具有人源化TSLP基因、人源化TSLP受体基因和/或人源化IL7RA基因的非人动物的制作方法

文档序号:35573778发布日期:2023-09-24 09:58阅读:154来源:国知局
具有人源化TSLP基因、人源化TSLP受体基因和/或人源化IL7RA基因的非人动物的制作方法


背景技术:

1、胸腺基质淋巴细胞生成素(tslp)通过异源二聚体受体发挥作用,所述异源二聚体受体由对tslp(被称为“tslpr”或“tslpr”)具有特异性的链和il7受体α链组成,并与过敏性疾病和某些癌症有关。需要有效的体内系统来更好地理解过敏性疾病和癌症的发病机制并且开发治疗剂。


技术实现思路

1、在一些实施例中,本文公开了一种经基因修饰的啮齿动物,所述啮齿动物在其基因组中包括人源化tslp基因,其中所述人源化tslp基因包括啮齿动物tslp核酸序列和人tslp核酸序列,其中所述人源化tslp基因编码人源化tslp多肽,所述人源化tslp多肽包括与人tslp蛋白的成熟蛋白序列基本上相同的成熟蛋白序列。

2、在一些实施例中,所述人源化tslp多肽包括与人tslp蛋白的成熟蛋白序列相同的成熟蛋白序列。

3、在一些实施例中,所述人源化tslp蛋白包括与啮齿动物tslp蛋白的信号肽基本上相同的信号肽。在一些实施例中,所述人源化tslp蛋白包括与啮齿动物tslp蛋白,例如内源性啮齿动物tslp蛋白的信号肽相同的信号肽。

4、在一些实施例中,人源化tslp基因中的所述人tslp核酸序列至少编码人tslp蛋白的大部分成熟蛋白序列。在一些实施例中,所述人tslp核酸序列编码人tslp蛋白的所述成熟蛋白序列,例如人tslp蛋白的氨基酸29-159(例如,seq id no:3中所示的人tslp蛋白)。在一些实施例中,所述人tslp核酸序列包括人tslp基因的从编码成熟蛋白序列的第一氨基酸的密码子开始的外显子1至外显子4中的终止密码子。

5、在一些实施例中,人源化tslp基因中的所述啮齿动物tslp核酸序列包括啮齿动物tslp基因(例如,内源性啮齿动物tslp基因)的编码啮齿动物tslp信号肽的外显子序列。在一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠,并且人源化tslp基因中的所述啮齿动物核酸序列包括小鼠tslp基因的外显子1和编码信号肽氨基酸的外显子2的5'部分。在一些实施例中,人源化tslp基因中的所述啮齿动物tslp核酸序列还包括啮齿动物tslp基因(例如,内源性啮齿动物tslp基因)的3'utr。

6、在一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠,并且所述人源化tslp基因包括:(i)小鼠tslp基因的外显子1和编码信号肽氨基酸的外显子2的5'部分;以及(ii)人tslp基因的从编码成熟蛋白序列的第一氨基酸的密码子开始的外显子1至外显子4中的终止密码子。在一些实施例中,所述人源化tslp基因进一步包括小鼠tslp基因的3'utr。在各个实施例中,小鼠tslp基因是内源性小鼠tslp基因。

7、在一些实施例中,人源化tslp基因与如内源性啮齿动物tslp启动子等啮齿动物tslp启动子可操作地连接。

8、在一些实施例中,人源化tslp基因位于除内源性啮齿动物tslp基因座之外的基因座处。在一些实施例中,人源化tslp基因位于内源性啮齿动物tslp基因座处。

9、在人源化tslp基因位于内源性啮齿动物tslp基因座处的实施例中的一些实施例中,所述人源化tslp基因是由于位于内源性啮齿动物tslp基因座处的啮齿动物tslp基因组dna被人tslp核酸置换而形成的。在一些实施例中,所述人源化tslp基因是由于包括至少编码所述内源性啮齿动物tslp蛋白的大部分成熟蛋白序列的外显子序列的啮齿动物基因组dna被至少编码人tslp蛋白的大部分成熟蛋白序列的人tslp核酸置换而形成的。在一些实施例中,人源化tslp基因是由于包括编码所述内源性啮齿动物tslp蛋白的成熟蛋白序列的外显子序列的啮齿动物基因组dna被编码人tslp蛋白的成熟蛋白序列的人tslp核酸置换而形成的。在一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠,并且被置换的小鼠基因组dna包括内源性小鼠tslp基因的从编码成熟小鼠tslp蛋白的第一氨基酸的密码子开始的外显子2至外显子5中的终止密码子,并且所述人基因组dna包括人tslp基因的从编码成熟人tslp蛋白的第一氨基酸的密码子开始的外显子1至外显子4中的终止密码子。

