在癌细胞中具有增强复制的HSV载体的制作方法

本专利申请总体上涉及hsv癌细胞中的增强复制。

背景技术：

1、除了通过病毒直接杀死细胞之外，溶瘤性病毒(ov)已经成为一种通过溶瘤效 应特异性破坏癌细胞的治疗方案(therapeutic arsenal)，其中溶瘤效应是一种特征在于 通过病毒裂解复制的过程实现癌细胞裂解的杀伤机制。在各种ov中，基于ov的1 型单纯疱疹病毒(“hsv-1”)是最先进的，例如，美国fda已经批准了疱疹病毒系 ov(t-vec)用于治疗黑素瘤。hsv载体的代表性实例包括美国专利第7,223,593号、 第7,537,924号、第7,063,835号、第7,063,851号、第7,118,755号、第8,277,818号 和第8,680,068号中所描述的那些。

2、本发明克服了目前的商业化溶瘤性病毒的缺点，并且进一步提供了另外的出乎意料的益处。

技术实现思路

1、简言之，本发明提供了在癌细胞中具有增强复制的hsv载体。在一种实施方式 中，所提供的hsv载体在影响病毒复制效率的病毒基因的调控区中包含nf-κb应答 元件。其他的权利要求涉及在影响病毒复制效率的病毒基因的调控区中包含 oct3/4-sox2应答元件的hsv载体。具有这些应答元件之一或二者的病毒基因包括 us11及编码icp4、icp27和icp8的基因。

2、其他的权利要求涉及载体，其中，nf-κb应答元件包含gggaatttcc(seq id no:1)或其变体的1-15个串联序列，其中，该变体与该序列具有至少一个核苷酸差 异。串联序列可以完全相同，或者是相同和不同序列或全部不同序列的混合。其他权 利要求涉及载体，其中，oct3/4-sox2应答元件包含 ctacagaggtgcatattaacagagcttttgtcctggaga(seq idno:2)或其变 体，其中，该变体具有至少90％的相同核苷酸。

3、在其他权利要求中，hsv载体可以进一步包含编码用于癌症治疗的治疗性物质 的序列。该治疗性物质可以是il12、il15、ox40l、pdl-1阻断剂或pd-1阻断剂。 在2016年12月9日提交的美国专利申请第15/374,893号中描述了适合的阻断剂的 一个实例，将其全文结合于本文作为参考。

4、其他权利要求涉及治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症或疑似患有癌症的患者施用本文中所述的hsv载体。在其他权利要求中，提供了处理癌症干细胞和治 疗难治性癌症的方法，所述方法包括向患有难治性癌症或具有癌症干细胞的癌症的患 者施用本文中所述的hsv载体。在其他权利要求中，癌症为结肠癌、肺癌、乳腺癌、 前列腺癌、脑癌或膀胱癌。

5、在
技术实现要素：
部分中已经简要地介绍了某些概念，这些概念将在下文的具体实施方式部分中进一步详细描述。除非另外明确陈述，发明内容部分既不是意在确定本文要 求保护主题的关键或必须特征，也不是意在限制本文要求保护主题的范围。

6、以下描述中阐述了一种或多种实施方式的细节。结合一种示例性实施方式说明或描述的特征可以与其他实施方式的特征组合。因此，本文中所述的各种实施方式中任 一种能够与其他的实施方式组合提供。如果需要采用如本文中所述的各不同专利、申 请和出版物的概念来提供进一步的实施方式，则可以对实施方式的方面进行修改。根 据说明书、附图和权利要求书将使得其他特征、目的和优势变得显而易见。

1.一种hsv载体，在影响病毒复制效率的病毒基因的调控区中包含nf-κb应答元件。

2.权利要求1所述的载体，其中，所述病毒基因编码icp4、icp27、us11或icp8。

3.权利要求1所述的载体，其中，所述nf-κb应答元件包含表1中gggaatttcc或变体的1-15个串联序列。

4.权利要求3所述的载体，其中，所述串联序列完全相同，或者是相同和不同序列或全部不同序列的混合。

5.权利要求3所述的载体，其中，所述nf-κb应答元件具有序列gggaatttccggggactttccgggaatttccggggactttccgggaatttcc。

6.权利要求1-5中任意一项所述的载体，进一步包含编码用于癌症治疗的治疗性物质的序列。

7.权利要求6所述的hsv载体，其中，所述治疗性物质为il12、il15、ox40l、pdl-1阻断剂或pd-1阻断剂。

8.权利要求1-7中任意一项所述的hsv载体在制备治疗癌症的药物中的应用。

9.权利要求1-7中任意一项所述的hsv载体在制备治疗癌症干细胞和难治性癌症的药物中的应用。

10.权利要求8-9中任意一项所述的应用，其中，所述癌症为结肠癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、脑癌或膀胱癌。