本发明涉及生物医药,具体而言,涉及b7h3抗体及包含其的双功能抗体。
背景技术:
1、b7h3(cd276),是一种i型跨膜蛋白(chapoval a.i.,et al.,(2001)nat.immunol.2:269)。b7h3存在于一些非免疫性成纤维细胞、内皮细胞和成骨细胞,以及一些免疫细胞,如b细胞,t细胞,单核细胞,树突状细胞(dc)或天然杀伤细胞(nk)。在许多恶性肿瘤中,b7h3的表达水平相当高。同时,b7h3具有较为广泛的调节免疫系统的功能。
2、专利us20020102264中的8h9克隆(omburtamab)是一种针对b7h3的鼠源igg1单克隆抗体。体外实验表明,8h9能与人的多种实体瘤结合(modak s.,et al.,(2001)cancerres.61:4048-54),并能促进nk细胞对b7h3阳性肿瘤细胞的杀伤作用(cheung n,et al.,(2003)hybrid hybridomics 22:209-218)。动物实验显示,8h9能抑制肉瘤和脑瘤的生长(modak s.,et al.,(2005)cancer biother.radiopharm.20:534-546;luther n.,(2008)neurosurgery 63:1167-1174)。临床数据表明,8h9可以显著延长中枢神经系统实体瘤高危病人的生存期(kramer k,et al.,(2007)j.clin.oncol.25,5465–70)。同位素镥lu177标记的8h9(omburtamab)最近刚在美国批准用于成神经管细胞瘤的治疗。由于8h9是鼠源抗体,在用于人体治疗过程中会因其免疫原性而产生抗药抗体,从而降低其疗效并可能产生负作用。mahiuddin等对8h9进行人源化和亲和力成熟改造(mahiuddin a,et al.,(2015)j.biol.chem.290,30018-29),但其轻重链人源化程度相对较低,分别为70.5%和76.5%。因此,设计人源化程度更高的8h9抗体,可以减少临床使用过程中产生的免疫副反应,更好地增加临床疗效。
3、近年来,双功能抗体的构建为抗体新药研发创造了一个新的途径。不少双功能抗体新药已陆续进入临床试验,显示了比相应的单抗更强的治疗效果。因此,用人源化的8h9抗体与其他抗体或者结合片段【例如4-1bb(cd137)抗体、vegf-trap蛋白或siprα蛋白】构建双功能抗体,将可进一步促进免疫细胞的功能,提高抗体的抗肿瘤效果。
技术实现思路
1、本发明涉及b7h3抗体或其抗原结合片段,其包含氨基酸序列依次如seq id no:1~3所示的重链互补决定区以及氨基酸序列依次如seq id no:4~6所示的轻链互补决定区。
2、本发明还涉及融合蛋白,其含有如上所述的b7h3抗体或其抗原结合片段。
3、本发明还涉及如上所述的b7h3抗体或其抗原结合片段及融合蛋白相关的核酸、载体及宿主细胞。
4、本发明还涉及如上所述的b7h3抗体或其抗原结合片段及融合蛋白的制备方法。
5、本发明还涉及药物组合物,其包括如上所述的b7h3抗体或其抗原结合片段,或如上所述的融合蛋白,或如上所述的偶联物。
6、本发明还涉及如上所述的b7h3抗体或其抗原结合片段,或如上所述的融合蛋白,或如上所述的偶联物在制备用以治疗b7h3阳性癌症或用以调节免疫系统的药物中的应用。
7、本发明对b7h3的单克隆抗体8h9的cdr区及fr区均进行了人源化,人源化后的抗体能有效阻断b7h3引起的免疫抑制作用。此外,用人源化处理后的b7h3抗体或其抗原结合片段与4-1bb单克隆抗体、vegf-trap蛋白和siprα蛋白构建成融合蛋白,进一步提高了抗体对免疫细胞的激活作用。所述抗体在制备应用于抑制癌细胞及调节b7h3的作用、水平以及增强机体免疫力的相关药物,尤其是治疗癌症相关药物方面具有广阔的应用前景。
1.b7h3抗体或其抗原结合片段,其包含氨基酸序列依次如seq id no:1~3所示的重链互补决定区以及氨基酸序列依次如seq id no:4~6所示的轻链互补决定区。
2.根据权利要求1所述的b7h3抗体或其抗原结合片段,其包含氨基酸序列如seq idno:7或8所示的重链可变区,以及氨基酸序列如seq id no:9或10所示的轻链可变区。
3.根据权利要求2所述的b7h3抗体或其抗原结合片段,所述重链可变区的第102位a突变为g。
4.根据权利要求1~3任一项所述的b7h3抗体或其抗原结合片段,所述抗原结合片段为f(ab')2、fab、scfv以及双特异抗体中的一种。
5.根据权利要求1~3任一项所述的b7h3抗体或其抗原结合片段,其具有恒定区,重链恒定区序列选自igg1、igg2、igg3、igg4、iga、igm、ige、igd任意一种的恒定区序列;轻链恒定区为κ或λ链;所述恒定区优选是人来源的。
6.融合蛋白,其含有权利要求1~5任一项所述的b7h3抗体或其抗原结合片段。
7.根据权利要求6所述的融合蛋白,其包含靶向b7h3的第一蛋白功能区以及靶向第二抗原的第二蛋白功能区;
8.根据权利要求7所述的融合蛋白,所述第二蛋白功能区选自4-1bb抗体或其抗原结合片段、vegf-trap全长或其片段以及sirpα全长或其片段。
9.根据权利要求8所述的融合蛋白,所述4-1bb抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列依次如seq id no:11~13所示的重链互补决定区h-cdr1、h-cdr2、h-cdr3,以及氨基酸序列依次如seq id no:14~16所示的轻链互补决定区l-cdr1、l-cdr2、l-cdr3。
10.根据权利要求9所述的融合蛋白所述4-1bb抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列如seq id no:17所示的重链可变区,以及氨基酸序列如seq id no:18所示的轻链可变区,优选其为seq id no:19所示的scfv。
11.根据权利要求8所述的融合蛋白,所述vegf-trap片段的氨基酸序列如seq id no:20所示。
12.根据权利要求8所述的融合蛋白,所述sirpα片段的氨基酸序列如seq id no:21所示。
13.根据权利要求7~12任一项所述的融合蛋白,所述第一蛋白功能区具有的抗体重链,且重链的c端和所述第二蛋白功能区的n端通过连接肽连接。
14.分离的核酸,其编码权利要求1~5任一项所述的b7h3抗体或其抗原结合片段,或权利要求6~13任一项所述的融合蛋白。
15.载体,其包含权利要求14所述的核酸。
16.宿主细胞,其包含权利要求14所述的核酸,或被权利要求15所述的载体所转化。
17.制备权利要求1~5任一项所述的b7h3抗体或其抗原结合片段,或权利要求6~13任一项所述的融合蛋白的方法,包括在合适的条件下培养权利要求16所述的宿主细胞,以及从细胞培养物中回收目的产物。
18.偶联物,其为与治疗剂或检测剂所结合的权利要求1~5任一项所述的b7h3抗体或其抗原结合片段,或权利要求6~13任一项所述的融合蛋白。
19.药物组合物,其包含权利要求1~5任一项所述的b7h3抗体或其抗原结合片段,或权利要求6~13任一项所述的融合蛋白,或权利要求18所述的偶联物。
20.权利要求1~5任一项所述的b7h3抗体或其抗原结合片段,或权利要求6~13任一项所述的融合蛋白,或权利要求18所述的偶联物在制备用以治疗b7h3阳性癌症或用以调节免疫系统的药物中的应用。