一种棉花APR基因的启动子、获取方法及应用、融合载体、制备方法及应用

本发明属于基因工程，尤其涉及一种棉花apr基因的启动子、获取方法及应用、融合载体、制备方法及应用。

背景技术：

1、基因启动子(promoters)是基因(gene)的一个组成部分，控制基因表达(转录)的起始时间和表达的位置、程度等。启动子就像"开关"，决定基因的活动的时空特性，由核苷酸组成。不同启动子具有不同的特性，可以控制基因的表达水平。也有一些启动子虽然(核苷酸)不是完全一致，但是其活性有相似的地方。植物表皮毛是植物表皮细胞特化形成的细胞组织。其在植物抗逆和有益化合物的生产方面具有重要作用。如棉花种子表皮毛(纤维)是棉花的主产品，具有重要经济价值。因此，鉴定和利用在植物表皮毛中特异和高量表达的启动子对细胞发育研究和提高作物的经济价值都有重要意义。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种棉花apr基因的启动子、获取方法及应用、融合载体、制备方法及应用，本发明提供的棉花apr基因的启动子能够驱动棉花apr基因在植物表皮毛中高量表达。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

3、本发明提供了一种棉花apr基因的启动子，所述启动子的核苷酸序列如seq idno.1所示。

4、本发明还提供了一种上述技术方案所述启动子的获取方法，包括以下步骤：

5、以棉花基因组dna为模板，使用扩增引物进行扩增，得到启动子。

6、优选的，所述扩增引物的上游引物的核苷酸序列如seq id no.2所示，所述扩增引物的下游引物的核苷酸序列如seq id no.3所示。

7、优选的，所述扩增的体系包括：kod one 25μl、上下游引物各2μl、模板1μl和ddh2o20μl。

8、优选的，所述扩增的程序包括：98℃1min；98℃10s，55℃5s，68℃30s，40个循环；68℃1min。

9、本发明还提供了上述技术方案所述的启动子在驱动棉花apr基因在植物表皮毛中高量表达中的应用。

10、本发明还提供了一种融合载体，将上述技术方案所述的启动子重组到过表达载体pbi121中，得到。

11、本发明还提供了一种上述技术方案所述的融合载体的制备方法，包括以下步骤：

12、1)将过表达载体pbi121进行酶切，得到酶切载体；

13、2)将权利要求1所述的启动子重组到步骤1)得到的酶切载体中，得到融合载体。

14、优选的，所述步骤1)酶切使用的酶为限制性内切酶hind iii和bamh i。

15、本发明还提供了上述技术方案所述的融合载体在驱动棉花apr基因在植物表皮毛中高量表达中的应用。

16、本发明的有益效果为：

17、apr3基因的启动子在花、茎和果荚中均没有表达，在下胚轴和子叶中有少量表达，而在叶片表皮毛中有稳定和高量表达，观察到的所有表皮毛及分支中均发现显著的gus信号。apr3启动子是一个在表皮毛中较特异表达的启动子。

技术特征：

1.一种棉花apr基因的启动子，其特征在于，所述启动子的核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.一种权利要求1所述启动子的获取方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的获取方法，其特征在于，所述扩增引物的上游引物的核苷酸序列如seq id no.2所示，所述扩增引物的下游引物的核苷酸序列如seq id no.3所示。

4.根据权利要求2所述的获取方法，其特征在于，所述扩增的体系包括：kod one 25μl、上下游引物各2μl、模板1μl和ddh2o 20μl。

5.根据权利要求2所述的获取方法，其特征在于，所述扩增的程序包括：98℃1min；98℃10s，55℃5s，68℃30s，40个循环；68℃1min。

6.权利要求1所述的启动子在驱动棉花apr基因在植物表皮毛中高量表达中的应用。

7.一种融合载体，其特征在于，将权利要求1所述的启动子重组到过表达载体pbi121中，得到。

8.一种权利要求7所述的融合载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)酶切使用的酶为限制性内切酶hindiii和bamhi。

10.权利要求7所述的融合载体在驱动棉花apr基因在植物表皮毛中高量表达中的应用。

技术总结
本发明提供了一种棉花APR基因的启动子、获取方法及应用、融合载体、制备方法及应用，属于基因工程，所述启动子的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。本发明提供的棉花APR基因的启动子能够驱动棉花APR基因在植物表皮毛中高量表达。

技术研发人员：王智,毛肖男,裴亚月,韦珍珍,李付广
受保护的技术使用者：中国农业科学院棉花研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11