用于补体因子H(CFH)的结合蛋白的制作方法

本发明涉及特异性结合补体因子h(cfh)的新型蛋白。本发明进一步涉及cfh的生产方法，特别是cfh的纯化方法。本发明的新型cfh结合配体是先进且强大的工具，因为它们允许通过亲和色谱(affinity chromatography，亲和色谱法)纯化cfh的方法。

背景技术：

1、补体因子h(cfh；β-1h球蛋白)是一种天然存在于血浆中的血清糖蛋白。cfh是补体系统的替代路径的主要流体相调节剂，防止c3和c5转化酶的形成并且促进已形成的转化酶的分解。重要的是，cfh充当通过酶促裂解使c3b失活的辅因子。如果由于cfh的突变，c3b没有失活，结果可能是严重的疾病，例如肾损伤。其它并发症可能是可能的。已知因子h用于治疗应用。为了提供因子h，该因子必须以高度纯化的活性形式提供。

2、然而，目前cfh的生产过程涉及使用多个纯化步骤的复杂程序的cfh(或重组cfh)的纯化过程。例如，一种已知的cfh纯化是三步色谱纯化(疏水相互作用、肝素亲和色谱和离子交换色谱)。纯化方法后的收率很低(只有约15％)，并且只能小规模纯化。

3、本领域强烈需要提供用于更简单和有效的生产方法的方法，特别是cfh的纯化方法。本发明通过提供用于cfh的新型结合蛋白来满足这种需要。这些新型结合蛋白特别有利，因为它们允许在亲和色谱以及诊断应用中精确捕获因子h。这将开启涉及cfh纯化的成功生产，例如，用于医疗目的的经济可行的数量。

4、以上概述并不一定描述了由本发明所解决的所有问题。

技术实现思路

1、本公开提供以下项目1至15，但不具体地限于此：

2、1.一种用于补体因子h(cfh)的结合蛋白，包含与选自seq id no:1-25的组中的任一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，其中该结合蛋白对cfh具有小于1μm的结合亲和力。优选的是以下用于cfh的结合蛋白，其包含与seq id no:13具有至少89.5％序列同一性的氨基酸序列，其中该结合蛋白对cfh具有小于1μm的结合亲和力。

3、2.根据项目1的用于cfh的结合蛋白，其中cfh结合蛋白对cfh具有小于500nm的结合亲和力。

4、3.根据项目1-2的用于cfh的结合蛋白，其中2、3、4、5或6个cfh结合蛋白彼此连接。

5、4.根据项目3的用于cfh的结合蛋白，其中所述结合蛋白是同源多聚体或异源多聚体。

6、5.根据项目1-4的用于cfh的结合蛋白，其中所述结合蛋白另外包含至少一种其他分子，该其他分子优选地选自下组：(a)非免疫球蛋白(ig)结合蛋白，或(b)诊断活性部分，该诊断活性部分任选地选自放射性核素、荧光蛋白、光敏剂、染料或酶或以上的任意组合。

7、6.根据项目1-5中任一项的用于cfh的结合蛋白，包含seq id no:7、9、10、13、14、15、16、17、18、19和23中任一个的氨基酸序列，或与其具有至少89.5％同一性的氨基酸序列。

8、7.根据项目1-6中任一项的用于cfh的结合蛋白，用于在诊断与cfh相关的疾病中使用。

9、8.根据项目1-7中任一项的用于cfh的结合蛋白，用于在技术应用如cfh或包含cfh的蛋白的亲和纯化中使用。

10、9.一种亲和分离基质，包含根据项目1-8中任一项的用于cfh的结合蛋白。

11、10.根据项目1-8中任一项的用于cfh的结合蛋白或根据项目9的亲和分离基质用于cfh或包含cfh的蛋白的亲和纯化的用途。

12、11.一种生产cfh的方法，包括使用亲和色谱基质的至少一个色谱步骤，该亲和色谱基质具有特异性结合cfh的亲和力，其中将根据项目1-8中任一项的用于cfh的结合蛋白偶联至所述亲和色谱基质。

13、12.根据项目11的方法，该方法包括：(a)提供含有cfh的液体；(b)提供亲和分离基质，该亲和分离基质包含与所述亲和分离基质偶联的至少一种根据项目1-8中任一项的用于cfh的结合蛋白；(c)在允许至少一种根据项目1-8中任一项的用于cfh的结合蛋白结合的条件下使所述亲和分离基质与所述液体接触；(d)从所述亲和纯化基质洗脱所述cfh；和(e)获得所述纯化的cfh。

