用于预防或治疗结核病的药物组合物的制作方法

本发明涉及一种融合蛋白，其包含：源自结核分枝杆菌(mycoba teriumtuberculosis)的融合多肽；多核苷酸，用于编码上述蛋白；重组载体，包含上述多核苷酸；以及用于预防或治疗结核病的药物组合物，包含上述融合蛋白、多核苷酸或重组载体。

背景技术：

1、结核病是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis)引起的感染性疾病，当传染性肺结核患者咳嗽或打喷嚏时，结核分枝杆菌便会排到空气中，周围人可能吸入这些飞沫而被感染。通常是通过呼吸道传染，但并非每个感染者均成为结核病患者，在正常免疫系统的状态下，即使被感染了结核分枝杆菌也不会发病，也可过正常人的生活。因此，需要开发一种用于预防或治疗结核病的疫苗，以保护未感染结核病的人群或被感染结核病的人群。

2、卡介苗(bacillus calmette-gurin，bcg)是一种减弱牛型结核分枝杆菌(mycobacterium bovis)的减毒活疫苗，是全球最常用的结核疫苗，可有效保护儿童。但其存在如下问题，即持续时间仅限于童年，并且对作为结核病主要形式的成人肺结核的预防效果处于0～80％的不稳定状态。由此，世界各国家正在开发能够代替或补充现有结核疫苗的新结核疫苗。

3、开发出的新型结核疫苗包括：利用结核病抗原的蛋白质亚单位疫苗；将诱导防御免疫的结核抗原表达在质粒dna或病毒载体中的dn a疫苗或病毒载体疫苗；将诱导防御免疫的结核抗原表达在结核抗原的bcg疫苗的重组bcg疫苗；去除结核细菌的致病基因的基因重组结核病疫苗等。迄今为止，作为新型结核病预防疫苗，较多尝试的是dna疫苗，并在动物模型中证明了其功效。此外，利用dna疫苗技术开发了许多结核病抗原。

4、dna疫苗已被证明在建立包括细胞毒性t淋巴细胞(cytotoxic tlymphocyte，ctl)和th1反应在内的细胞免疫反应方面非常有效，已知上述ctl和th1反应对于在小鼠和人类中获得有效的抗细菌免疫(anti-mycobacteria immunity)至关重要(bonato vl et al.，infect immun，1998，66:169-175)。此外，由于在引入有效的免疫技术方面，选择对结核病的防御功效至关重要的适当抗原的重要性，因此正在努力进行抗原的开发。

5、为此，本发明人利用具有结核病的防御功效的抗原开发了用于预防或治疗结核病的疫苗，并完成了本发明。

技术实现思路

1、技术问题

2、本发明的一目的在于，提供包含源自结核分枝杆菌的融合多肽的融合蛋白。

3、本发明的再一目的在于，提供用于编码上述融合蛋白的多核苷酸。

4、本发明另一目的在于，提供包含上述多核苷酸的重组载体。

5、本发明的还有一目的在于，提供包含上述融合蛋白的用于预防或治疗结核病的药物组合物。

6、本发明又一目的在于，提供包含上述多核苷酸的用于预防或治疗结核病的药物组合物。

7、本发明又一目的在于，提供包含上述重组载体的用于预防或治疗结核病的药物组合物。

8、本发明又一目的在于，提供结核病的预防或治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的上述融合蛋白的步骤。

9、本发明又一目的在于，提供结核病的预防或治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的上述多核苷酸的步骤。

10、本发明又一目的在于，提供结核病的预防或治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的上述重组载体的的步骤。

11、本发明又一目的在于，提供上述融合蛋白在制备用于预防或治疗结核病的药物中的使用提供上述的使用。

12、本发明又一目的在于，提供上述多核苷酸在制备用于预防或治疗结核病的药物中的使用。

13、本发明又一目的在于，提供上述重组载体在制备用于预防或治疗结核病的药物中的使用。

14、解决问题的手段

15、为了实现上述目的，本发明提供包含源自结核分枝杆菌的融合多肽的融合蛋白。

16、并且，本发明提供用于编码上述融合蛋白的多核苷酸。

17、并且，本发明提供包含上述多核苷酸的重组载体。

18、并且，本发明提供包含上述融合蛋白的用于预防或治疗结核病的药物组合物。

19、并且，本发明提供包含上述多核苷酸的用于预防或治疗结核病的药物组合物。

20、并且，本发明提供包含上述重组载体的用于预防或治疗结核病的药物组合物。

21、并且，本发明提供结核病的预防或治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的上述融合蛋白的步骤。

