经修饰的T细胞、药物组合物、其制备方法，及其使用方法与流程

发明领域本公开涉及经修饰的t细胞，特别是γδt细胞，以及包含其的药物组合物。本公开还提供了鉴定所述经修饰的t细胞以及培养所述经修饰的t细胞的方法。

背景技术：

1、免疫监视在对抗癌症方面发挥关键的作用，并且代表一种非常有吸引力的治疗方式，特别是有鉴于常规手术、放射线和化学疗法在癌症管理中的许多缺点。

2、伽马德他(γδ)t细胞为“非常规”t细胞的原型，并代表了周边血中相对小的t细胞亚群。它们由γ链与δ链组成的异二聚体t细胞受体(tcr)的表达所定义。这使它们不同于表达αβtcr的典型且更广为人知的cd4+辅助t细胞与cd8+细胞毒性t细胞。

3、vγ9vδ2(也称为vγ2vδ2)t细胞为人类周边血γδt细胞亚群，其以tcr依赖性方式识别微生物(e)-4-羟基-3-甲基丁-2-烯基二磷酸酯与内源性异戊烯基二磷酸酯。识别不需要特别的辅助细胞、抗原摄取、抗原加工或mhc第i类、第ii类或第ib类表达。

4、γδt细胞被视为代表先天免疫与后天免疫之间的连结。它们表达自然杀手受体，例如nkg2d，其对vγ9vδ2t细胞的肿瘤反应性具有重要贡献。此外，它们也表达γδt细胞受体。活化的γδt细胞表达高含量的抗原呈递细胞相关的分子，并可将衍生自经破坏的细胞的肽抗原呈递至αβt细胞。利用γδt细胞的这些抗微生物与抗肿瘤性质，已进行临床前与临床试验，以开发针对感染与恶性肿瘤的新颖免疫疗法。

5、由于仍然没有满足有效治疗和/或预防癌症的需求，这些发现支持了开发针对癌细胞的基于t细胞的疗法以及产生更多用于临床应用的具有治疗能力的t细胞的培养方法的理论依据。本公开提供了具有独特表型的经修饰的t细胞，以满足这些和其他需求。所述细胞可用于自体疗法或非自体疗法。

技术实现思路

1、鉴于本领域的迫切需要，本文提供在癌症治疗中安全有效的经修饰的t细胞和包含其的药物组合物。

2、在一个具体实施例中，本公开提供了包含cd3hitcr γ9hitcr δ2hicxcr4hi表型的经修饰的t细胞。在一个优选的具体实施例中，所述经修饰的t细胞可进一步包含cd69dimcd11chicxcr3dim的表型，即所述经修饰的t细胞可包含cd3hitcr γ9hitcr δ2hicd69dimcd11chicxcr4hicxcr3dim的表型。在另一优选具体实施例中，经修饰的t细胞可进一步包含ifn-γhi的表型。

