一种抗LILRB4单克隆抗体的制作方法

本发明涉及生物医药，特别涉及一种抗lilrb4单克隆抗体。

背景技术：

1、急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，aml)是骨髓性造血芽细胞异常增殖、影响正常造血细胞产生的血液恶性肿瘤，是白血病的一种。aml在骨髓中形成，导致血液和骨髓中异常白细胞数量增加，通常很快恶化，因此，aml是最具侵袭性和最难治疗的血液癌症之一，治疗方案也非常有限。

2、近年来，随着我国医药工业不断转型升级，国内出现了一批aml治疗的仿制药和创新药。如2019年9月，正大天晴和汇宇制药的可用于治疗aml的注射用阿扎胞苷(新型化疗药物)，同时获批生产。同时，随着国家政务改革持续推进，药品审批速度不断加快。2020年4月，药监局受理急性髓系白血病新药xospata(英文通用名：gilteritinib，中文通用名：吉瑞替尼)上市申请。

3、随着生物医药的不断发展，免疫疗法通过阻断免疫抑制信号，重新激活免疫系统功能，被认为是治疗aml的基石手段。白细胞免疫球蛋白样受体亚家族b成员4(lilrb4)作为lilrb家族成员，结构上包含两个细胞外免疫球蛋白样结构域及三个细胞内itim结构域。lilrb4在单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞等髓样抗原呈递细胞(apcs)中选择性表达。lilrb4特异性高表达在m4和m5型aml细胞上，并且高表达lilrb4的病人生存率显著降低。载脂蛋白e(apoe)结合并激活lilrb4，募集shp-2，调控核因子κb(nf-κb)信号通路，从而刺激尿激酶受体(upar)和精氨酸酶1(arg1)的表达，进一步抑制t细胞增殖，促进组织浸润。抗lilrb4抗体能够阻断lilrb4与apoe的相互作用，抑制nf-κb信号通路，降低arg1表达，从而促进t细胞增殖并减少组织浸润。

4、目前，以明生物，恩格姆生物制药公司和华夏英泰(北京)生物技术有限公司均在研发靶向lilrb4的单克隆抗体药物，目前均处在临床i期阶段。为了能够满足全球aml和慢性粒单核细胞白血病(cmml)病患需求，本发明提供了一种抗lilrb4单克隆抗体。

技术实现思路

1、本发明通过对免疫文库的筛选，得到了可以与lilrb4特异性结合且具有较高生物学活性的抗lilrb4单克隆抗体。

2、本发明具体技术方案如下：

3、本发明提供了一种抗lilrb4单克隆抗体，包括：

4、(a)重链互补决定区hcdr1，其氨基酸序列如seq id no:1所示；

5、(b)重链互补决定区hcdr2，其氨基酸序列如seq id no:2所示；

6、(c)重链互补决定区hcdr3，其氨基酸序列如seq id no:3所示；

7、(d)轻链互补决定区lcdr1，其氨基酸序列如seq id no:4所示；

8、(e)轻链互补决定区lcdr2，其氨基酸序列如seq id no:5所示；

9、(f)轻链互补决定区lcdr3，其氨基酸序列如seq id no:6所示。

10、进一步的，所述抗lilrb4单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:8所示。

11、进一步的，所述抗lilrb4单克隆抗体还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区选自鼠的igg1型、igg2a型、igg2b型或igg3型的恒定区的一种，所述轻链恒定区为氨基酸序列如seq id no:13所示的鼠源ck型的恒定区；所述igg1型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:9所示，所述igg2a型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:10所示，所述igg2b型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:11所示，所述igg3型的恒定区的氨基酸序列如seq idno:12所示。

12、进一步的，所述抗lilrb4单克隆抗体为fab、f(ab)2、fv或scfv中的一种或几种组合。

13、本发明进一步的提供了一种蛋白，所述蛋白包含所述的抗lilrb4单克隆抗体。

14、本发明进一步的提供了一种核苷酸分子，所述核苷酸分子编码所述的抗lilrb4单克隆抗体。

15、本发明进一步的提供了一种重组dna表达载体，所述重组dna表达载体包含所述的核苷酸分子。

16、本发明进一步的提供了一种转染所述的重组dna表达载体的宿主细胞，所述宿主细胞包括原核细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞；

17、优选的，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，所述哺乳动物细胞为hek293细胞、cho细胞或ns0细胞。

18、本发明还提供了一种药物，所述药物包含所述的抗lilrb4单克隆抗体。

19、本发明还提供了所述的抗lilrb4单克隆抗体在制备治疗癌症药物中的应用；

20、所述癌症包括急性髓系白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、母细胞性浆细胞样树状突细胞肿瘤、乳腺癌、肺癌或前列腺癌中的一种或多种。

21、本发明的有益效果如下：本发明提供的抗lilrb4的单克隆抗体与lilrb4抗原具有较高的结合能力，能够有效抑制lilrb4抗原与其配体复合物的结合，从而阻止下游nf-κb信号通路的激活和arg1的释放，促进t细胞增殖，及抑制组织浸润的促；此外，本发明筛选得到的抗lilrb4单克隆抗体能够用于治疗癌症，癌症包括但不限于急性髓系白血病(aml)、急性成淋巴细胞性白血病(all)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、多发性骨髓瘤(mm)、母细胞性浆细胞样树状突细胞肿瘤(bpdcn)、乳腺癌、肺癌或前列腺癌。

技术特征：

1.一种抗lilrb4单克隆抗体，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的抗lilrb4单克隆抗体，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:8所示。

3.如权利要求2所述的抗lilrb4单克隆抗体，其特征在于，还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区选自鼠的igg1型、igg2a型、igg2b型或igg3型的恒定区的一种，所述轻链恒定区为氨基酸序列如seq id no:13所示的鼠源ck型的恒定区；所述igg1型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:9所示，所述igg2a型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:10所示，所述igg2b型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:11所示，所述igg3型的恒定区的氨基酸序列如seq id no:12所示。

4.如权利要求1所述的抗lilrb4单克隆抗体，其特征在于，所述抗lilrb4单克隆抗体为fab、f(ab)2、fv或scfv中的一种或几种组合。

5.一种蛋白，其特征在于，所述蛋白包含权利要求1-4任一项所述的抗lilrb4单克隆抗体。

6.一种核苷酸分子，其特征在于，所述核苷酸分子编码权利要求1-4任一项所述的抗lilrb4单克隆抗体。

7.一种重组dna表达载体，其特征在于，所述重组dna表达载体包含权利要求6所述的核苷酸分子。

8.一种转染权利要求7所述的重组dna表达载体的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括原核细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞；

9.一种药物，其特征在于，所述药物包含权利要求1-4任一项所述的抗lilrb4单克隆抗体。

10.权利要求1-4任一项所述的抗lilrb4单克隆抗体在制备治疗癌症药物中的应用；

技术总结
本发明涉及生物医药领域，具体提供了一种抗LILRB4单克隆抗体，HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No:1、SEQ ID No:2和SEQ IDNo:3所示，LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No:4、SEQ ID No:5和SEQ ID No:6所示，本发明提供的抗LILRB4单克隆抗体与LILRB4抗原具有较高的结合能力，能够有效抑制LILRB4抗原与其配体复合物的结合，从而阻止下游NF‑κB信号通路的激活和ARG1的释放，促进T细胞增殖，及抑制组织浸润，有效用于治疗癌症。

技术研发人员：白义
受保护的技术使用者：北京东方百泰生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12