一种植物抗虫蛋白质及其应用的制作方法

本申请涉及基因工程生物防治，具体而言，涉及一种一种植物抗虫蛋白质及其应用。

背景技术：

1、目前，农业生产上面临的生物胁迫（如病害和虫害等）和非生物胁迫（如旱害、寒害和盐害等）造成农作物生长势减弱，产量降低，给全球粮食安全造成巨大威胁。其中，虫害是影响农林生产力的主要生物胁迫因素之一。随着使用化学农药进行害虫防治造成的环境问题愈发严重，生物杀虫剂的使用逐渐进入人们的视野。

2、苏云金芽孢杆菌（ bacillus thuringiensis，简称bt）是一种革兰氏阳性菌，能够产生杀虫晶体蛋白（insecticidal crystal proteins，icps）和营养期杀虫蛋白（vegetative insecticidal proteins，vips）等不同类型的杀虫蛋白。其中，cry 蛋白是在芽胞形成期于芽胞内形成的一类杀虫晶体蛋白，对大多数鳞翅目害虫具有良好抗性。

3、在中国专利cn201980049875.1中证明 cry1b.868和 cry1da_7基因共表达可表现出对鳞翅目害虫秋夜蛾、玉米穗蛾、西南玉米蛀虫和甘蔗蛀虫的抗性。2019年，wang等人研究发现cry1b.868蛋白对草地贪夜蛾具有明显的杀虫活性，但未达到高抗（wang et al.bacillus thuringiensis cry1da_7 and cry1b.868 protein interactions with novelreceptors allow control of resistant fall armyworms, spodoptera frugiperda(j.e. smith)）。目前还未见对 cry1b.868基因进行改造以提高对靶标害虫抗性的相关报道。因此，为使其具有更强的抗虫效果，需对该基因进行合理的改造，进一步提高对鳞翅目害虫的抗性。

技术实现思路

1、本发明提供了一种植物抗虫蛋白质，所述蛋白质氨基酸序列如seq id no:1所示。

2、本发明还提供了一种编码所述植物抗虫蛋白质的植物抗虫基因，所述抗虫基因的核苷酸序列如seq id no:2所示。

3、本发明还提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体中包含前述的抗虫基因。

4、具体的，所述重组表达载体依次包括如下组成元件：来自玉米泛素基因启动子、权利要求2所述的抗虫基因、胭脂碱合成酶的终止子、来自玉米泛素基因启动子、编码膦丝菌素乙酰转移酶基因；来自花椰菜花叶病毒的终止子。

5、本发明还提供了一种前述植物抗虫蛋白质、植物抗虫基因或或重组表达载体的应用，所述应用为培育具有鳞翅目害虫抗性的转基因植物；或制备抑制或杀灭鳞翅目害虫的药剂。

6、具体的，所述鳞翅目害虫为草地贪夜蛾。

7、所述植物选自单子叶植物或双子叶植物，优选的，所述植物为玉米。

8、本发明还提供了一种抑制或杀灭草地贪夜蛾的方法，采用前述的植物抗虫蛋白质喂食草地贪夜蛾；或将前述的植物抗虫基因导入植物中，使草地贪夜蛾取食所述植物，即可达到抑制或杀灭草地贪夜蛾的目的。

9、本发明的有益效果包括：本发明改造得到的 cry1b.868-dv1基因所表达的杀虫蛋白相对于 cry1b.868具有更好的杀虫效果，尤其是本发明得到的cry1b.868-dv1杀虫蛋白在玉米中获得了较高的表达量和稳定性，对草地贪夜蛾具有良好抗性。

技术特征：

1.一种植物抗虫蛋白质，其特征在于，所述蛋白质氨基酸序列如seq id no:1所示。

2.一种植物抗虫基因，其特征在于，所述抗虫基因的核苷酸序列如seq id no:2所示。

3.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体中包含权利要求1所述的抗虫基因。

4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体依次包括如下组成元件：来自玉米泛素基因启动子、权利要求2所述的抗虫基因、胭脂碱合成酶的终止子、来自玉米泛素基因启动子、编码膦丝菌素乙酰转移酶基因；来自花椰菜花叶病毒的终止子。

5.权利要求1所述植物抗虫蛋白质或权利要求2所述植物抗虫基因或权利要求3-4所述的重组表达载体的应用，其特征在于，所述应用为培育具有鳞翅目害虫抗性的转基因植物；或制备抑制或杀灭鳞翅目害虫的药剂。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述鳞翅目害虫为草地贪夜蛾。

7.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述植物选自单子叶植物或双子叶植物。

8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述植物为玉米。

9.一种抑制或杀灭草地贪夜蛾的方法，其特征在于，采用权利要求1所述的植物抗虫蛋白质喂食草地贪夜蛾；或将权利要求2所述的植物抗虫基因导入植物中，使草地贪夜蛾取食所述植物。

技术总结
本发明公开了一种植物抗虫蛋白质，所述蛋白质氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明改造得到的Cry1B.868‑Dv1基因所表达的杀虫蛋白相对于Cry1B.868具有更好的杀虫效果，尤其是本发明得到的Cry1B.868‑Dv1杀虫蛋白在玉米中均获得了较高的表达量和稳定性，对草地贪夜蛾具有良好抗性。

技术研发人员：李晓娇,马小伟,贾志伟,邸萌亮,梅方明,杨蒙迪,王建海
受保护的技术使用者：隆平生物技术（海南）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12