一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌及其应用

本发明属于微生物；具体涉及一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌及其应用。

背景技术：

1、尖孢镰刀菌(f.oxysporum)是一种世界性分布的土传病原真菌，寄主范围广泛，可引起瓜类、茄科、香蕉、棉、豆科及花卉等100多种植物枯萎病的发生。尖孢镰刀菌属半知菌类(imperfecti fungi)、从梗孢目(moniliales)、瘤座孢科(tuberculariaceae)、镰刀菌属(fusarium)尖孢镰刀菌在植株根部维管束中定殖，导致导管堵塞，地上部分枯萎，根表皮产生褐色坏死斑，后期根部腐烂甚至整株植株死亡，严重影响植物的生长发育、产量以及品质。目前，针对尖孢镰刀菌引起的枯萎病的防治，主要以化学试剂为主，已有研究表明部分化学农药的作用逐渐减弱，甚至病原菌对混合使用的化学农药产生抗药性。而且随着化学农药的大量使用，化学制剂残留于土壤，造成土壤自然环境失衡，影响人们身体健康，因此生物防治技术显得有位重要。但目前，针对番茄病害的生物防治技术仍存在一些问题，仍需要开发更安全、高效、防治效果稳定的生防微生物用于尖孢镰刀菌的防治。

技术实现思路

1、为开发对尖孢镰刀菌防效更高效、稳定的生防微生物，本发提供了一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌及其应用。

2、本发明通过以下技术方案实现：

3、一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌，所述生防芽孢杆菌的分类命名为贝莱斯芽胞杆菌(bacillus velezensis)，于2022年8月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为cgmcc no.25497。

4、进一步的，所述贝莱斯芽胞杆菌的16s rdna的核苷酸序列如seq id no：1所示，所述贝莱斯芽胞杆菌的型号为y-4。

5、进一步的，所述一种防治尖孢镰刀菌的贝莱斯芽胞杆菌在蛋白酶检测、纤维素酶、嗜铁素检测平板上培养3d-7d后分泌蛋白酶、纤维素酶、嗜铁素，并且产生生长素iaa，形成生物膜。

6、一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，依托于所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌实现，在农业生物防治方面的应用。

7、进一步的，所述农业生物防治包括将所述贝莱斯芽胞杆菌用于防治尖孢镰刀菌引起的枯萎病、番茄灰霉病、黄瓜炭疽病、黄瓜枯萎病、轮支镰刀菌、葵花菌核病菌或木贼镰刀菌引起的作物病害，所述应用的具体方法是使用所述贝莱斯芽胞杆菌y-4菌悬液喷施于植株表面。

8、进一步的，所述贝莱斯芽胞杆菌y-4菌悬液的制备方法为：采集所述贝莱斯芽胞杆菌的单菌落接种于无菌lb培养液中，28℃、200r/min培养2d得到菌液浓度为1×108cfu/ml的菌悬液。

9、一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，依托于所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌实现，所述对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌在农作物种子及幼苗促生方面的应用。

10、进一步的，所述应用的具体方法是使用稀释500倍的所述贝莱斯芽胞杆菌菌悬液浸泡处理农作物种子。

11、进一步的，所述贝莱斯芽胞杆菌y-4菌悬液的制备方法为：采集所述贝莱斯芽胞杆菌的单菌落接种于无菌lb培养液中，28℃、200r/min培养2d得到菌液浓度为1×108cfu/ml的菌悬液。

12、本发明所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌，在胞外酶检测平板上的显色情况是使用所述的贝莱斯芽胞杆菌接种在蛋白酶、纤维素酶、嗜铁素检测平板上培养3d至7d后均能分泌所检测物质。

13、本发明的有益效果为：

14、1、试验以尖孢镰刀菌为病原菌的平板对峙出发，筛选出一株生防细菌y-4，能够有效抑制尖孢镰刀菌生长，通过形态观察、和16s rdna序列分析，该菌株鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(bacillus velezensis)。

