胆囊癌生物标记物及其应用的制作方法

本发明属于生物医药，具体涉及一种胆囊癌生物标记物及其应用。

背景技术：

1、胆囊癌(gbc)是指发生在胆囊的肿瘤，其发病隐匿，早期就会发生侵袭和转移。根治性手术切除是gbc的首选治疗方法，但这种方法的效用有限，因为许多患者被诊断为gbc时已处于晚期，此时已失去了手术机会，因此探究能够在早期诊断中确诊胆囊癌的生物标志物是至关重要的。

2、由于根治性手术切除的效用有限，因此目前大多数仍以采用化疗手段以延长gbc患者生存期、提高生活质量为主。目前，吉西他滨(gem)是gbc的经典辅助化疗药物，但有效率仅为36％。之所以会出现这种现象，是因为癌细胞对gem的原发性耐药或获得性耐药，导致不同患者对gem的治疗效果差异很大。因此，探索gbc细胞对gem耐药的分子机制对于增强gbc细胞的药物敏感性也具有重要的理论意义和临床价值。

3、已有的研究发现，活性氧(ros)在调节癌细胞增殖中起着双重作用，即，一方面，ros的过度积累会引起氧化应激损伤，促进肿瘤细胞死亡；另一方面，过多的ros还可以正向调节癌细胞内的抗氧化系统，促进肿瘤细胞的耐药和存活。一项研究表明，癌细胞会通过增强抗氧化反应将ros水平维持在毒性阈值以下，使gem诱导的氧化应激产生反作用。因此，降低gbc细胞内ros水平并将其维持在一定范围内可能会增强gbc细胞对gem的敏感性，减轻gbc细胞对gem的耐药性。

4、目前尚未发现既可作为胆囊癌的早期诊断生物标志物，又能调控胆囊癌细胞中活性氧水平的因子。

技术实现思路

1、本发明的发明目的是提供一种胆囊癌生物标记物及其应用，为胆囊癌的早期诊断、治疗和预后预测提供了一个新思路、新途径。

2、为实现上述发明目的，本发明的技术方案为：

3、一种胆囊癌生物标记物，为duoxa1基因或duoxa1基因的表达产物。

4、本发明首次发现，与duoxa1基因在正常组织中的表达水平相比，duoxa1基因在胆囊癌组织和细胞系中显著高表达，表明duoxa1基因及其表达产物能够作为胆囊癌的生物标记物，用于辅助胆囊癌的早期诊断或预后预测，为胆囊癌的早期诊断或预后预测提供了新途径。

5、基于此，本发明提供了所述的胆囊癌生物标记物在制备胆囊癌早期诊断或筛查试剂中的应用，以及，所述的胆囊癌生物标记物在制备胆囊癌预后预测试剂中的应用。

6、进一步地，本发明还提供了一种胆囊癌早期诊断或筛查试剂以及一种胆囊癌预后预测试剂，该试剂即包括duoxa1基因或其表达的rna的特异性扩增引物或探针，或与duoxa1基因表达的蛋白质特异性结合的抗体。

7、其中，特异性扩增引物或探针用于检测duoxa1基因或其表达的rna的表达水平，而特异性抗体则用于检测duoxa1基因表达的蛋白质的表达水平。

8、作为优选，所述的duoxa1基因的特异性扩增引物包括：

9、上游引物：5’-caggcgtcaaagcaagtcac-3’；

10、下游引物：5’-taggccacatgggcttcttg-3’。

11、进一步地，本发明还提供了一种胆囊癌早期诊断或筛查试剂盒以及一种胆囊癌预后预测试剂盒，该试剂盒中即含有上述的胆囊癌早期诊断或筛查试剂或胆囊癌预后预测试剂。

12、本发明还提供了上述的胆囊癌生物标记物在制备胆囊癌化疗药物增敏剂中的应用。

13、本发明研究发现，抑制或沉默duoxa1基因能够促进胆囊癌化疗药物吉西他滨(gem)对胆囊癌细胞活力、细胞迁移和侵袭的抑制作用，表明duoxa1能够作为抑制胆囊癌-吉西他滨抵抗的药物靶点，以提高胆囊癌细胞对吉西他滨的敏感度。

14、所述的胆囊癌化疗药物增敏剂即为duoxa1抑制剂或沉默剂，所述的duoxa1抑制剂或沉默剂包括针对duoxa1基因表达的rna的rna干扰分子或反义寡核苷酸，或者，靶向抑制duoxa1基因表达的蛋白质的小分子抑制剂。

15、与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：

16、(1)本发明首次发现，与duoxa1基因在正常组织中的表达水平相比，duoxa1基因在胆囊癌组织和细胞系中显著高表达，表明duoxa1基因及其表达产物能够作为胆囊癌的生物标记物，用于辅助胆囊癌的早期诊断或预后预测，为胆囊癌的早期诊断或预后预测提供了新途径。

17、(2)本发明研究发现，抑制或沉默duoxa1基因能够促进胆囊癌化疗药物吉西他滨(gem)对胆囊癌细胞活力、细胞迁移和侵袭的抑制作用，表明duoxa1能够作为抑制胆囊癌-吉西他滨抵抗的药物靶点，以提高胆囊癌细胞对吉西他滨的敏感度。

技术特征：

1.一种胆囊癌生物标记物，其特征在于，为duoxa1基因或duoxa1基因的表达产物。

2.如权利要求1所述的胆囊癌生物标记物在制备胆囊癌早期诊断或筛查试剂中的应用。

3.一种胆囊癌早期诊断或筛查试剂，其特征在于，包括duoxa1基因或其表达的rna的特异性扩增引物或探针，或与duoxa1基因表达的蛋白质特异性结合的抗体。

4.如权利要求3所述的胆囊癌早期诊断或筛查试剂，其特征在于，所述的duoxa1基因的特异性扩增引物包括：

5.一种胆囊癌早期诊断或筛查试剂盒，其特征在于，含有如权利要求3或4所述的胆囊癌早期诊断或筛查试剂。

6.如权利要求1所述的胆囊癌生物标记物在制备胆囊癌预后预测试剂中的应用。

7.一种胆囊癌预后预测试剂，其特征在于，包括duoxa1基因或其表达的rna的特异性扩增引物或探针，或与duoxa1基因表达的蛋白质特异性结合的抗体。

8.如权利要求1所述的胆囊癌生物标记物在制备胆囊癌化疗药物增敏剂中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的胆囊癌化疗药物增敏剂为duoxa1抑制剂或沉默剂。

10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的duoxa1抑制剂或沉默剂包括针对duoxa1基因表达的rna的rna干扰分子或反义寡核苷酸，或者，靶向抑制duoxa1基因表达的蛋白质的小分子抑制剂。

技术总结
本发明公开了一种胆囊癌生物标记物及其应用。本发明首次发现，与DUOXA1基因在正常组织中的表达水平相比，DUOXA1基因在胆囊癌组织和细胞系中显著高表达，表明DUOXA1基因及其表达产物能够作为胆囊癌的生物标记物，用于辅助胆囊癌的早期诊断或预后预测，为胆囊癌的早期诊断或预后预测提供了新途径；本发明还研究发现，抑制或沉默DUOXA1基因能够促进胆囊癌化疗药物吉西他滨(GEM)对胆囊癌细胞活力、细胞迁移和侵袭的抑制作用，表明DUOXA1能够作为抑制胆囊癌‑吉西他滨抵抗的药物靶点，以提高胆囊癌细胞对吉西他滨的敏感度。

技术研发人员：吴晓凤,游凡,王彩,商琳
受保护的技术使用者：杭州添帆生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13