ETS2分子标志物在制备判断肝衰竭危险分层试剂的用途及试剂盒及应用

本发明涉及临床医学、生物医学和医学检验，具体地说，是ets2分子标志物在制备判断肝衰竭危险分层试剂的用途及试剂盒及应用。

背景技术：

1、肝功能衰竭是各种原因导致肝功能严重损伤，伴有肝内和肝外(凝血，肾，脑，循环，呼吸)多器官衰竭的一种复杂的临床综合征。肝衰竭病情凶险，预后不佳，常规内科综合治疗病死率高达50％-90％，除肝移植外没有特效的治疗方法，严重威胁人类健康。早发现，早诊断，早治疗，对改善肝衰竭患者的预后，提高生存率具有重要作用。目前在临床上，肝衰竭的诊断主要基于传统的临床指标如胆红素、凝血功能指标inr等。然而，这些指标具有滞后性，患者往往已经出现明显临床症状，伴有肝细胞坏死和肝外器官衰竭。因此，寻找新的敏感度更高的特异性指标辅助肝衰竭诊断具有重要的临床价值。

2、mrna动态检测是一种在无症状患者检测效率非常高的新型技术手段，可以辅助疾病的诊断和预后评估。其在心血管疾病、肿瘤，胃肠道疾病等多种类型的疾病中均展示了良好的应用价值。在器官受到感染或产生病变时，循环系统可以起到信息传递的作用，募集免疫细胞启动防御机制。通过检测外周血中白细胞mrna的改变，可以同时监测机体不同组织、器官的疾病风险，作为组织活检的辅助手段应用前景广阔。

3、ets2是ets转录因子家族成员之一，参与了细胞增殖、分化、凋亡等一系列细胞功能。本课题组研究发现ets2的mrna表达水平与肝衰竭的发生、发展和转归密切相关。ets2与肝衰竭患者固有免疫激活，适应性免疫抑制的机制相关，参与了巨噬细胞炎症等生物学功能。因此，ets2可以作为一种早期诊断肝衰竭的指标，具有潜在的应用价值。

技术实现思路

1、本发明公开了ets2分子标志物在制作判断肝衰竭危险分层试剂的用途及试剂盒及应用，第一目旨在提供一种ets2分子的检测在检测肝衰竭疾病和判断肝衰竭危险分层中的应用，第二目的旨在提供一种用于检测ets2 mrna表达量的检测试剂盒。

2、为实现上述第一目的，本发明通过临床样本转录组测序分析筛选得到ets2基因，其表达水平与肝衰竭疾病的严重程度相关，并通过qrt-pcr实验验证这一结果。

3、为实现上述第二目的，本发明采取的技术方案是：

4、本发明公开了ets2分子标志物在制备判断肝衰竭危险分层试剂的用途。

5、作为进一步地改进，本发明用途包括用于区分肝衰竭人群中短期预后不佳的高危人群和低危人群。

6、作为进一步地改进，本发明所述的试剂通过检测细胞、组织或体液临床样本中ets2的表达量，来判断肝衰竭危险分层。

7、作为进一步地改进，本发明所述的试剂通过测序、qrt-pcr的方法检测ets2在细胞、组织或体液样本中的表达量。

8、本发明公开了一种检测肝衰竭和判断肝衰竭危险分层的试剂盒，试剂盒包含用于检测ets2表达量的试剂。

9、作为进一步地改进，本发明所述的试剂为荧光定量pcr引物，如seq id no.1和seqid no.2所示的ets2基因引物对，ets2表达量检测阈值为1.35。

10、作为进一步地改进，本发明所述的试剂盒判断肝衰竭危险分层的步骤如下：1)试剂盒检测临床样本中ets2分子表达量；2)当检测到的ets2分子表达量大于1.35时，患者被预测为肝衰竭人群中短期预后不佳的高危人群。

11、作为进一步地改进，本发明检测试剂包含如下组分：rna抽提试剂；rna逆转录体系和实时荧光定量pcr反应体系；如seq id no.7和seq id no.8所示的内参gapdh基因引物对和如seq id no.1和seq id no.2所示的ets2基因引物对。

