促熟剂的制作方法

本发明涉及一种由多能干细胞制造胰岛素阳性细胞群的方法。更具体地，本发明涉及一种制造胰岛素阳性细胞群的方法，其特征在于，使由多能干细胞分化诱导得到的胰腺前体细胞群或处于在此之后的分化阶段的细胞群与对周期蛋白依赖性激酶8和/或周期蛋白依赖性激酶19(以下，有时描述为“cdk8/19”)具有抑制活性的因子作用。

背景技术

0、
背景技术：

1、目前正在推进由ips细胞或es细胞等多能干细胞分化诱导出胰岛素阳性细胞或胰岛β细胞，并应用于糖尿病治疗的研究。

2、迄今为止，已开发并报道了各种用于由多能干细胞分化诱导成胰岛素阳性细胞群的方法(非专利文献1)。然而，在分化诱导得到的胰岛素阳性细胞群中，除了作为目标的胰岛素阳性细胞(特别是胰岛素阳性且nkx6.1阳性的细胞等)之外，还包含各种细胞。在想要将胰岛素阳性细胞群应用于糖尿病治疗时，从安全性的观点来看，严格控制细胞群中所含细胞的种类是极为重要的。因此，迫切需要一种能够包含更多目标细胞的新的胰岛素阳性细胞群的分化诱导方法。

3、现有技术文献

4、非专利文献

5、非专利文献1:stem cell research(2015)14，185-197

技术实现思路

1、本发明所要解决的问题

2、本发明的目的在于提供一种用于由多能干细胞分化诱导出胰岛素阳性细胞群的新颖方法。

3、用于解决问题的技术手段

4、本发明者们为了解决上述问题而锐意研究的结果是发现在由多能干细胞诱导出胰岛素阳性细胞群的过程中，通过使在胰腺前体细胞群或处于在此之后的分化阶段的细胞群与具有cdk8/19抑制活性的因子(以下，有时描述为“cdk8/19抑制剂”)作用，能够有效地分化诱导出胰岛素阳性细胞、特别是胰岛素阳性且nkx6.1阳性的细胞，与以往的方法相比，能够得到包含更多该细胞的胰岛素阳性细胞群。

5、本发明是基于这些新认知的发明，包含以下发明。

6、[1]一种制造胰岛素阳性细胞群的方法，

7、所述方法包括：使胰腺前体细胞群或处于在此之后的分化阶段的细胞群在包含cdk8/19抑制剂的培养基中分化。

8、[2]根据[1]所述的方法，其中，所述培养基实质上不具有alk5抑制活性。

9、[3]根据[1]或[2]所述的方法，其中，所述cdk8/19抑制剂对于alk5的ic50为1μm及以上。

10、[4]根据[1]至[3]中任一项所述的方法，其中，cdk8/19抑制剂为选自由二乙基(e)-(4-(3-(5-(4-氟苯基)-1-甲基-1h-吡唑-4-基)丙烯酰胺)苄基)膦酸酯、2-(4-(4-(异喹啉-4-基)苯基)-1h-吡唑-1-基)-n,n-二甲基乙酰胺、4-((2-(6-(4-甲基哌嗪-1-羰基)萘-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈、4-(4-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧芑-6-基)-1h-吡唑-3-基)苯-1,3-二醇、3-(2-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基硫基)乙基)-4-(萘-1-基磺酰基)-3,4-二氢喹喔啉-2(1h)-酮、及(e)-3-(4-(1-环丙基-1h-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-n-(4-(吗啉基甲基)苯基)丙烯酰胺组成的组中的一种或多种。