10、在一些实施例中,所述啮齿动物对人源化tslp基因是纯合的。在一些实施例中,所述啮齿动物对人源化tslp基因是杂合的。

11、在一些实施例中,人源化tslp多肽在来自人源化tslp基因的啮齿动物中表达。

12、在一些实施例中,啮齿动物在其基因组中进一步包括人源化tslpr基因、人源化il7ra基因或其组合。

13、在一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠或大鼠。

14、在一些实施例中,本文公开了一种分离的啮齿动物组织或细胞,其基因组包括本文所描述的人源化tslp基因。在一些实施例中,所述啮齿动物细胞是啮齿动物胚胎干细胞。在一些实施例中,所述啮齿动物细胞是卵子或精子。在一些实施例中,分离的啮齿动物组织或细胞是小鼠组织或细胞或大鼠组织或细胞。

15、在一些实施例中,本文公开了一种啮齿动物胚胎,所述啮齿动物胚胎包括啮齿动物胚胎干细胞,所述啮齿动物胚胎干细胞包括本文所描述的人源化tslp基因。

16、在一些实施例中,本文公开了一种制备经基因修饰的啮齿动物的方法。在一些实施例中,所述方法包括:修饰啮齿动物基因组以包括人源化tslp基因,其中所述人源化tslp基因包括啮齿动物tslp核酸序列和人tslp核酸序列,并且编码人源化tslp多肽,所述人源化tslp多肽包括与人tslp蛋白的成熟蛋白序列基本上相同的成熟蛋白序列;以及制备包括经修饰的啮齿动物基因组的啮齿动物。

17、在一些实施例中,修饰啮齿动物基因组包括以下步骤:将包括人tslp核酸序列的核酸分子引入到啮齿动物胚胎干(es)细胞的基因组中,从而获得啮齿动物es细胞,其中所述人tslp核酸序列已整合到内源性tslp基因座中以置换啮齿动物tslp基因组dna,由此形成人源化tslp基因;以及从所获得的啮齿动物es细胞产生啮齿动物。在一些实施例中,所述人tslp核酸序列至少编码人tslp蛋白的大部分成熟蛋白序列。在一些实施例中,引入到所述es细胞中的所述核酸分子进一步包括侧接所述人tslp核酸序列的5'同源臂和3'同源臂,并且其中所述5'同源臂和所述3'同源臂与侧接待置换的啮齿动物tslp基因组dna的内源性啮齿动物基因座处的核酸序列同源。在一些实施例中,所述人源化tslp基因与啮齿动物tslp启动子,例如位于所述内源性啮齿动物tslp基因座处的内源性啮齿动物tslp启动子可操作地连接。

18、在所述方法的一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠或大鼠。

19、在一些实施例中,本文公开了一种靶向核酸构建体,所述靶向核酸构建体包括将整合到内源性啮齿动物tslp基因座处的啮齿动物tslp基因中的人tslp核酸序列,所述人tslp核酸序列侧接有与所述啮齿动物tslp基因座处的核苷酸序列同源的5'核苷酸序列和3'核苷酸序列,其中所述人tslp核酸序列整合到所述啮齿动物tslp基因中使得啮齿动物tslp基因组dna被所述人tslp核酸序列置换,由此形成人源化tslp基因,并且其中所述人tslp核酸序列至少编码人tslp蛋白的大部分成熟蛋白序列。在靶向核酸的一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠或大鼠。

