1.本发明属于生物提取技术领域，具体是一种荷叶碱的绿色制备方法。
背景技术：
2.荷叶碱是来源于睡莲科植物莲干燥叶中的一种阿朴啡类生物碱，也是《中国药典》收载荷叶这味中药的质控成分。现代研究表明，荷叶碱具有降脂、降糖、抗肿瘤、抗脑缺血等多种药理作用，具有广阔的开发前景。但荷叶碱自身存在水溶性差、药物安全性数据缺失、生物利用度争议较大等成药性缺陷，需要深入研究，才有望被开发成新药。因此，需要大量的荷叶碱纯品用于各项研究。目前荷叶碱主要依赖于植物提取，已有几篇文献报道荷叶碱提取及分离方法，如，李杨等采用酸性水溶液提取、强酸性苯乙烯系阳离子树脂吸附和硅胶柱层析分离方法，制得纯度为94.2%的荷叶碱；林木仙等采用fd阳离子交换树脂吸附、石油醚萃取和结晶方法，制得纯度为95.4%的荷叶碱；卢照凯（申请号cn201510639598.3）采用乙醇提取和ab-8大孔树脂纯化等方法，制得纯度大于98%的荷叶碱；zheng chengchao和陈波等分别采用ph区带逆流和制备高效液相色谱法从荷叶中分离荷叶碱。发明申请人（申请号cn202210172526.2）公开了一种高纯度荷叶碱的制备方法，即以石油醚为提取溶剂，以硅胶为固相萃取吸附剂，采用超声辅助提取结合固相萃取的方法，从荷叶中提取和初步纯化荷叶碱，然后采用ph依赖的液液萃取方法，进一步富集荷叶碱，最后采用结晶方法得到高纯度的荷叶碱。虽然该方法具有诸多优点，如能耗低、得率高等，但由于使用了石油醚（石油来源的溶剂），因此需要对其进行绿色化改造。
技术实现要素：
3.为了解决上述技术问题，本发明提供了一种荷叶碱的绿色制备方法。
4.本发明的技术方案如下：一种荷叶碱的绿色制备方法，包括以下工艺步骤：1）取荷叶粉末，加氨水和d-柠檬烯适量，涡旋或热回流辅助提取，离心取上清液，置于固相萃取（spe）柱上（内含介孔材料sba-15），加乙酸乙酯进行洗脱，合并洗脱液，即得提取物；2）取步骤1）提取物，加等体积的10 mm盐酸溶液调节ph值，涡旋、离心分取水层，加适量100 mm氢氧化钠溶液调节ph值，加乙酸乙酯进行液液萃取（lle），萃取液减压浓缩至干，即得提取物，加乙酸乙酯进行结晶，即得荷叶碱纯品。
5.优选的，所述的步骤1）所用氨水的浓度为5%~25%。
6.优选的，所述的步骤1）所用氨水与荷叶粉末的比例为2/1~5/1（v/w）。
7.优选的，所述的步骤1）所用d-柠檬烯与荷叶粉末的比例为5/1~50/1（v/w）。
8.优选的，所述的步骤1）所用涡旋辅助提取的时间为1~6 min，热回流辅助提取的时间为1~30 min。
9.优选的，所述的步骤2）所用100 mm氢氧化钠溶液与步骤1）提取物的体积比为0.4/
1~1/1。
10.优选的，所述的步骤2）所用乙酸乙酯与步骤1）提取物的体积比为1/1~3/1。
11.本发明的有益效果如下：本发明以绿色溶剂d-柠檬烯和乙酸乙酯分别代替提取和液液萃取工艺中的石油醚，以sba-15代替硅胶，以适应提取溶剂替换带来的溶剂极性变化。与已有的制备方法相比，本方法具有更好的环保表现。
具体实施方式
12.下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限如此。
13.实施例11）取荷叶粉末60 g，加5%氨水300 ml，加600 ml的d-柠檬烯，热回流辅助提取4 min，4,400 rpm离心10 min，分取d-柠檬烯层，置于固相萃取柱上（装有10 g sba-15，孔径6-11 nm），加200 ml乙酸乙酯进行洗脱，合并洗脱液，即得spe提取物；2）取上述spe提取物，加入0.01 m盐酸溶液200 ml，涡旋（2,000 rpm）1 min，离心（4,400 rpm）10 min，分取水层，加100 mm氢氧化钠溶液100 ml和乙酸乙酯400 ml，涡旋（2,000 rpm）1 min，离心（4,400 rpm）10 min，分取乙酸乙酯层，减压浓缩至干（10.1 mpa，40 ℃），即得lle提取物，加乙酸乙酯适量，加热使溶解，放置至室温进行结晶，所得晶体，减压干燥（10.1 mpa，40 ℃），即得荷叶碱纯品（纯度95.9%，得率58.1%）。