11、[5]根据[1]至[4]中任一项所述的方法，其中，胰腺前体细胞群或处于在此之后的分化阶段的细胞群是通过分化诱导多能干细胞而制造的。

12、[6]一种胰腺前体细胞群或处于在此之后的分化阶段的细胞群的分化培养基，所述培养基包含cdk8/19抑制剂。

13、[7]根据[6]所述的培养基，所述培养基实质上不具有alk5抑制活性。

14、[8]根据[6]或[7]所述的培养基，其中，cdk8/19抑制剂对于alk5的ic50为1μm及以上。

15、[9]根据[6]至[8]中任一项所述的培养基，其中，cdk8/19抑制剂为选自由二乙基(e)-(4-(3-(5-(4-氟苯基)-1-甲基-1h-吡唑-4-基)丙烯酰胺)苄基)膦酸酯、2-(4-(4-(异喹啉-4-基)苯基)-1h-吡唑-1-基)-n,n-二甲基乙酰胺、4-((2-(6-(4-甲基哌嗪-1-羰基)萘-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈、4-(4-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧芑-6-基)-1h-吡唑-3-基)苯-1,3-二醇、3-(2-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基硫基)乙基)-4-(萘-1-基磺酰基)-3,4-二氢喹喔啉-2(1h)-酮、及(e)-3-(4-(1-环丙基-1h-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-n-(4-(吗啉基甲基)苯基)丙烯酰胺组成的组中的一种或多种。

16、本说明书包含作为本申请的优先权基础的2020年11月20日提交的日本专利申请第2020-193454号的说明书和/或附图中记载的内容。

17、本说明书中引用的所有刊物、专利以及专利申请直接作为参考并入本说明书中。

18、发明效果

19、根据本发明，可以提供一种用于由多能干细胞分化诱导出胰岛素阳性细胞群的新颖方法。即，根据本发明，在由多能干细胞诱导出胰岛素阳性细胞群的过程中，能够有效地分化诱导出胰岛素阳性细胞、特别是胰岛素阳性且nkx6.1阳性的细胞，与以往的方法相比，能够得到包含更多该细胞的胰岛素阳性细胞群。

技术特征：

1.一种制造胰岛素阳性细胞群的方法，

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述培养基实质上不具有alk5抑制活性。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述cdk8/19抑制剂对于alk5的ic50为1μm及以上。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，cdk8/19抑制剂为选自由二乙基(e)-(4-(3-(5-(4-氟苯基)-1-甲基-1h-吡唑-4-基)丙烯酰胺)苄基)膦酸酯、2-(4-(4-(异喹啉-4-基)苯基)-1h-吡唑-1-基)-n,n-二甲基乙酰胺、4-((2-(6-(4-甲基哌嗪-1-羰基)萘-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈、4-(4-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧芑-6-基)-1h-吡唑-3-基)苯-1,3-二醇、3-(2-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基硫基)乙基)-4-(萘-1-基磺酰基)-3,4-二氢喹喔啉-2(1h)-酮、及(e)-3-(4-(1-环丙基-1h-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-n-(4-(吗啉基甲基)苯基)丙烯酰胺组成的组中的一种或多种。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，胰腺前体细胞群或处于在此之后的分化阶段的细胞群是通过分化诱导多能干细胞而制造的。

6.一种胰腺前体细胞群或处于在此之后的分化阶段的细胞群的分化培养基，所述培养基包含cdk8/19抑制剂。

7.根据权利要求6所述的培养基，所述培养基实质上不具有alk5抑制活性。

8.根据权利要求6或7所述的培养基，其中，cdk8/19抑制剂对于alk5的ic50为1μm及以上。

9.根据权利要求6至8中任一项所述的培养基，其中，cdk8/19抑制剂为选自由二乙基(e)-(4-(3-(5-(4-氟苯基)-1-甲基-1h-吡唑-4-基)丙烯酰胺)苄基)膦酸酯、2-(4-(4-(异喹啉-4-基)苯基)-1h-吡唑-1-基)-n,n-二甲基乙酰胺、4-((2-(6-(4-甲基哌嗪-1-羰基)萘-2-基)乙基)氨基)喹唑啉-6-甲腈、4-(4-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧芑-6-基)-1h-吡唑-3-基)苯-1,3-二醇、3-(2-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基硫基)乙基)-4-(萘-1-基磺酰基)-3,4-二氢喹喔啉-2(1h)-酮、及(e)-3-(4-(1-环丙基-1h-吡唑-4-基)吡啶-3-基)-n-(4-(吗啉基甲基)苯基)丙烯酰胺组成的组中的一种或多种。

技术总结
本发明的目的在于提供一种用于由多能干细胞分化诱导出胰岛素阳性细胞群的新颖方法，提供了一种制造胰岛素阳性细胞群的方法，所述方法包括：使胰腺前体细胞群或处于在此之后的分化阶段的细胞群在包含CDK8/19抑制剂的培养基中分化。

技术研发人员：佐久间健介,松本宽和,豊田太郎,小长谷周平
受保护的技术使用者：千纸鹤治疗公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13