一种鉴定白菜苔杂交种“雪银1573”种子纯度的引物及应用的制作方法

本发明涉及一种鉴定白菜苔杂交种“雪银1573”种子纯度的引物及应用，属于生物。

背景技术：

1、菜苔，又名菜心、菜尖和苔心菜等，种类很多，包括有白菜苔、青菜苔(即油菜苔)、腊菜苔、紫菜苔和芥菜苔等。其性凉而味甘，属性和味道各异，但都是十字花科植物二年生或两年生草本菜类的花苔及嫩叶。

2、白菜苔，是小白菜从菜芯里抽出的苔，掐苔的尖部食用，是秋冬期间的重要蔬菜品种之一，全国各地均有栽培，尤其湖南、湖北、安徽、江苏、浙江、江西等地面积较大。

3、白菜苔杂交种“雪银1573”是武汉川禾农业科技有限公司选育的一个早熟白菜苔优良杂交种，适合长江流域秋季种植，具有生育期短、苔性早、抗病性强等特点，抽出的菜苔具有颜色嫩绿、口感甜脆、苔叶小等优点。近年来，该品种的栽培面积不断扩大，种子需求量也逐年增加。

4、白菜苔种子的价值较高，种子纯度的高低是直接衡量种子质量优劣的主要指标。种子纯度降低会显著降低白菜苔的产量和产品品质，甚至可能造成不可估量的经济损失。因此，每一批的生产种在出库之前都应该进行鉴定，严把质量关。然而传统的种子纯度鉴定方法是以播种后植株的田间形态观察为依据，其周期长、工作量大，且易受环境、季节因素影响，导致结果存在偏差。

5、近年来，随着现代遗传学和分子生物学技术的快速发展,基于dna多态性的分子标记正逐渐成为分析生物遗传多样性的有力工具,因其具有不受环境影响、测试周期短、供选择的标记数量多、可以进行高通量测试分析的优势,已经大规模用于种子纯度鉴定及品种真伪性的鉴定。微卫星(ssr)标记技术具有共显性、多态性好、重复性好、实验操作简单等优点被广泛应用，是目前作物品种鉴定和种子纯度鉴定研究中最常用的标记之一。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供了一种用于鉴定白菜苔杂交种“雪银1573”种子纯度的一对ssr引物及应用，为实现该目的，本发明采用以下技术方案：

2、一种用于鉴定白菜苔杂交种“雪银1573”种子纯度的一对ssr引物，所述引物核苷酸序列如序列表seq id no.1～2所示。

3、本发明进一步公开了采用所述引物鉴定白菜苔杂交种“雪银1573”种子纯度的方法，包括以下步骤：

4、(1)提取白菜苔杂交种“雪银1573”及亲本基因组dna；

5、(2)以上述的样品的基因组dna为模版，采用如序列表seq id no.1～2所示引物进行pcr扩增，采用的反应体系为：10μl体系，包括：2×taq dna聚合酶mix 5μl，上游和下游引物10μmol/l各0.5μl，供试白菜苔杂交种基因组dna模板(50ng/μl)1μl，双蒸水补足10μl；

6、采用的扩增程序为：94℃预变性4min，35个扩增循环(94℃45sec，55℃30sec，72℃45sec)；72℃延伸5min，4℃保存；

7、(3)pcr扩增产物鉴定：将上述的扩增获得的产物经10％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染法染色,待测样品pcr扩增产物的电泳条带同时含有父本材料扩增产物的条带和母本材料扩增产物的条带，为白菜苔杂交种“雪银1573”种子；

8、(4)种子纯度计算，统计上述银染的结果：所鉴定的白菜苔杂交种“雪银1573”的种子纯度(％)＝(总鉴定种子粒数-非杂交种数-外来杂种数)/总鉴定种子粒数×100％。

9、本发明更进一步公开了所述的鉴定方法在用于快速鉴定白菜苔杂交种“雪银1573”种子纯度方面的应用。

10、本发明的有益效果：本发明提供的一对引物具有显著的特异性，提供的鉴定方法简便快捷、稳定可靠、成本低,可在3-4h之内完成“雪银1573”种子纯度鉴定工作,能有效保障“雪银1573”的种子质量，可防范经营风险，具有较高的商业应用价值。

技术特征：

1.一种用于鉴定白菜苔杂交种“雪银1573”种子纯度的一对ssr引物，其特征在于，所述引物核苷酸序列如序列表seq id no.1～2所示。

2.一种采用权利要求1所述的ssr引物鉴定白菜苔杂交种“雪银1573”种子纯度的方法，其特征在于包括以下步骤：

3.权利要求2所述的鉴定方法在用于快速鉴定白菜苔杂交种“雪银1573”种子纯度方面的应用。

技术总结
本发明公开了一种用于鉴定白菜苔杂交种“雪银1573”种子纯度的特异性引物，该引物序列为SEQ ID No.1<subgt;～</subgt;2所示的核苷酸序列。本发明进一步公开了利用上述引物鉴定白菜苔杂交种“雪银1573”种子纯度的方法。本发明提供的特异性引物及方法，在白菜苔杂交种“雪银1573”种子鉴定中所得到的带型为双亲的互补带型，经田间制种结果的验证，该引物稳定性好，与田间试验结果吻合，能够对白菜苔杂交品种“雪银1573”进行纯度鉴定。而且本发明的鉴定方法在3‑4h之内即可完成白菜苔杂交种“雪银1573”种子纯度鉴定工作，具有高效率、低成本、操作方便，不受环境影响等优势，有利于白菜苔杂交种“雪银1573”种子的质量控制及该品种的进一步推广。

技术研发人员：阴云飞
受保护的技术使用者：武汉川禾农业科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13