一种miRNA及其在制备治疗乳腺癌的药物中的应用

一种mirna及其在制备治疗乳腺癌的药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及分子生物学、细胞生物学及药理学。具体涉及一种mirna及其在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。


背景技术：

2.九香虫aspongopus chinensis(dallas,1851)为半翅目hemiptera兜蝽科dinidoridae昆虫，俗称黑兜虫、瓜黑蝽、屁板虫、蜣螂虫、打屁虫和屁巴虫等。2015年版中国药典，九香虫以药材和饮片类别写入，具理气止痛，温中助阳功效。中药九香虫为九香虫干燥成体，始记载于《本草纲目》，“产于贵州永宁卫赤水河中......至惊蛰后即飞出，不可用矣。气味：咸，温，无毒，主治膈脘滞气，脾肾亏损，壮元阳”。九香虫配伍方药在临床上用于胃脘痛、子宫内膜异位症等多种疾病的治疗，也用于治疗癌痛，均有较好疗效，但是其作用机理相关研究较少。
3.micrornas(mirnas)是由15-28个核苷酸组成的非编码的、短序列的小分子rna。目前已发现约28000个mirnas，且已有研究表明，这些mirnas 可以调控人类大约60％的基因表达，随后参与人类一系列的生理活动，因此研究mirnas在组织内的分布、表达及调控作用，对了解人类疾病(如癌症)的发生发展及治疗有重要的作用。mirnas主要通过与靶标mrna 3’utr区域结合，破坏mrna的稳定性或阻止其翻译，抑制其靶标基因的表达。研究表明， mirnas几乎调控生物体内所有的生长发育、生理和病理过程。mirnas在肿瘤进展中发挥着重要作用，可通过调控靶标基因的表达，影响大多数肿瘤相关通路，如细胞增殖、细胞迁移、细胞自噬和凋亡通路等，从而调节肿瘤的生长、迁移、凋亡和免疫逃逸等，其可能是一种具有发展前景的天然抗肿瘤核酸药物。
4.鉴于mirnas的重要作用，发掘更多与人类疾病相关的mirnas是本领域技术人员不断要解决的技术问题。


技术实现要素：

5.为解决上述技术问题，本发明提供了mirna及其在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。
6.本发明的第一方面，提供一种mirna，其序列如seq id no.1所示。
7.本发明的第二方面，提供所述的mirna在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。
8.本发明的第三方面，提供所述mirna的编码基因。
9.本发明的第四方面，提供含有所述编码基因的慢病毒载体。
10.本发明的第五方面，提供所述的慢病毒载体在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。
11.本发明的第六方面，提供一种治疗乳腺癌的药物，所述药物包含所述的 mirna或所述的慢病毒载体，和药学上可接受的载体。
12.进一步的，所述药学上可接受的载体选自壳聚糖、胆固醇、脂质体和纳米颗粒中的一种或多种。
13.更进一步的，所述药物为口服制剂或注射剂。
14.本发明的第七方面，提供一种体外非治疗性抑制乳腺癌细胞增殖的方法，包括以下步骤：
15.将所述的mirna转染至体外培养的乳腺癌细胞中。
16.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
17.本发明首次在九香虫中筛选得到一个高表达的mirna，命名为 ach-mir-276a-3p，本发明实验结果证明，ach-mir-276a-3p在体内、外均能显著抑制乳腺癌mcf-7细胞的增殖，且抑制荷瘤小鼠乳腺癌瘤体生长，为乳腺癌的治疗提供新的途径。
附图说明
18.图1为九香虫血淋巴中mirna表达量。
19.图2为ach-mir-276a-3p体外对乳腺癌细胞mcf-7(a)和mda-mb-453 (b)增殖的影响。
20.图3为mcf-7人乳腺癌裸鼠模型瘤体图。
21.图4为mcf-7人乳腺癌裸鼠模型瘤体体积统计图。
22.图5为mcf-7人乳腺癌裸鼠模型瘤体重量统计图。
具体实施方式
23.下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明，但不应理解为本发明的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
24.实施例1：ach-mir-276a-3p序列的获取
25.(1)九香虫的采集及预处理：将九香虫用清水清洗干净，置于-80℃冰箱保存；
26.(2)九香虫血淋巴提取：首先将冰冻后的九香虫拿出放入4℃冰箱解冻，解冻完成后去除头胸部，取腹部进行物理压榨，将榨出的内容物置于离心管中，在12000
×
g，4℃下离心10min，离心结束后，离心结束后分为三层，吸取中间层暗红色液体置于一个新的离心管中，在10000
×
g，4℃离心5min，取暗红色液体即得九香虫血淋巴。
27.(3)将提取好的血淋巴送至华大集团进行测序，通过分析筛选，得到在九香虫中高表达的mirna序列：uaggaacuucauaccgugcucu，如seq idno.1所示，长度为22个核苷酸，命名为ach-mir-276a-3p(图1)。
28.实施例2：ach-mir-276a-3p在体内、外抑制乳腺癌细胞增殖的应用
29.(1)体外实验
30.首先选取人乳腺癌mcf-7和mda-mb-453细胞系，将浓度为50nm的 nc mimic(阴性对照)和九香虫ach-mir-276a-3p mimic(苏州吉玛基因股份有限公司合成)分别转染进两种乳腺癌细胞，cck-8法和全波长酶标仪 multiskan go分别在24h、48h、72h和96h测450nm的吸光度值，计算细胞活力。结果如图2和图3所示，与nc处理组相比，ach-mir-276a-3p显著抑制两种人乳腺癌细胞系mcf-7和mda-mb-453的增殖。
31.(2)动物实验
32.将浓度为50nm的nc mimic(negative control)和九香虫ach-mir-276a-3p mimic
分别转染人乳腺癌mcf-7细胞系，在细胞内稳定表达后，将细胞注射到裸鼠，构建mcf-7人乳腺癌裸鼠模型，8天后颈椎脱臼处死小鼠，解剖瘤体，称重及测量体积。结果如图4和图5所示：与nc处理组相比，ach-mir-276a-3p 能够显著抑制抑制瘤体的生长。
33.尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
34.显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。


技术特征：
1.一种mirna，其特征在于，其序列如seq id no.1所示。2.权利要求1所述的mirna在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。3.权利要求1所述mirna的编码基因。4.含有权利要求3所述编码基因的慢病毒载体。5.权利要求4所述的慢病毒载体在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。6.一种治疗乳腺癌的药物，其特征在于，所述药物包含权利要求1所述的mirna或权利要求4所述的慢病毒载体，和药学上可接受的载体。7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药学上可接受的载体选自壳聚糖、胆固醇、脂质体和纳米颗粒中的一种或多种。8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述药物为口服制剂或注射剂。9.一种体外非治疗性抑制乳腺癌细胞增殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1所述的mirna转染至体外培养的乳腺癌细胞中。

技术总结
本发明涉及分子生物学、细胞生物学及药理学，具体涉及一种miRNA及其在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。所述miRNA命名为ach-miR-276a-3，序列如SEQ ID NO.1所示，其能显著抑制乳腺癌细胞增殖和瘤体的生长，为乳腺癌的治疗提供新的途径。提供新的途径。提供新的途径。


技术研发人员：郭建军 陈绪美 蔡仁莲
受保护的技术使用者：贵州大学
技术研发日：2022.05.07
技术公布日：2022/6/21