20、在一些实施例中,本文公开了一种用于产生经基因修饰的啮齿动物细胞的体外方法,所述方法包括将靶向载体引入到啮齿动物细胞中,所述靶向载体包括至少编码人tslp蛋白的大部分成熟蛋白序列的人tslp核酸序列,所述人tslp核酸序列侧接有啮齿动物同源臂,所述啮齿动物同源臂介导所述人tslp核苷酸序列整合到内源性啮齿动物tslp基因座中,使得啮齿动物tslp基因组dna被所述人tslp核酸序列置换以形成如本文所描述的人源化tslp基因,由此产生经基因修饰的啮齿动物细胞。在一些实施例中,所述啮齿动物细胞是小鼠细胞或大鼠细胞。在一些实施例中,所述啮齿动物细胞是啮齿动物es细胞,并且所述方法产生经基因修饰的啮齿动物es细胞。

21、在一些实施例中,本文公开了一种经基因修饰的啮齿动物,所述啮齿动物在其基因组中包括人源化tslpr基因,其中所述人源化tslpr基因包括啮齿动物tslpr核酸序列和人tslpr核酸序列,其中所述人源化tslpr基因编码人源化tslpr多肽,所述人源化tslpr多肽包括与人tslpr蛋白的胞外结构域基本上相同的胞外结构域。

22、在一些实施例中,所述人源化tslpr蛋白包括与啮齿动物tslpr蛋白(例如,内源性啮齿动物tslpr蛋白)的跨膜细胞质序列基本上相同的跨膜细胞质序列。在一些实施例中,所述人源化tslpr蛋白包括与啮齿动物tslpr蛋白(例如,内源性啮齿动物tslpr蛋白)的跨膜细胞质序列相同的跨膜细胞质序列。

23、在一些实施例中,所述人源化tslpr蛋白包括与啮齿动物tslpr蛋白的信号肽基本上相同的信号肽。在一些实施例中,所述人源化tslpr蛋白包括与啮齿动物tslpr蛋白(例如,内源性啮齿动物tslpr蛋白)的信号肽相同的信号肽。

24、在一些实施例中,人源化tslpr基因中的所述人tslpr核酸序列至少编码人tslpr蛋白的大部分胞外结构域。在一些实施例中,人源化tslpr基因中的所述人tslpr核酸序列编码人tslpr的氨基酸29-231(例如,如seq id no:23中所示的人tslpr)。在一些实施例中,所述人tslpr核酸序列包括人tslpr基因的外显子2至编码外显子6中的最后一个胞外结构域氨基酸的密码子。

25、在一些实施例中,人源化tslpr基因中的所述啮齿动物tslpr核酸序列包括至少编码啮齿动物tslpr蛋白(例如,内源性啮齿动物tslpr蛋白)的大部分跨膜细胞质序列的啮齿动物tslpr基因的外显子序列。在一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠,并且所述啮齿动物tslpr核酸序列包括小鼠tslpr基因(例如,内源性小鼠tslpr基因)的从编码跨膜结构域的第一氨基酸的密码子开始的外显子6至外显子8。

26、在一些实施例中,人源化tslpr基因中的所述啮齿动物tslpr核酸序列包括啮齿动物tslpr基因的编码啮齿动物tslpr蛋白(例如,内源性啮齿动物tslpr蛋白)的信号肽的外显子序列。在一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠,并且所述啮齿动物核酸序列包括小鼠tslpr基因(例如,内源性小鼠tslpr基因)的外显子1。

27、在一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠,并且所述人源化tslpr基因包括:(i)小鼠tslpr基因(例如,内源性小鼠tslpr基因)的外显子1;(ii)人tslpr基因的外显子2至编码外显子6中的胞外结构域的最后一个氨基酸的密码子;以及(iii)小鼠tslpr基因的从编码跨膜结构域的第一氨基酸的密码子开始的外显子6至外显子8。

28、在一些实施例中,人源化tslpr基因与如内源性啮齿动物tslpr启动子等啮齿动物tslpr启动子可操作地连接。

29、在一些实施例中,人源化tslpr基因位于除内源性啮齿动物tslpr基因座之外的基因座处。在一些实施例中,人源化tslpr基因位于内源性啮齿动物tslpr基因座处。