15、2、本发明提供的对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的细菌y-4，抑菌谱广、拮抗作用强，能够有效抑制尖孢镰刀菌引起的枯萎病、番茄灰霉病、黄瓜枯萎病、黄瓜炭疽病、木贼镰刀菌、葵花菌核病菌、轮支镰刀菌的生长，能够广泛应用于农业生物防治领域，可用于防治枯萎病、灰霉病、炭疽病和菌核病等真菌引起的作物病害。

16、3、本发明提供的贝莱斯芽胞杆菌y-4能够产生植物生长素iaa；能够分泌蛋白酶、纤维素酶、嗜铁素；能够形成生物膜；不产生hcn。

17、4、能够产生挥发性物质抑制病原菌生长。

18、5、菌株y-4对番茄种子和幼苗有很好的促生效果，对番茄幼苗的形态指标、根系的根长、表面积、节点数、根尖数以及幼苗叶部相关光合参数相对ck组有明显增加。

技术特征：

1.一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌，其特征在于，所述生防芽胞杆菌的分类命名为贝莱斯芽胞杆菌(bacillus velezensis)，于2022年8月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为cgmcc no.25497。

2.根据权利要求1所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌，其特征在于，所述贝莱斯芽胞杆菌的16s rdna的核苷酸序列如seq id no：1所示，所述贝莱斯芽胞杆菌的型号为y-4。

3.根据权利要求1所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌，其特征在于，所述一种防治尖孢镰刀菌的贝莱斯芽胞杆菌在蛋白酶检测、纤维素酶、嗜铁素检测平板上培养3d-7d后分泌蛋白酶、纤维素酶、嗜铁素，并且产生生长素iaa，形成生物膜。

4.一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，依托于权利要求1-3之一所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌实现，其特征在于，在农业生物防治方面的应用。

5.根据权利要求4所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，其特征在于，所述农业生物防治包括将所述贝莱斯芽胞杆菌用于防治尖孢镰刀菌引起的枯萎病、番茄灰霉病、黄瓜炭疽病、黄瓜枯萎病、轮支镰刀菌、葵花菌核病菌或木贼镰刀菌引起的作物病害，所述应用的具体方法是使用所述贝莱斯芽胞杆菌y-4菌悬液喷施于植株表面。

6.根据权利要求5所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，其特征在于，所述贝莱斯芽胞杆菌y-4菌悬液的制备方法为：采集所述贝莱斯芽胞杆菌的单菌落接种于无菌lb培养液中，28℃、200r/min培养2d得到菌液浓度为1×108cfu/ml的菌悬液。

7.一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，依托于权利要求1-3之一所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌实现，其特征在于，所述对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌在农作物种子及幼苗促生方面的应用。

8.根据权利要求7所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，其特征在于，所述应用的具体方法是使用稀释500倍的所述贝莱斯芽孢杆菌菌悬液浸泡处理农作物种子。

9.根据权利要求8所述的一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌的应用，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌y-4菌悬液的制备方法为：采集所述贝莱斯芽胞杆菌的单菌落接种于无菌lb培养液中，28℃、200r/min培养2d得到菌液浓度为1×108cfu/ml的菌悬液。

技术总结
一种对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的贝莱斯芽胞杆菌及其应用，属于农业生物防治技术领域。为开发生物防治的安全高效的生防微生物，本发明所述生防芽胞杆菌的分类命名为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillusvelezensis)，于2022年8月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo.25497，具有抑菌范围广、拮抗作用强、促生效果明显的特点，能够有效抑制尖孢镰刀菌引起的枯萎病、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌等作物致病菌的生长，促进番茄种子发芽，促进胚根生长、促进幼苗植株生长量和根系的发育；能分泌蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、嗜铁素。

技术研发人员：王傲雪,王琦,刘佳音,陈秀玲,张瑶,仇有文,冯明芳,程谟桢,孙振书
受保护的技术使用者：东北农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13