一种纸条交叉联合药敏试验方法

本发明涉及一种纸条交叉联合药敏试验方法。

背景技术：

1、多重耐药菌在全球范围内的广泛流行和播散，为临床的抗感染治疗带来极大挑战，其中尤其以碳青霉烯类耐药革兰阴性杆菌为代表。碳青霉烯类抗菌药物包括亚胺培南、美罗培南和厄他培南等，是治疗多重耐药革兰阴性杆菌所致感染最有效的抗菌药物之一。随着该类药物在临床的广泛使用，碳青霉烯类耐药细菌（carbapenem-resistantorganisms, cro）的检出率呈逐年上升趋势，其中以肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌为代表。“chinet中国细菌耐药监测网”历年监测结果显示，我国临床分离肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率分别为23.1%、23%和71.5%。由于碳青霉烯类耐药菌株通常还携带有对其他抗菌药物耐药的基因，对抗菌药物呈广泛耐药甚至全耐药的特征，使临床的抗感染治疗面临无药可用的困境，导致感染患者的高病死率。多药联合药敏试验可通过两药多药组合分析不同药物之间的协同抗菌活性，在筛选针对cro菌株所致感染的精准抗感染治疗方案中发挥重要作用。但现有标准的多药联合药敏试验方案包括肉汤微量稀释棋盘法、琼脂稀释棋盘法等标准方法存在操作复杂、所需材料价格昂贵等缺点，无法在常规实验室进行开展。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种纸条交叉联合药敏试验方法，针对多重耐药革兰阴性杆菌多药联合药敏试验技术进行研究，开发常规实验室可简单操作、结果容易阅读的方法，为临床应对多重耐药细菌的抗感染精准治疗提供强有力的依据。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种纸条交叉联合药敏试验方法，包括以下步骤：

4、1）准备mueller-hinton药敏试验琼脂平板、抗菌药物a纸条和抗菌药物b纸条；

5、2）挑取新鲜纯培养菌落，制备0.5麦氏浊度菌悬液，待用；

6、3）在mueller-hinton药敏试验琼脂平板，标记区域a、b和a+b；

7、4）以无菌棉签蘸取0.5麦氏浊度菌悬液，将0.5麦氏浊度菌悬液均匀涂布于mueller-hinton药敏试验琼脂平板表面，室温下干燥15分钟；

8、5）将抗菌药物a纸条、抗菌药物b纸条、抗菌药物a纸条加抗菌药物b纸条分别贴于mueller-hinton药敏试验琼脂平板的区域a、b和a+b上，其中抗菌药物a纸条加抗菌药物b纸条采用抗菌药物a纸条和抗菌药物b纸条垂直角度交叉设置；

9、6）35℃孵育16-20小时后，阅读抗菌药物a纸条、抗菌药物b纸条、抗菌药物a纸条加抗菌药物b纸条联合后的最低抑菌浓度mic，根据部分抑菌浓度指数fic判断两药联合是否存在协同作用。

10、作为本发明进一步的方案：若部分抑菌浓度指数fic≤0.5：协同作用，提示两种抗菌药物联合后的抗菌活性显著大于各单药；若部分抑菌浓度指数fic>0.5-1：相加作用，提示两种抗菌药物联合，其抗菌活性较任一种单药稍有增加；若部分抑菌浓度指数fic>1-2：无关作用，提示两种抗菌药物的活性均不受另一种药物的影响；若部分抑菌浓度指数fic>2：拮抗作用，提示一种抗菌药物的活性被另一种抗菌药物削弱。