14.实施例21）取荷叶粉末30 g，加10%氨水150 ml，加300 ml的d-柠檬烯，涡旋辅助提取两次，每次4 min，4,400 rpm离心10 min，分取并合并d-柠檬烯层，置于固相萃取柱上（装有5 g sba-15），加100 ml乙酸乙酯进行洗脱，合并洗脱液，即得spe提取物；2）取上述spe提取物，加入0.01 m盐酸溶液100 ml，涡旋（2,000 rpm）1 min，离心（4,400 rpm）10 min，分取水层，加100 mm氢氧化钠溶液100 ml和乙酸乙酯200 ml，涡旋（2,000 rpm）1 min，离心（4,400 rpm）10 min，分取乙酸乙酯层，减压浓缩至干（10.1 mpa，40 ℃），即得lle提取物，加乙酸乙酯适量，加热使溶解，放置至室温进行结晶，所得晶体，减压干燥（10.1 mpa，40 ℃），即得荷叶碱纯品（纯度95.7%，得率57.1%）。
15.实施例31）取荷叶粉末75 g，加25%氨水225 ml，加750 ml的d-柠檬烯，热回流辅助提取15 min，4,400 rpm离心10 min，分取d-柠檬烯层，置于固相萃取柱上（装有15 g sba-15），加300 ml乙酸乙酯进行洗脱，合并洗脱液，即得spe提取物；2）取上述spe提取物，加入0.01 m盐酸溶液300 ml，涡旋（2,000 rpm）1 min，离心（4,400 rpm）10 min，分取水层，加100 mm氢氧化钠溶液300 ml和乙酸乙酯900 ml，涡旋（2,000 rpm）1 min，离心（4,400 rpm）10 min，分取乙酸乙酯层，减压浓缩至干（10.1 mpa，40 ℃），即得lle提取物，加乙酸乙酯适量，加热使溶解，放置至室温进行结晶，所得晶体，减压干燥（10.1 mpa，40 ℃），即得高纯度荷叶碱（纯度96.1%，得率58.9%）。
16.以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均包含在本发明的保护范围之内。
技术特征：
1.一种荷叶碱的绿色制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：1）取荷叶粉末，加氨水和d-柠檬烯适量，涡旋或热回流辅助提取，离心取上清液，置于固相萃取（spe）柱上（内含介孔材料sba-15），加乙酸乙酯进行洗脱，合并洗脱液，即得提取物；2）取步骤1）提取物，加等体积的10 mm盐酸溶液调节ph值，涡旋、离心分取水层，加适量100 mm氢氧化钠溶液调节ph值，加乙酸乙酯进行液液萃取（lle），萃取液减压浓缩至干，即得提取物，加乙酸乙酯进行结晶，即得荷叶碱纯品。2.根据权利要求1所述的一种荷叶碱的绿色制备方法，其特征在于：所述的步骤1）所用氨水的浓度为5%~25%。3.根据权利要求1所述的一种荷叶碱的绿色制备方法，其特征在于：所述的步骤1）所用氨水与荷叶粉末的比例为2/1~5/1（v/w）。4.根据权利要求1所述的一种荷叶碱的绿色制备方法，其特征在于：所述的步骤1）所用d-柠檬烯与荷叶粉末的比例为5/1~50/1（v/w）。5.根据权利要求1所述的一种荷叶碱的绿色制备方法，其特征在于：所述的步骤1）所用涡旋辅助提取的时间为1~6 min，热回流辅助提取的时间为1~30 min。6.根据权利要求1所述的一种荷叶碱的绿色制备方法，其特征在于：所述的步骤2）所用100 mm氢氧化钠溶液与步骤1）提取物的体积比为0.4/1~1/1。7.根据权利要求1所述的一种荷叶碱的绿色制备方法，其特征在于：所述的步骤2）所用乙酸乙酯与步骤1）提取物的体积比为1/1~3/1。
技术总结
本发明提供了一种高纯度荷叶碱的绿色制备方法，包括以下步骤：1）取荷叶粉末，加氨水和D-柠檬烯适量，涡旋或热回流辅助提取，离心取上清液，置于固相萃取（SPE）柱上（内含介孔材料SBA-15），加乙酸乙酯进行洗脱，合并成分相似的洗脱液，即得SPE提取物。2）取SPE提取物，加等体积的10 mM盐酸溶液调节pH值，涡旋、离心分取水层，加适量100 mM氢氧化钠溶液调节pH值，加乙酸乙酯进行液液萃取（LLE），萃取液减压浓缩至干，即得LLE提取物，加乙酸乙酯进行结晶，即得高纯度荷叶碱。本发明与其他方法相比，具有高效、低耗、环境友好等优点，适合于荷叶碱的绿色生产。生产。
技术研发人员：施琦渊 徐嘉欢 施菁 褚建波 崔勤敏
受保护的技术使用者：杭州医学院
技术研发日：2022.08.05
技术公布日：2022/10/25