12、本发明还公开了一种用于判断肝衰竭危险分层试剂盒的应用方法，具体步骤为：

13、1)收集检测样本，提取rna；

14、2)将rna逆转录合成cdna；

15、3)对cdna进行实时荧光定量pcr扩增检测ets2基因相对表达量，辅助肝衰竭的检测和危险分层。

16、作为进一步地改进，本发明所述的pcr扩增的条件为:将rna样本1ng-100μg与逆转录酶0.01-10μl混合后进行反转录，所得产物cdna与qpcr混合液0.01-100μl充分混匀后进行pcr扩增，疾病的检测样本来自肝衰竭患者或肝衰竭高危人群，检测细胞样本为外周血单个核细胞样本，组织样本为肝组织样本，体液样本为血液样本。

17、本发明优点在于：

18、1、本发明通过转录组mrna测序分析联合qrt-pcr验证，发现ets2在肝衰竭患者各类样本中呈特征性高表达，与疾病严重程度有很好的相关性，稳定可靠。

19、2、本发明的ets2 mrna检测试剂盒可采用外周血单个核细胞进行检测，样本容易获得，对患者创伤性小，可操作性强。

20、3、本发明的ets2 mrna检测试剂盒步骤简便，具有相关专业背景的工作人员都能轻松掌握该试剂盒的使用。

21、4、本发明的ets2 mrna检测试剂盒能够准确检测ets2 mrna含量，有利于肝衰竭的早期诊断和治疗，具有重要临床意义。

技术特征：

1.ets2分子标志物在制备判断肝衰竭危险分层试剂的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述用途包括用于区分肝衰竭人群中短期预后不佳的高危人群和低危人群。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的试剂通过检测细胞、组织或体液临床样本中ets2的表达量，来判断肝衰竭危险分层。

4.根据权利要求2和3所述的用途，其特征在于，所述试剂通过测序、qrt-pcr的方法检测ets2在细胞、组织或体液样本中的表达量。

5.一种检测肝衰竭和判断肝衰竭危险分层的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测ets2表达量的试剂。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂为荧光定量pcr引物，如seq idno.1和seq id no.2所示的ets2基因引物对，ets2表达量检测阈值为1.35。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒判断肝衰竭危险分层的步骤如下：1)试剂盒检测临床样本中ets2分子表达量；2)当检测到的ets2分子表达量大于1.35时，患者被预测为肝衰竭人群中短期预后不佳的高危人群。

8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述检测试剂包含如下组分：rna抽提试剂；rna逆转录体系和实时荧光定量pcr反应体系；如seq id no.9和seq id no.10所示的内参gapdh基因引物对和如seq id no.1和seq id no.2所示的ets2基因引物对。

9.一种用于判断肝衰竭危险分层试剂盒的应用方法，其特征在于，具体步骤为：

10.根据权利要求9所述的应用方法，其特征在于，所述的pcr扩增的条件为:将rna样本1ng-100μg与逆转录酶0.01-10μl混合后进行反转录，所得产物cdna与qpcr混合液0.01-100μl充分混匀后进行pcr扩增，所述疾病的检测样本来自肝衰竭患者或肝衰竭高危人群，所述检测细胞样本为外周血单个核细胞样本。

技术总结
本发明公开了一种ETS2分子标志物在制备判断肝衰竭危险分层试剂的用途及试剂盒及应用。本发明通过临床样本转录组测序分析筛选得到ETS2基因，其表达水平与肝衰竭疾病的严重程度相关，并通过qRT‑PCR实验验证这一结果，公开了ETS2分子标志物在制备判断肝衰竭危险分层试剂的用途及检测肝衰竭和判断肝衰竭危险分层的试剂盒，试剂盒包含用于检测ETS2表达量的试剂。本发明发现ETS2在肝衰竭患者各类样本中呈特征性高表达，与疾病严重程度有很好的相关性，稳定可靠。ETS2mRNA检测试剂盒能够准确检测ETS2mRNA含量，有利于肝衰竭的早期诊断和治疗，具有重要临床意义。

技术研发人员：李君,何璐璐
受保护的技术使用者：浙江大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14