11、一种纸条交叉联合药敏试验方法，包括以下步骤：

12、1）准备mueller-hinton药敏试验琼脂平板、抗菌药物a纸条和抗菌药物b纸条；

13、2）挑取新鲜纯培养菌落，制备菌悬液，待用；

14、3）在mueller-hinton药敏试验琼脂平板，标记区域a、b和a+b；

15、4）以无菌棉签蘸取菌悬液，将菌悬液均匀涂布于mueller-hinton药敏试验琼脂平板表面，室温下干燥；

16、5）将抗菌药物a纸条、抗菌药物b纸条、抗菌药物a纸条加抗菌药物b纸条分别贴于mueller-hinton药敏试验琼脂平板的区域a、b和a+b上，其中抗菌药物a纸条加抗菌药物b纸条采用抗菌药物a纸条和抗菌药物b纸条垂直角度交叉设置；

17、6）经过孵育后，阅读抗菌药物a纸条、抗菌药物b纸条、抗菌药物a纸条加抗菌药物b纸条联合后的最低抑菌浓度mic，根据部分抑菌浓度指数fic判断两药联合是否存在协同作用。

18、作为本发明进一步的方案：抗菌药物a纸条和抗菌药物b纸条为含不同抗菌药物含量的药敏试验用纸条。

19、作为本发明进一步的方案：步骤4）中，室温下干燥15分钟。

20、作为本发明进一步的方案：步骤6）中，孵育的温度为35℃，孵育的时间为16h-20h。

21、作为本发明进一步的方案：菌悬液为以生理盐水制备的0.5麦氏浊度菌悬液。

22、作为本发明进一步的方案：若部分抑菌浓度指数fic≤0.5：协同作用，提示两种抗菌药物联合后的抗菌活性显著大于各单药；

23、若部分抑菌浓度指数fic>0.5-1：相加作用，提示两种抗菌药物联合，其抗菌活性较任一种单药稍有增加；

24、若部分抑菌浓度指数fic>1-2：无关作用，提示两种抗菌药物的活性均不受另一种药物的影响；

25、若部分抑菌浓度指数fic>2：拮抗作用，提示一种抗菌药物的活性被另一种抗菌药物削弱。

26、本发明的有益之处在于：提供了一种常规实验室可执行的纸条交叉联合药敏试验方法，结果易读，操作简单。

27、本发明的其他特点和优点将会在下面的具体实施方式、附图中详细的揭露。

技术特征：

1.一种纸条交叉联合药敏试验方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种纸条交叉联合药敏试验方法，其特征在于，

3.一种纸条交叉联合药敏试验方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的一种纸条交叉联合药敏试验方法，其特征在于，

5.根据权利要求3所述的一种纸条交叉联合药敏试验方法，其特征在于，

6.根据权利要求3所述的一种纸条交叉联合药敏试验方法，其特征在于，

7.根据权利要求4所述的一种纸条交叉联合药敏试验方法，其特征在于，

8.根据权利要求4所述的一种纸条交叉联合药敏试验方法，其特征在于，

技术总结
本发明涉及一种纸条交叉联合药敏试验方法，包括以下步骤，1）准备Mueller‑Hinton药敏试验琼脂平板、抗菌药物A纸条和抗菌药物B纸条；2）制备0.5麦氏浊度菌悬液；3）在Mueller‑Hinton药敏试验琼脂平板，标记区域A、B和A+B；4）以无菌棉签蘸取0.5麦氏浊度菌悬液，将0.5麦氏浊度菌悬液均匀涂布于Mueller‑Hinton药敏试验琼脂平板表面，室温下干燥15分钟；5）将抗菌药物A纸条、抗菌药物B纸条、抗菌药物A纸条加抗菌药物B纸条分别贴于Mueller‑Hinton药敏试验琼脂平板的区域A、B和A+B上，其中抗菌药物A纸条加抗菌药物B纸条采用抗菌药物A纸条和抗菌药物B纸条垂直角度交叉设置。本发明的有益效果是：提供了一种常规实验室可执行的纸条交叉联合药敏试验方法，结果易读，操作简单。

技术研发人员：胡付品,丁丽,郭燕,吴湜,韩仁如,尹丹丹,杨洋,朱德妹
受保护的技术使用者：复旦大学附属华山医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12