一种牛疱疹病毒4型毒株及其培养方法和应用与流程

本发明涉及分子生物，特别是一种牛疱疹病毒4型毒株及其培养方法和应用。

背景技术：

1、牛疱疹病毒(bovine herpesvirus，bhv-4)属于疱疹病毒科，丙型疱疹病毒亚科，猴病毒属，在国内和国外牛场中均有蔓延。这种病毒在患有结膜炎、肺炎和上呼吸道炎症、肠炎、皮肤病损、乳房皮炎、产后子宫炎、慢性子宫炎的牛身上皆有分离到。另外，bhv-4还与流产相关，在流产胎儿中有同时发现牛病毒性腹泻病毒(bvdv)和bhv-4。该病多为牛的隐性感染，结合其他病原一起发病，可能使临床症状加剧，且表现多样化，给诊断和治疗带来较大困难，对养牛业构成严重威胁。

2、由于该病感染多为隐性感染，合并其他病原感染后的临床表现多样化，难以通过临床观察作出诊断，因此，需要依靠实验室检测进行确诊，如病毒的分离鉴定，血清学诊断，以及分子生物学检测。目前对于bhv-4的诊断研究的较少，因此寻找一个具有较好免疫原性的毒株对于bhv-4的预防措施及诊断方法的研制有重大的意义。

技术实现思路

1、解决的技术问题：为了克服现有技术的不足，本发明提供一种牛疱疹病毒4型毒株及其培养方法和应用。该病毒可在mac-t细胞中增殖，通过该病毒制得的灭活和纯化病毒可诱发母牛产生抗bhv-4的抗体；且制备的血清抗体，具有较好的血清效价。

2、技术方案：一种牛疱疹病毒4型毒株，命名为dn01，该病毒已于2021年12月28日在中国典型培养物保藏中心进行的保藏，保藏编号为cctcc no:v202193。

3、编码所述病毒的dna分子，核苷酸序列如seq id no.1所示。

4、上述牛疱疹病毒4型毒株的培养方法，所述病毒感染mac-t细胞后，37℃，5％ co2培养箱中培养，当细胞病变达80％以上时，收获病毒液。

5、一种牛疱疹病毒bhv-4疫苗，含有上述毒株。

6、一种牛疱疹病毒bhv-4疫苗，含有上述dna分子。

7、如下(1)-(2)任一项在制备疫苗制剂中的用途：(1)所述的牛疱疹病毒4型毒株；(2)权利要求2所述的dna分子。

8、有益效果：本发明中的病毒dn01可在mac-t细胞中增殖，病毒浓度可达107tcid50/ml，无外源病毒污染；本发明中的病毒dn01对牛具有致病力，病毒感染了犊牛之后产生了肾脏、肝脏、肺脏、脾脏、阴道和子宫等器官的病变；根据本发明中的病毒dn01制备的灭活和纯化病毒可诱发母牛产生抗bhv-4的抗体；根据本发明中的病毒dn01制备的血清抗体，具有较好的血清效价。

技术特征：

1.一种牛疱疹病毒4型毒株，命名为dn01，该病毒已于2021年12月28日在中国典型培养物保藏中心进行的保藏，保藏编号为cctcc no:v202193。

2.编码权利要求1 所述病毒的dna分子，其特征在于，核苷酸序列如seq id no.1 所示。

3.权利要求1所述牛疱疹病毒4型毒株的培养方法，其特征在于，所述病毒感染mac-t细胞后，37℃，5% co2培养箱中培养，当细胞病变达80%以上时，收获病毒液。

4.一种牛疱疹病毒bhv-4疫苗，其特征在于，含有权利要求1所述毒株。

5.一种牛疱疹病毒bhv-4疫苗，其特征在于，含有权利要求2所述dna分子。

6.如下（1）-（2）任一项在制备疫苗制剂中的用途：（1）权利要求1所述的牛疱疹病毒4型毒株；（2）权利要求2所述的dna分子。

技术总结
一种牛疱疹病毒4型毒株及其培养方法和应用，命名为DN01，该病毒已于2021年12月28日在中国典型培养物保藏中心进行的保藏，保藏编号为CCTCC NO:V202193。该病毒对犊牛具有较强致病力，能引起肾脏、肝脏、肺脏、脾脏、阴道和子宫等器官的病变；同时具备良好的免疫原性，可诱发母牛产生抗体；根据本发明中的病毒制备的高滴度的血清抗体，具有较好的血清效价。

技术研发人员：杜菊,王娟芳,俞菊仙
受保护的技术使用者：大能生物科技（南京）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12