22、并且，本发明提供结核病的预防或治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的上述多核苷酸的步骤。

23、并且，本发明提供结核病的预防或治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的上述重组载体的步骤。

24、并且，本发明提供上述融合蛋白在制备用于预防或治疗结核病的药物中的使用。

25、并且，本发明提供上述多核苷酸在制备用于预防或治疗结核病的药物中的使用。

26、并且，本发明提供上述重组载体在制备用于预防或治疗结核病的药物中的使用。

27、发明的效果

28、根据本发明的融合蛋白具有可以增加人体对结核病抗原的特异性免疫反应且显著减少肺部中结核杆菌数量的效果，因此可有效用于结核病的预防或治疗上。

技术特征：

1.一种融合蛋白，其特征在于，包含源自结核分枝杆菌(mycoba cteriumtuberculosis)的融合多肽。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，上述融合多肽选自由ag85a、tb10.4、mtb32b及psts3组成的组。

3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，上述ag85a由序列号1的氨基酸序列组成；上述tb10.4由序列号2的氨基酸序列组成；上述mtb32b由序列号3的氨基酸序列组成；上述psts3由序列号4的氨基酸序列组成。

4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，上述融合多肽还包含选自由ppe39、glcb及ripa组成的组中的多肽。

5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于，上述ppe39由序列号5的氨基酸序列组成；上述glcb由序列号6的氨基酸序列组成；上述ripa由序列号7的氨基酸序列组成。

6.根据权利要求2或4所述的融合蛋白，其特征在于，上述融合多肽通过gs接头连接。

7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其特征在于，上述gs接头由序列号8的氨基酸序列组成。

8.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，上述融合蛋白还包含信号肽。

9.根据权利要求8所述的融合蛋白，其特征在于，上述信号肽选自由组织型纤溶酶原激活剂信号肽、单纯疱疹病毒糖蛋白ds信号肽及生长激素信号肽组成的组。

10.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，上述融合蛋白还包含免疫增强肽。

11.根据权利要求10所述的融合蛋白，其特征在于，上述免疫增强肽选自由cd40配体、fms样酪氨酸激酶3配体、鞭毛蛋白及ox40组成的组。

12.一种多核苷酸，其特征在于，上述多核苷酸用于编码根据权利要求1至11中任一项所述的融合蛋白。

13.一种重组载体，其特征在于，包含根据权利要求12所述的多核苷酸。

14.根据权利要求13所述的重组载体，其特征在于，上述重组载体为质粒载体或病毒载体。

15.一种用于预防或治疗结核病的药物组合物，其特征在于，包含根据权利要求1至11中任一项所述的融合蛋白。

16.根据权利要求15所述的组合物，其特征在于，上述组合物还包含含有白细胞介素-12、白细胞介素-21及巨噬细胞炎性蛋白-1α的免疫佐剂。

17.根据权利要求16所述的组合物，其特征在于，上述免疫佐剂包含序列号30至33的氨基酸序列。

18.一种用于预防或治疗结核病的药物组合物，其特征在于，包含根据权利要求12所述的多核苷酸。

19.根据权利要求18所述的组合物，其特征在于，上述组合物还包含用于编码含有白细胞介素-12、白细胞介素-21及巨噬细胞炎性蛋白-1α的免疫佐剂的多核苷酸。

20.一种用于预防或治疗结核病的药物组合物，其特征在于，包含根据权利要求13所述的重组载体。

技术总结
本发明涉及一种融合蛋白，其包含：源自结核分枝杆菌(Mycoba terium tuberculosis)的融合多肽；多核苷酸，用于编码上述蛋白；重组载体，包含上述多核苷酸；以及用于预防或治疗结核病的药物组合物，包含上述融合蛋白、多核苷酸或重组载体。

技术研发人员：徐裕锡,朴基硕
受保护的技术使用者：格纳西尼有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15