β-甘露聚糖酶、制备方法及应用与流程

本申请涉及生物，尤其涉及β-甘露聚糖酶、制备方法及应用。

背景技术：

1、β-甘露聚糖酶属于半纤维素水解酶类，以内切方式降解β-1,4糖苷键，作用底物为甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳甘露聚糖等。随着生物酶制剂行业的迅速发展，β-甘露聚糖酶广泛应用于食品、饲料、保健、医药、造纸、纺织等行业，近来很多研究表明，甘露聚糖酶还是一种多功能的促生长剂。

2、但是现有的β-甘露聚糖酶反应条件苛刻、酶活力不高。传统方法一般是从自然界产β-甘露聚糖酶的微生物中筛选菌株，然后对菌株进行改良，或者对发酵工艺进行优化，通过这种方法获得的β-甘露聚糖酶一般最适温度比较低，最适ph偏中性，蛋白的表达量较小，工业应用限制较大。

3、因此，寻找出一种稳定的、高效的β-甘露聚糖酶以及制备方法是解决上述技术问题的关键。

技术实现思路

1、有鉴于此，本申请提供了β-甘露聚糖酶、制备方法及应用，目的在于解决或缓解上述部分技术问题。

2、第一方面，本申请实施例公开了一种β-甘露聚糖酶，所述β-甘露聚糖酶为a～c中的至少一项：

3、a.其氨基酸序列如sed id no.1所示的蛋白质；

4、b.具有与a中所述蛋白质至少90％及以上同源性氨基酸序列的蛋白质；

5、c.由a或b的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有β-甘露聚糖酶活性的衍生的蛋白质。

6、进一步地，所述的β-甘露聚糖酶，其工作条件为：温度范围为30～70℃，ph范围为3.0～11.0。优选地，温度范围为60℃；优选地，ph范围为6～8.5，更优选地，ph为8.0。

7、第二方面，本申请实施例公开了一种dna分子，所述dna分子用于编码第一方面所述的β-甘露聚糖酶，所述dna分子包括如(1)～(3)中至少一项：

8、(1)核苷酸序列如sed id no.2所示的dna分子；

9、(2)与(1)所述dna分子杂交且编码具有编码β-甘露聚糖酶活性蛋白的dna分子；

10、(3)与(1)或(2)所述dna分子具有至少90％及以上同源性且编码具有β-甘露聚糖酶活性蛋白的dna分子。

11、第三方面，本申请实施例公开了含有第二方面所述dna分子的表达载体。

12、第四方面，本申请实施例公开了含有第三方面所述表达载体的重组表达菌株或工程化细胞。

13、第五方面，本申请实施例公开了第一方面所述β-甘露聚糖酶的制备方法，其步骤包括：

14、构建重组表达载体；其目的基因为第二方面所述的基因；

15、将重组表达载体转化至感受态细胞中，获得含有β-甘露聚糖酶编码基因的重组菌；

16、重组菌经过培养，并表达产生初始蛋白产物；

17、对初始蛋白产物进行纯化处理，即获得第一方面所述的β-甘露聚糖酶。

18、第六方面，本申请实施例公开了第一方面所述β-甘露聚糖酶在多糖水解的应用。

19、第七方面，本申请实施例公开了第一方面所述β-甘露聚糖酶在制备饲料添加剂的应用。

20、第八方面，本申请实施公开了一种饲料添加剂，其活性成份包含第一方面所述的β-甘露聚糖酶。

21、与现有技术相比，本申请至少具有以下有益效果之一：

22、本申请中涉及β-甘露聚糖酶、制备方法及应用。所述β-甘露聚糖酶具备耐热性好，比活性高、催化ph值范围广等优点；通过所述制备方法能够高效、稳定地制备β-甘露聚糖酶。所述β-甘露聚糖酶应用于多糖水解以及制备饲料添加剂，具有巨大的经济价值。

技术特征：

1.一种β-甘露聚糖酶，所述β-甘露聚糖酶为a～c中的至少一项：

2.权利要求1所述的β-甘露聚糖酶，其工作条件为：温度范围为30～70℃，ph范围为3.0～11.0。

3.一种dna分子，所述dna分子具有用于编码权利要求1或2所述的β-甘露聚糖酶的序列，其中所述dna分子包括(1)～(3)中至少一项：

4.含有权利要求3所述dna分子的表达载体。

5.含有权利要求4所述表达载体的重组表达菌株或工程化细胞。

6.权利要求1或2所述β-甘露聚糖酶的制备方法，其步骤包括：

7.权利要求1或2所述β-甘露聚糖酶在多糖水解的应用。

8.权利要求1或2所述β-甘露聚糖酶在制备饲料添加剂的应用。

9.一种饲料添加剂，其活性成份包含权利要求1或2所述的β-甘露聚糖酶。

技术总结
本申请公开了β‑甘露聚糖酶、制备方法及应用。该β‑甘露聚糖酶为氨基酸序列如SED ID NO.1所示的蛋白质或与SEQ ID NO.1氨基酸序列所示蛋白质具有90％以上同源性且具有相同酶活性的蛋白质。该β‑甘露聚糖酶具有较好的稳定性，在30～70℃和pH为3.0～11.0范围内保温60min仍保持最大酶活力的80％。本申请公开了一种制备所述β‑甘露聚糖的方法，通过所述方法制备的β‑甘露聚糖酶具备耐热性好，比活性高、催化pH值范围广等优点。所述β‑甘露聚糖酶应用于多糖水解以及制备饲料添加剂，具有巨大的经济价值。

技术研发人员：刘洪涛,殷明珠,张志刚,胡海明,郑军平,杨化冰,胡白飞
受保护的技术使用者：刘洪涛
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13