30、在人源化tslpr基因位于内源性啮齿动物tslpr基因座处的实施例中的一些实施例中,所述人源化tslpr基因是由于位于内源性啮齿动物tslpr基因座处的啮齿动物tslpr基因组dna被人tslpr核酸置换而形成的。在一些实施例中,人源化tslpr基因是由于包括至少编码所述内源性啮齿动物tslpr蛋白的大部分胞外结构域的外显子序列的啮齿动物基因组dna被至少编码所述人tslpr蛋白的大部分胞外结构域的所述人tslpr核酸置换而形成的。在一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠,并且其中被置换的小鼠基因组dna包括内源性小鼠tslpr基因的外显子2至编码外显子6中的胞外结构域的最后一个氨基酸的密码子,并且所述人基因组dna包括人tslpr基因的外显子2至编码外显子6中的胞外结构域的最后一个氨基酸的密码子。

31、在一些实施例中,啮齿动物对人源化tslpr基因是杂合的。在一些实施例中,啮齿动物对人源化tslpr基因是纯合的。

32、在一些实施例中,人源化tslpr多肽在来自人源化tslpr基因的啮齿动物中表达。

33、在一些实施例中,啮齿动物在其基因组中进一步包括人源化tslp基因、人源化il7ra基因或其组合。

34、在一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠或大鼠。

35、在一些实施例中,本文公开了一种分离的啮齿动物组织或细胞,其基因组包括本文所描述的人源化tslpr基因。在一些实施例中,所述啮齿动物细胞是啮齿动物胚胎干细胞。在一些实施例中,所述啮齿动物细胞是卵子或精子。在一些实施例中,分离的啮齿动物组织或细胞是小鼠组织或细胞或大鼠组织或细胞。

36、在一些实施例中,本文公开了一种啮齿动物胚胎,所述啮齿动物胚胎包括啮齿动物胚胎干细胞,所述啮齿动物胚胎干细胞包括本文所描述的人源化tslpr基因。

37、在一些实施例中,本文公开了一种制备经基因修饰的啮齿动物的方法。在一些实施例中,所述方法包括:修饰啮齿动物基因组以包括人源化tslpr基因,其中所述人源化tslpr基因包括啮齿动物tslpr核酸序列和人tslpr核酸序列,并且编码人源化tslpr多肽,所述人源化tslpr多肽包括与人tslpr蛋白的胞外结构域基本上相同的胞外结构域;以及制备包括经修饰的啮齿动物基因组的啮齿动物。

38、在一些实施例中,修饰啮齿动物基因组包括以下步骤:将包括人tslpr核酸序列的核酸分子引入到啮齿动物胚胎干(es)细胞的基因组中,从而获得啮齿动物es细胞,其中所述人tslpr核酸序列已整合到内源性tslpr基因座中以置换啮齿动物tslpr基因组dna,由此形成人源化tslpr基因;以及从所获得的啮齿动物es细胞产生啮齿动物。在一些实施例中,所述人tslpr核酸序列至少编码人tslpr蛋白的大部分胞外结构域。在一些实施例中,引入到所述es细胞中的所述核酸分子进一步包括侧接所述人tslpr核酸序列的5'同源臂和3'同源臂,并且其中所述5'同源臂和所述3'同源臂与侧接待置换的啮齿动物tslpr基因组dna的内源性啮齿动物基因座处的核酸序列同源。在一些实施例中,所述人源化tslpr基因与啮齿动物tslpr启动子,例如位于所述内源性啮齿动物tslpr基因座处的内源性啮齿动物tslp启动子可操作地连接。

39、在所述方法的一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠或大鼠。

40、在一些实施例中,本文公开了一种靶向核酸构建体,所述靶向核酸构建体包括将整合到内源性啮齿动物tslpr基因座处的啮齿动物tslpr基因中的人tslpr核酸序列,所述人tslpr核酸序列侧接有与所述啮齿动物tslpr基因座处的核苷酸序列同源的5'核苷酸序列和3'核苷酸序列,其中所述人tslpr核酸序列整合到所述啮齿动物tslpr基因中使得啮齿动物tslpr基因组dna被所述人tslpr核酸序列置换,由此形成人源化tslpr基因,并且其中所述人tslpr核酸序列至少编码人tslp蛋白的大部分胞外结构域。在靶向核酸的一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠或大鼠。