3、某些具体实施例提供药物组合物，包含本文所述的经修饰的γδt细胞以及药学上可接受的载体或赋形剂。

4、某些具体实施例提供一种治疗癌细胞的方法，包含对有此需要的受试者施用有效量的本文所述的经修饰的t细胞或药物组合物。

5、在一个优选的具体实施例中，所述有效量可以是每剂约1×103至约1×109个细胞。

6、在一个优选的具体实施例中，所述经修饰的t细胞可以是自体的或同种异体的。

7、在一个优选的具体实施例中，所述经修饰的t细胞可衍生自周边血、脐带血，或骨髓。

8、在一个优选的具体实施例中，所述方法可进一步包含体外扩增所述经修饰的t细胞。

9、其他具体实施例提供一种培养具有nk细胞功能以及抗原呈递细胞功能的经修饰的t细胞的方法，所述方法包含

10、获得包含单核细胞的体液；

11、使所述单核细胞与包含il-2与唑来膦酸(zoledronic acid)的诱导培养基接触以获得第一培养的细胞群；

12、使所述第一培养的细胞群与包含il-2的第一培养基接触以获得第二培养的细胞群；以及

13、使所述第二培养的细胞群与包含il-2与il-12的第二培养基接触以获得第三培养的细胞群。

14、在一个优选的具体实施例中，所述单核细胞可衍生自周边血、脐带血，或骨髓。

15、在一个优选的具体实施例中，所述诱导培养基、所述第一培养基和所述第二培养基可进一步包含造血细胞培养基，优选为aim-v培养基。

16、在一个优选的具体实施例中，所述诱导培养基、所述第一培养基和所述第二培养基可进一步包含血清蛋白，优选为人类血小板裂解物。

17、在一个优选的具体实施例中，所述单核细胞可与所述诱导培养基接触约1至3天。

18、在一个优选的具体实施例中，所述第一培养的细胞群可与所述第一培养基接触约1至6天。

19、在一个优选的具体实施例中，所述第二培养的细胞群可与所述第二培养基接触约1至3天。

20、在一个优选的具体实施例中，所述方法可进一步包含在与所述第二培养基接触之后，使所述第三培养的细胞群与包含il-2、il-12和il-18的第三培养基接触以获得第四培养的细胞群。

21、在一个优选的具体实施例中，所述第三培养基可进一步包含造血细胞培养基，优选为aim-v培养基。

22、在一个优选的具体实施例中，所述第三培养基可进一步包含血清蛋白，优选为人类血小板裂解物。

23、在一个优选的具体实施例中，所述第三培养的细胞群可与所述第三培养基接触约1至3天。

24、在一个优选的具体实施例中，所述方法可进一步包含分离具有cd3hitcr γ9hitcrδ2hicxcr4hi表型的经修饰的t细胞。

25、本文所述的培养方法允许从固定量的样品(例如，10ml的血液)中分离出大量的经修饰的t细胞。

1.一种经修饰的t细胞，包含

2.根据权利要求1所述的经修饰的t细胞，进一步包含cd69dimcd11chicxcr3dim的表型。

3.根据权利要求1所述的经修饰的t细胞，进一步包含ifn-γhi的表型。

4.一种药物组合物，包含

5.一种治疗癌细胞的方法，包含

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述有效量为每剂约l×103至约l×109个细胞。

7.根据权利要求5所述的方法，其中所述经修饰的t细胞为自体的或同种异体的。

8.根据权利要求5所述的方法，其中所述经修饰的t细胞衍生自周边血、脐带血，或骨髓。

9.根据权利要求5所述的方法，进一步包含体外扩增所述经修饰的t细胞。

10.一种培养经修饰的t细胞的方法，包含

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述单核细胞衍生自周边血、脐带血，或骨髓。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述诱导培养基、所述第一培养基和所述第二培养基进一步包含造血细胞培养基。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述造血细胞培养基包含aim-v培养基。

14.根据权利要求12所述的方法，其中所述诱导培养基、所述第一培养基和所述第二培养基进一步包含血清蛋白。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述血清蛋白包含人类血小板裂解物。

16.根据权利要求10所述的方法，其中所述单核细胞与所述诱导培养基接触约1至3天。

17.根据权利要求10所述的方法，其中所述第一培养的细胞群与所述第一培养基接触约1至6天。

18.根据权利要求10所述的方法，其中所述第二培养的细胞群与所述第二培养基接触约1至3天。

19.根据权利要求10所述的方法，进一步包含在与所述第二培养基接触之后，使所述第三培养的细胞群与包含il-2、il-12和il-18的第三培养基接触以获得第四培养的细胞群。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述第三培养基进一步包含造血细胞培养基。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述造血细胞培养基包含aim-v培养基。

22.根据权利要求20所述的方法，其中所述第三培养基进一步包含血清蛋白。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述血清蛋白包含人类血小板裂解物。

24.根据权利要求19所述的方法，其中所述第三培养的细胞群与所述第三培养基接触约1至3天。

25.根据权利要求10所述的方法，进一步包含分离具有cd3hitcrγ9hitcrδ2hicxcr4hi表型的经修饰的t细胞。