第一孔径的第一过滤器清洗室，第一孔径小于第一珠直径，以保留第一组聚合物珠，并大于细胞直径，以去除未附着的细胞，从第一组聚合物珠上释放目标细胞类型的细胞，和收集目标细胞类型的细胞。一种细胞修饰方法，其包括在室中修饰目标细胞类型的细胞。一种细胞修饰系统，其包括具有入口和出口的细胞修饰室、可选地位于出口上的具有预定孔径的过滤器、和具有预定直径的各组聚合物珠，该直径被选择成使得各组聚合物珠可被过滤器分离。

技术研发人员：杰里米·J·哈里斯,彼得·D·加布里埃尔,布莱恩·吉恩
受保护的技术使用者：赛康特集团有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12