41、在一些实施例中,本文公开了一种用于产生经基因修饰的啮齿动物细胞的体外方法,所述方法包括将靶向载体引入到啮齿动物细胞中,所述靶向载体包括至少编码人tslpr蛋白的大部分胞外结构域的人tslpr核酸序列,所述人tslpr核酸序列侧接有啮齿动物同源臂,所述啮齿动物同源臂介导所述人tslpr核苷酸序列整合到内源性啮齿动物tslpr基因座中,使得啮齿动物tslpr基因组dna被所述人tslp核酸序列置换以形成如本文所描述的人源化tslpr基因,由此产生经基因修饰的啮齿动物细胞。在一些实施例中,所述啮齿动物细胞是小鼠细胞或大鼠细胞。在一些实施例中,所述啮齿动物细胞是啮齿动物es细胞,并且所述方法产生经基因修饰的啮齿动物es细胞。

42、在一些实施例中,本文公开了一种经基因修饰的啮齿动物,所述啮齿动物在其基因组中包括人源化il7ra基因,其中所述人源化il7ra基因包括啮齿动物il7ra核酸序列和人il7ra核酸序列,其中所述人源化il7ra基因编码人源化il7ra多肽,所述人源化il7ra多肽包括与人il7ra蛋白的胞外结构域基本上相同的胞外结构域。

43、在一些实施例中,所述人源化il7ra蛋白包括与啮齿动物il7ra蛋白(例如,内源性啮齿动物il7ra蛋白)的跨膜细胞质序列基本上相同的跨膜细胞质序列。在一些实施例中,所述人源化il7ra蛋白包括与啮齿动物il7ra蛋白(例如,内源性啮齿动物il7ra蛋白)的跨膜细胞质序列相同的跨膜细胞质序列。

44、在一些实施例中,所述人源化il7ra蛋白包括与啮齿动物il7ra蛋白的信号肽基本上相同的信号肽。在一些实施例中,所述人源化il7ra蛋白包括与啮齿动物il7ra蛋白(例如,内源性啮齿动物il7ra蛋白)的信号肽相同的信号肽。

45、在一些实施例中,人源化il7ra基因中的所述人il7ra核酸序列至少编码所述人il7ra蛋白的大部分胞外结构域。在一些实施例中,人源化il7ra基因中的所述人il7ra核酸序列编码人il7ra蛋白的氨基酸21-236(例如,如seq id no:43中所示的人il7ra蛋白)。在一些实施例中,所述人il7ra核酸序列包括人il7ra基因的从编码成熟蛋白的第一氨基酸的外显子1中的密码子至外显子5。

46、在一些实施例中,人源化il7ra基因中的所述啮齿动物il7ra核酸序列包括至少编码啮齿动物il7ra蛋白(例如,内源性啮齿动物il7ra蛋白)的大部分跨膜细胞质序列的啮齿动物il7ra基因的序列。在一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠,并且所述啮齿动物il7ra核酸序列包括小鼠il7ra基因(例如,内源性小鼠il7ra基因)的外显子6至外显子8。

47、在一些实施例中,人源化il7ra基因中的所述啮齿动物il7ra核酸序列包括啮齿动物il7ra基因的编码啮齿动物il7ra蛋白(例如,内源性啮齿动物il7ra蛋白)的信号肽的外显子1的一部分。在一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠,并且所述啮齿动物核酸序列包括小鼠il7ra基因(例如,内源性小鼠il7ra基因)的包括小鼠il7ra的5'utr和编码信号肽两者的外显子1的一部分。

48、在一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠,并且所述人源化il7ra基因包括:(i)小鼠il7ra基因(例如,内源性小鼠il7ra基因)的编码小鼠il7ra蛋白的信号肽的外显子1的一部分;(ii)人il7ra基因的从编码成熟蛋白的第一氨基酸的密码子开始的外显子1至外显子5;以及(iii)所述小鼠il7ra基因的外显子6至外显子8。