14、13.根据项目1-8的用于cfh的结合蛋白在确定cfh存在的方法中的用途。

15、14.一种分析液体样品中cfh存在的方法，该方法包括以下步骤：

16、(i)提供含有cfh的液体，

17、(ii)提供根据项目1-8的用于cfh的结合蛋白，

18、(iii)在允许根据项目1-8的cfh的结合蛋白与cfh结合的条件下，使(i)的液体与该结合蛋白接触，

19、(iv)分离根据项目1-8的cfh的复合物，和

20、(v)确定(i)的液体中根据项目1-8的用于cfh的结合蛋白的量。

21、15.一种编码根据项目1-8中任一项的结合蛋白的多核苷酸。

22、本发明的该概述不是限制性的，并且本发明的其它方面和实施方式将从以下描述、实施例和附图中变得明显。

技术特征：

1.一种用于补体因子h(cfh)的结合蛋白，包含与seq id no:13的氨基酸序列具有至少89.5％序列同一性的氨基酸序列，其中所述结合蛋白对cfh具有小于1μm的结合亲和力。

2.根据权利要求1所述的用于cfh的结合蛋白，其中cfh结合蛋白对cfh具有小于500nm的结合亲和力。

3.根据权利要求1-2所述的用于cfh的结合蛋白，其中2、3、4、5或6个cfh结合蛋白彼此连接。

4.根据权利要求3所述的用于cfh的结合蛋白，其中所述结合蛋白为同源多聚体或异源多聚体。

5.根据权利要求1-4所述的用于cfh的结合蛋白，其中所述结合蛋白另外包含至少一种其他分子，所述其他分子优选地选自下组：(a)非免疫球蛋白(ig)结合蛋白，或(b)诊断活性部分，所述诊断活性部分任选地选自放射性核素、荧光蛋白、光敏剂、染料或酶或以上的任意组合。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的用于cfh的结合蛋白，包含seqid no:7、9、10、14、15、16、17、18、19和23中任一个的氨基酸序列。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的用于cfh的结合蛋白，用于在诊断与cfh相关的疾病中使用。

8.根据权利要求1-6中任一项所述的用于cfh的结合蛋白，用于在cfh或包含cfh的蛋白的亲和纯化中使用。

9.一种亲和分离基质，包含根据权利要求1-6中任一项所述的用于cfh的结合蛋白。

10.根据权利要求1-6中任一项所述的用于cfh的结合蛋白或根据权利要求9所述的亲和分离基质用于cfh或包含cfh的蛋白的亲和纯化的用途。

11.一种制造cfh的方法，包括使用亲和色谱基质的至少一个色谱步骤，所述亲和色谱基质具有特异性结合cfh的亲和力，其中将根据权利要求1-6中任一项所述的用于cfh的结合蛋白与所述亲和色谱基质偶联。

12.一种cfh的亲和纯化方法，所述方法包括：(a)提供含有cfh的液体；(b)提供亲和分离基质，所述亲和分离基质包含与所述亲和分离基质偶联的至少一种根据权利要求1-6中任一项所述的用于cfh的结合蛋白；(c)在允许所述至少一种根据权利要求1-6中任一项所述的用于cfh的结合蛋白结合的条件下，使所述亲和分离基质与所述液体接触；和(d)从所述亲和纯化基质中洗脱所述cfh。

13.根据权利要求1-6所述的用于cfh的结合蛋白在确定cfh存在的方法中的用途。

14.一种分析液体样品中cfh存在的方法，所述方法包括以下步骤：

15.一种编码根据权利要求1-6中任一项所述的结合蛋白的多核苷酸。

技术总结
本发明涉及特异性结合补体因子H(CFH)的新型蛋白。本发明进一步涉及CFH的生产方法，特别是CFH的纯化方法。本发明的新型CFH结合配体是先进且强大的工具，因为它们允许通过亲和色谱纯化CFH的方法。

技术研发人员：埃里克·菲德勒,乔纳森·洛茨,马赛厄斯·卡尔
受保护的技术使用者：纳维格蛋白质有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13