49、在一些实施例中,人源化il7ra基因与如内源性啮齿动物il7ra启动子等啮齿动物il7ra启动子可操作地连接。

50、在一些实施例中,人源化il7ra基因位于除内源性啮齿动物il7ra基因座之外的基因座处。在一些实施例中,人源化il7ra基因位于内源性啮齿动物il7ra基因座处。

51、在人源化il7ra基因位于内源性啮齿动物il7ra基因座处的实施例中的一些实施例中,所述人源化il7ra基因是由于位于内源性啮齿动物il7ra基因座处的啮齿动物il7ra基因组dna被人il7ra核酸置换而形成的。在一些实施例中,人源化il7ra基因是由于包括至少编码所述内源性啮齿动物il7ra蛋白的大部分胞外结构域的外显子序列的啮齿动物基因组dna被至少编码所述人il7ra蛋白的大部分胞外结构域的所述人il7ra核酸置换而形成的。在一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠,并且其中被置换的小鼠基因组dna包括内源性小鼠il7ra基因的从编码成熟蛋白序列的第一氨基酸的外显子1中的密码子至外显子5,并且所述人基因组dna包括人il7ra基因的从编码成熟蛋白序列的第一氨基酸的外显子1中的密码子至外显子5。

52、在一些实施例中,啮齿动物对人源化il7ra基因是杂合的。在一些实施例中,啮齿动物对人源化il7ra基因是纯合的。

53、在一些实施例中,人源化il7ra多肽在来自人源化il7ra基因的啮齿动物中表达。

54、在一些实施例中,啮齿动物在其基因组中进一步包括人源化tslp基因、人源化tslpr基因或其组合。

55、在一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠或大鼠。

56、在一些实施例中,本文公开了一种分离的啮齿动物组织或细胞,其基因组包括本文所描述的人源化il7ra基因。在一些实施例中,所述啮齿动物细胞是啮齿动物胚胎干细胞。在一些实施例中,所述啮齿动物细胞是卵子或精子。在一些实施例中,分离的啮齿动物组织或细胞是小鼠组织或细胞或大鼠组织或细胞。

57、在一些实施例中,本文公开了一种啮齿动物胚胎,所述啮齿动物胚胎包括啮齿动物胚胎干细胞,所述啮齿动物胚胎干细胞包括本文所描述的人源化il7ra基因。

58、在一些实施例中,本文公开了一种制备经基因修饰的啮齿动物的方法。在一些实施例中,所述方法包括:修饰啮齿动物基因组以包括人源化il7ra基因,其中所述人源化il7ra基因包括啮齿动物il7ra核酸序列和人il7ra核酸序列,并且编码人源化il7ra多肽,所述人源化il7ra多肽包括与人il7ra蛋白的胞外结构域基本上相同的胞外结构域;以及制备包括经修饰的啮齿动物基因组的啮齿动物。

59、在一些实施例中,修饰啮齿动物基因组包括以下步骤:将包括人il7ra核酸序列的核酸分子引入到啮齿动物胚胎干(es)细胞的基因组中,从而获得啮齿动物es细胞,其中所述人il7ra核酸序列已整合到内源性il7ra基因座中以置换啮齿动物il7ra基因组dna,由此形成人源化il7ra基因;以及从所获得的啮齿动物es细胞产生啮齿动物。在一些实施例中,所述人il7ra核酸序列至少编码人il7ra蛋白的大部分胞外结构域。在一些实施例中,引入到所述es细胞中的所述核酸分子进一步包括侧接所述人il7ra核酸序列的5'同源臂和3'同源臂,并且其中所述5'同源臂和所述3'同源臂与侧接待置换的啮齿动物il7ra基因组dna的内源性啮齿动物基因座处的核酸序列同源。在一些实施例中,所述人源化il7ra基因与啮齿动物il7ra启动子,例如位于所述内源性啮齿动物il7ra基因座处的内源性啮齿动物il7ra启动子可操作地连接。

60、在所述方法的一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠或大鼠。

61、在一些实施例中,本文公开了一种靶向核酸构建体,所述靶向核酸构建体包括将整合到内源性啮齿动物il7ra基因座处的啮齿动物il7ra基因中的人il7ra核酸序列,所述人il7ra核酸序列侧接有与所述啮齿动物il7ra基因座处的核苷酸序列同源的5'核苷酸序列和3'核苷酸序列,其中所述人il7ra核酸序列整合到所述啮齿动物il7ra基因中使得啮齿动物il7ra基因组dna被所述人il7ra核酸序列置换,由此形成人源化il7ra基因,并且其中所述人il7ra核酸序列至少编码人il7ra蛋白的大部分胞外结构域。在靶向核酸的一些实施例中,所述啮齿动物是小鼠或大鼠。

62、在一些实施例中,本文公开了一种用于产生经基因修饰的啮齿动物细胞的体外方法,所述方法包括将靶向载体引入到啮齿动物细胞中,所述靶向载体包括至少编码人il7ra蛋白的大部分胞外结构域的人il7ra核酸序列,所述人il7ra核酸序列侧接有啮齿动物同源臂,所述啮齿动物同源臂介导所述人il7ra核苷酸序列整合到内源性啮齿动物il7ra基因座中,使得啮齿动物il7ra基因组dna被所述人il7ra核酸序列置换以形成如本文所描述的人源化il7ra基因,由此产生经基因修饰的啮齿动物细胞。在一些实施例中,所述啮齿动物细胞是小鼠细胞或大鼠细胞。在一些实施例中,所述啮齿动物细胞是啮齿动物es细胞,并且所述方法产生经基因修饰的啮齿动物es细胞。

63、在一些实施例中,本文公开的啮齿动物在其基因组中包括一种或多种另外的基因修饰,如人源化sirpα基因、内源性rag2基因的破坏、内源性il-2rg基因的破坏、人源化tpo基因和人源化gm-csf/il-3基因座。啮齿动物对任何此类另外的基因修饰可以是杂合的或纯合的。

64、在一些实施例中,本文公开的啮齿动物在其基因组中包括人源化tslp基因和人源化sirpα基因,并且对rag2和il-2rg基因两者是纯合无效的。在一些此类实施例中,啮齿动物在其基因组中进一步包括人源化tpo基因和/或人源化gm-csf/il-3基因座。啮齿动物对人源化基因可以是杂合的或纯合的。

65、在一些实施例中,本文公开的啮齿动物在其基因组中包括人源化tslp基因、人源化tslpr基因和人源化sirpα基因,并且对rag2和il-2rg基因两者是纯合无效的。在一些此类实施例中,啮齿动物在其基因组中进一步包括人源化tpo基因和/或人源化gm-csf/il-3基因座。啮齿动物对人源化基因可以是纯合的或杂合的。

66、在一些实施例中,本文公开的啮齿动物在其基因组中包括人源化tslp基因、人源化tslpr基因、人源化il7ra基因和人源化sirpα基因,并且对rag2和il-2rg基因两者是纯合无效的。在一些此类实施例中,啮齿动物在其基因组中进一步包括人源化tpo基因和/或人源化gm-csf/il-3基因座。啮齿动物对人源化基因可以是纯合的或杂合的。

67、在一些实施例中,如本文所公开的包括人源化tslp基因、人源化tslpr基因、人源化il7ra基因或其组合,任选地具有一种或多种另外的基因修饰的经基因修饰的啮齿动物用于制备过敏性疾病(例如,气道或皮肤炎症)或癌症的啮齿动物模型。

68、在一些实施例中,本文公开了一种测试用于治疗过敏性病状的候选药剂的方法,所述方法包括:诱导本文公开的经基因修饰的啮齿动物的过敏性病状;向所述啮齿动物施用候选药剂;以及确定所述候选药剂是否抑制所述啮齿动物的所述过敏性病状。

69、在一些实施例中,本文公开了一种测试用于治疗癌症的候选药剂的方法,所述方法包括:将人癌细胞移植到本文公开的经基因修饰的啮齿动物体内;向所述啮齿动物施用候选药剂;以及确定所述候选药剂是否抑制所述啮齿动物体内的癌细胞的生长。在一些实施例中,所述癌症是th2驱动的癌症,包含例如乳腺癌、肺癌和胰腺癌。

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